杨洁 曹旭蓉 林佳丽 吴春萍 赵二劳

摘 要：以大叶黄杨叶为原料，以微波辅助提取黄杨叶中黄酮和多糖，以超声波辅助提取黄杨叶中多酚，分别测定其含量，并采用清除DPPH·法评价其抗氧化活性。结果表明：大叶黄杨叶中黄酮含量为31.10mg/g；多糖含量为37.85mg/g；而多酚含量为18.81mg/g。大叶黄杨叶中黄酮、多糖和多酚清除DPPH·的IC50分别为5.45μg/mL、133.46μg/mL和2.91μg/mL，则其抗氧化能力的强弱顺序为：多酚>黄酮>多糖。大叶黄杨叶中黄酮、多糖和多酚含量较高，均具有较强的抗氧化活性，具有开发应用价值。

关键词：大叶黄杨叶；抗氧化性；黄酮；多糖；多酚

中图分类号：TS202.3 文献标识码：A DOI：10.11974/nyyjs.20180732001

我国地大物博，有极其丰富的植物资源，且大多具有药理价值，有效开发应用这些植物资源具有重要的意义。大叶黄杨（Euonyus japonicus），又名“冬青卫矛”，为卫矛属常绿灌木或小乔木，是我国许多城市中常见的绿篱树种[1]，栽培甚为普遍，资源丰富。我国《本草纲目》中记载，黄杨具有清热活血、行气解毒以及祛湿通络等药理活性[2]。现代研究表明，大叶黄杨叶中含有黄酮类成分，是其主要功能成分之一[3]。目前有关大叶黄杨叶中活性成分的研究较少。本试验提取测定大叶黄杨叶中黄酮、多糖和多酚含量，并采用清除DPPH·法评价其抗氧化活性，为合理利用大黄杨资源，充分发挥其经济价值提供依据。

1 材料与仪器

1.1 材料与试剂

材料：黄杨叶为大黄杨叶，2017年10月采集于忻州师范学院校区。自来水洗净后，恒温烘箱中45℃下烘干，药材粉碎机粉碎，过60目筛保存备用。

试剂：DPPH·购自美国Sigma公司；芦丁标准品购自上海阿拉丁生化科技股份有限公司；其余无水乙醇、葡萄糖、没食子酸、苯酚、碳酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、亚硝酸钠，以及福林酚等试剂，均为国产分析纯。

1.2 仪器

主要仪器见表1。

2 试验方法

2.1 黄杨叶预处理

将粉碎的黄杨叶粉按1：15加入石油醚进行脱脂12h后，抽滤，滤渣置于50℃恒温干燥箱中烘干，备用。

2.2 黄杨叶中黄酮、多糖和多酚的提取

2.2.1 黄杨叶中黄酮的提取

精密称取经预处理的黄杨叶粉1.0g，参考文献[4]的方法，稍作改动，以体积分数为75%的乙醇为提取剂，在料液比为1：25（g：mL）、微波功率为390W的条件下，提取10min，提取液抽滤，收集滤液，用去离子水定容到100mL容量瓶中，得到黄杨叶黄酮提取液。

2.2.2 黄杨叶中多糖的提取

精密称取经预处理的黄杨叶粉1.0g，参考文献[5]的方法，稍作改动，以去离子水为提取剂，微波功率455W，料液比1：30（g：mL），微波提取8min，提取次数为2次。抽滤后合并滤液，并用去离子水定容到100mL容量瓶中，得到黄杨叶多糖提取液。

2.2.3 黄杨叶中多酚的提取

精密称取经预处理的黄杨叶粉1.0g，参考文献[6]的方法，稍作改动， 70%的乙醇为提取剂，超声功率320W，料液比1：25（g：mL），在50℃下提取30min，提取液抽滤，用去离子水定容到100mL，得到黄杨叶多酚提取液。

2.3 黄杨叶中黄酮、多糖和多酚含量的测定

2.3.1 黄杨叶中黄酮含量测定

以芦丁为标准对照品，采用硝酸铝比色法对黄杨叶黄酮进行测定。配制浓度为0.4mg/mL的芦丁标准品溶液，参考文献[7]方法，测定并绘制芦丁标准曲线。精密移取1.0 mL黄酮提取液于10 mL比色管中测定其吸光度，并由回归方程计算黄杨叶中黄酮含量。

2.3.2 黄杨叶中多糖含量的测定

以葡萄糖为标准对照品，采用硫酸-苯酚法对黄杨叶中多糖进行测定。配制浓度为0.24 mg/mL的葡萄糖对照品溶液，参考文献[5]的方法，测定并绘制葡萄糖标准曲线。精密移取0.5mL多糖提取液于10mL比色管中测定其吸光度，并由回归方程计算黄杨叶中多糖含量。

2.3.3 黄杨叶中多酚含量的测定

以没食子酸为标准对照品，采用福林酚法对黄杨叶中多酚进行测定。配制浓度为0.1 mg/mL的没食子酸对照品溶液，参考文献[6]的方法，测定并绘制没食子酸标准曲线。精密移取0.5mL多酚提取液于10mL比色管中测定其吸光度，并由回归方程计算黄杨叶中多酚含量。

2.4 黄杨叶中黄酮、多糖和多酚抗氧化活性测定

本试验参考文献[7]采用清除DPPH·法评价黄杨叶黄酮、多糖和多酚的抗氧化活性。准确移取质量浓度为0.10 mg/mL的DPPH·溶液2.0mL，置于10mL比色管中。再加入一定量的黄酮提取液，然后用去离子定容到5mL，摇匀，避光放置30min，在517nm最大波长下，分别测定其吸光度。按照公式：清除率（%）=[1-（A1-A2）/A0]×100，计算其对DPPH·的清除率。其中：A0为只加DPPH·溶液的吸光度；A1为加DPPH·溶液和黄酮提取液的吸光度；A2为只加黄酮提取液的吸光度。

按同样方法分别测定多糖、多酚对DPPH·的清除率。

3 结果与分析

3.1 黄杨叶中黄酮、多糖和多酚含量

按照试验方法，得芦丁标准曲线回归方程为：A=10.533c-0.0041，R2=0.9994，线性范围为0 ～ 0.072mg/mL；

得葡萄糖标准曲线回归方程为：A=35.048c-0.0478，R2=0.9992，线性范围为 0 ～ 0.0288mg/mL；得没食子酸标准曲线回归方程为A=55.768c+0.0149，R2=0.9991，线性范围为 0 ～ 0.014mg/mL。测得大叶黄杨叶中黄酮、多糖和多酚含量分别为31.10mg/g、37.85mg/g和18.81mg/g。可见，大叶黄杨叶中黄酮、多糖和多酚含量均较高，且多糖含量>黄酮含量>多酚含量。表明大叶黄杨叶具有开发价值。

3.2 黄杨叶中黄酮、多糖和多酚的抗氧化活性

按照试验方法，分别测定黄杨叶中黄酮、多糖和多酚对DPPH·的清除率，结果见图1至3。可见，无论是黄酮、多糖还是多酚，随着浓度的增大，其对DPPH·的清除率也随之增大，具有明显的量效关系。计算知黄杨叶中黄酮清除DPPH·的IC50为5.45μg/mL；黄杨叶中多糖清除DPPH·的IC50为133.46μg/mL；黄杨叶中多酚清除DPPH·的IC50为2.91μg/mL。表明黄杨叶中黄酮、多糖和多酚均具有较强的抗氧化活性，且多酚的抗氧化活性最强。

4 结论

黄杨叶中黄酮、多糖和多酚含量分别为31.10mg/g、37.85mg/g和18.81mg/g。上述3种成分清除DPPH·的IC50值分别为：5.45μg/mL、133.46μg/mL和2.91μg/mL。結果表明黄杨叶中具有开发研究价值，值得进一步深入研究。

参考文献

[1]张亮，曹丛华，任荣珠，等.大叶黄杨叶绿素的提取及稳定性研究[J].安徽农业科学，2010，38（17）：8923-8925，8943.

[2]洪军，刘俊红，管玉周.超声波辅助提取大叶黄杨总黄酮的工艺及其抗氧化活性研究[J].食品工业科技，2014，35（13）：266-270.

[3]张雪辉，唐蕊.大叶黄杨不同生长期叶片中类黄酮含量的测定[J].邢台学院学报，2017，32（02）：183-184.

[4]杨喜花，陈敏，张华珺，等.微波法提取沙棘叶总黄酮的工艺研究[J].中草药，2006（4）：535-537.

[5]陈义勇，冯燕红.微波辅助提取银杏叶多糖工艺及其体外抗氧化活性研究[J].食品科学，2012，33（6）：24-28.

[6]陈树俊，胡洁，王振文，等.超声波辅助响应面法提取藜麦多酚及抗氧化性研究[J].山西农业科学，2016，44（11）：1708-1714，1737.

[7]王妮，闫唯，李佳，等.温度对旱柳叶黄酮提取率及抗氧化活性的影响[J].农业与技术，2017，37（23）：5-7.

作者简介：杨洁（1987-），女，博士，讲师，从事天然产物活性成分研究。