郜李彬 曹征宇 顾韵莉 周亚辉

（上海市浦东新区农业技术推广中心 201201）

东云（Echeveria agavoides Lemaire）是景天科拟石莲花属多肉植物，原产于墨西哥多州。东云具有形状锋利的叶片，其叶片形状和排列方式与龙舌兰属植物相似，因此成为了近年来逐渐流行的一类观赏植物，具有极高的观赏价值和收藏价值。目前，东云大多采用叶插和分株繁殖的方式繁殖，但存在繁殖系数低、扩繁速度慢等问题，而利用植物组织培养技术[1]，可建立东云组织培养和快速扩繁体系，对满足其市场需求具有重要的现实意义。为此，笔者进行了东云的外植体诱导技术研究试验，以期建立其无性繁殖系。现将相关试验结果报道如下。

1 材料与方法

1.1 试验材料

以东云的叶片和幼嫩花芽为外植体。

1.2 试验方法

1.2.1 消 毒

将选取的培养材料用流水冲洗3 h，在无菌操作台上用75%酒精浸泡10 s，再用无菌水清洗3遍，再用0.1%升汞浸泡振荡10 min、无菌水冲洗5次，然后将消毒好的材料于无菌滤纸上吸干水分，并置于盘中待用。

1.2.2 接种、培养基配方及培养条件

在无菌操作台上，将消毒好的外植体切割分离，其中幼嫩花芽剪切成1 cm左右的小段、叶片切成1 cm×1 cm左右的正方形小块，接种到诱导培养基中（培养基中均加入3%蔗糖和0.7%琼脂，调节pH为5.6～5.8），每瓶接种1个外植体，每个培养基配方重复10次，放入无菌培养室中培养，培养温度（20±2）℃、光照强度2 000 Lux、光照时间12 h/d。

诱导培养基配方分别为：（1）对照MS；（2）MS+BA 1.0 mg/L；（3）MS+BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L；（4）MS+BA 1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L；（5）MS+BA 1.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L；（6）MS+BA 2.0 mg/L；（7）MS+BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L；（8）MS+BA 2.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L；（9）MS+BA 2.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L；（10）MS+BA 5.0 mg/L；（11）MS+BA 5.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L；（12）MS+BA 5.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L；（13）MS+BA 5.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L；（14）MS+N AA 0.1 m g/L；（15）MS+NA A 0.5 mg/L；（16）MS+NAA 1.0 mg/L。

2 结果与分析

2.1 外植体受污染情况

据统计，16个培养基配方共160个处理，经过30 d的诱导培养后，接种东云幼嫩花芽的培养基中共有12瓶受污染，污染率为7.50%；接种东云叶片的培养基中共有96瓶受污染，污染率为60.00%。以上结果表明，东云幼嫩花芽的污染率显著低于叶片。

2.2 外植体诱导分化效果

外植体接入诱导培养基培养15 d后， 每隔7 d切割转接1次，转接3次后观察诱导效果，外植体诱导分化效果见表1。

由表1可知，东云幼嫩花芽经过36 d的培养，在培养基配方1、2、3、11、14、15、16中，所有外植体均膨大、慢慢玻璃化，无任何诱导效果；在培养基配方5、6、9、10、12、13中，所有外植体均出现膨大，但未出现愈伤组织，诱导效果不佳；在培养基配方4、7中，所有外植体均出现膨大、形成少量愈伤组织但颜色不深，有一定的诱导效果；在培养基配方8中，所有外植体均膨大、形成大量蓬松且颜色较深的愈伤组织，诱导作用较为明显。

表1 东云外植体在不同配方培养基上诱导分化效果

由表1还可知，东云叶片经36 d培养后，仅在培养基配方8中，所有外植体膨大，形成少量愈伤组织且颜色不深，有一定的诱导效果；其余培养基配方中的所有外植体均出现玻璃化现象，无任何诱导效果。

3 结论与讨论

试验结果表明：（1）东云植株的不同部位作外植体的诱导污染率不同，其中幼嫩花芽采用流水冲洗结合酒精、升汞消毒的灭菌方法，取得了较为理想的灭菌效果，污染率仅为7.50%，基本控制了污染现象，为下一步的诱导试验做好了准备；但叶片的污染率高达60%，因此不宜采用叶片作外植体进行诱导。（2）东云的不同部位作外植体的诱导分化效果不同，幼嫩花芽由于生长时间较短、组织活力较强，在多种配方的诱导培养基中形成了愈伤组织；而叶片组织活力较弱，仅在培养基配方8中零星出现少量愈伤组织，且颜色不深。（3）激素对东云外植体的诱导分化非常重要，且不同激素配比对诱导效果的影响较大。在本试验诱导过程中，以适量浓度的BA配合一定量的NAA的诱导作用最为明显，即在BA浓度为2.0 mg/L、NAA浓度为0.5 mg/L时，东云的幼嫩花芽外植体能诱导出大量蓬松且颜色较深的愈伤组织，诱导效果最佳；过高浓度（1.0 mg/L）的NAA和BA（5.0 mg/L）对东云的外植体诱导反而起到了抑制作用，仅产生少量愈伤组织且颜色不深，诱导效果一般；未添加BA的培养基诱导不出愈伤组织；空白对照中的外植体慢慢玻璃化。

综合考虑，利用东云进行组培繁殖时，应采用幼嫩花芽为外植体，且适宜培养基配方为MS+BA 2.0 mg/L +NAA 0.5 mg/L。