李正辉，杨会祥，李 薇，艾洪莲，何 隽

(中南民族大学 药学院，武汉430074)

石蒜科石蒜属植物黄花石蒜(Lycorisaurea)又名忽地笑，生长在阴暗潮湿的斜坡和石缝中[1]，为多年生草本植物，主要分布在日本、缅甸以及中国的湖北、湖南、广西、云南、广东、福建、四川等地海拔600～2300 m的地区. 黄花石蒜为传统外用良药，其鳞茎具有清热解毒、散结消肿等功效，可用于治疗肿毒疔疮、毒蛇咬伤、风湿性关节炎等症. 目前对黄花石蒜化学成分的研究，主要集中在生物碱方面. 文献资料显示，黄花石蒜中含有多种类型的生物碱[2，3]，其中石蒜碱(lycorine)为重要的抗癌成分，对多种癌细胞具有较好的抑制作用[4-6]. 为进一步探究黄花石蒜鳞茎的化学成分，本研究利用现代天然药物化学手段，对产于湖北的黄花石蒜鳞茎进行生物碱类成分研究.

1 实验部分

1.1 样品、试剂和仪器

黄花石蒜(L.aurea)的鳞茎于2017年8月采自湖北省大洪山，由中南民族大学药学院艾洪莲博士鉴定，标本存放于中南民族大学药学院.

熔点由四川大学科仪厂生产的XPC-1 型显微熔点仪测定，温度未校正，旋光在 Horiba SEPA-300上测定，红外由Bruker Tensor 27测定，核磁共振由Bruker AM-400或DRX-500测定，内标为TMS，化学位移(δ)的单位是ppm，偶合常数(J)的单位为Hz，EI-MS由Thermo Finnigan Trace DSQ 质谱仪测定，HR-FAB-MS 由VG Autospec-3000质谱仪测定.

柱层析硅胶 (200～300 目)、薄层层析硅胶(GF254)和硅胶H由青岛海洋化工厂生产，Saphadex LH-20为Pharmcia公司产品，反相硅胶RP-18由Merck公司生产，显色方法为254及365 nm紫外荧光，10%硫酸乙醇溶液或Dragendorff试剂处理加热显色.

1.2 提取和分离

黄花石蒜鳞茎样品8 kg经自然干燥后粉碎，用工业乙醇室温提取(3次，每次24 h)后过滤. 浓缩滤液至无醇残留后加入1%的盐酸溶液调节pH值为3，加水定容至3 L. 用乙酸乙酯等体积萃取两次、分馏，水层用10%氨水调节pH值为9，再用等体积乙酸乙酯萃取两次、分馏，回收乙酸乙酯层后浓缩得生物碱提取物总浸膏48 g. 用60 g硅胶拌样以1.5 kg硅胶柱层析，氯仿-丙酮梯度洗脱，用TLC进行检测，合并相同馏分，得到4个馏分.

第1馏分，15 g硅胶拌样后以500 g硅胶柱层析，石油醚∶丙酮(15∶1～5∶1)洗脱，经反复纯化，得到化合物4(7 mg)和5(11 mg).

第2馏分，15 g硅胶拌样后以400 g硅胶柱层析，氯仿∶丙酮(12∶1～5∶1)洗脱，此后进行硅胶常压柱层析，以石油醚/丙酮，氯仿/丙酮以及氯仿/甲醇等洗脱系统反复纯化，得到化合物1(12 mg)和2(8 mg).

第3馏分，20 g硅胶拌样后以600 g硅胶柱层析，氯仿∶甲醇(10∶1～5∶1)洗脱，此后进行硅胶常压及中压柱层析，以氯仿/丙酮、氯仿/甲醇以及甲醇/水等洗脱系统反复纯化，得到化合物3(12 mg).

第4馏分，10 g硅胶拌样后以300 g硅胶柱层析，氯仿∶甲醇(8∶1～2∶1)洗脱，此后进行硅胶常压、硅胶中压以及凝胶柱层析，以氯仿/丙酮、氯仿/甲醇以及甲醇/水等洗脱系统反复纯化，得到化合物6(48 mg).

2 结果与讨论

经鉴定，化合物1～6分别为： 2,3,9,12-tetramethoxyberbine(1)、tetrahydropalmatine (2)、isocorypalmine (3)、trisphaeridine (4)，4,5-dehydroanhydroly- corine(5)、lycorine(6). 化合物结构如图1所示.

图1 化合物1～6的结构Fig.1 Structures of compounds 1-6

2,3,9,12-Tetramethoxyberbine(1):C21H25NO4; 无色油状;1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ:6.88(1H, s, H-4), 6.82(2H, overlap, H-10 and H-11, each 1H),6.67(1H,s,H-1),3.81(3H,s,OMe),3.78(6H,s,OMe × 2),3.76(3H,s,OMe); ESI-MSm/z:356 [M + H]+. 以上波谱数据与参考文献[7]一致.

Tetrahydropalmatine(2):C21H25NO4; 白色粉末;1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ:6.87(1H,d,J=8.0 Hz,H-12),6.78(1H,d,J= 8.0 Hz,H-11),4.23(1H,d,J= 15.5 Hz,H-8b),3.89(3H,s,OMe),3.87(3H,s,OMe),3.85(6H,s,OMe × 2); ESI-MSm/z356 [M + H]+. 以上波谱数据与参考文献[8]一致.

Isocorypalmine(3):C20H23NO4; 白色粉末;1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ:6.79(1H,d,J= 8.0 Hz,H-11),6.72(1H,d,J= 8.0 Hz,H-12),6.72(1H,s,H-1),6.62(1H,s,H-4),3.89(3H,s,OMe),3.87(3H,s,OMe),3.80(3H,s,OMe);13C NMR(100 MHz,CDCl3)δ:147.4(s),146.4(s),146.4(s),143.2(s),129.4(s),127.8(s),127.0(s),126.5(s),124.7(d),114.3(d),111.1(d),108.3(d),60.5(q),59.3(d),56.0(q),55.7(q),53.8(t) 51.5(t),36.1(t),28.9(t). 以上波谱数据与参考文献[8]一致.

Trisphaeridine(4):C14H9NO2; 无色晶体(Me2CO);1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ:9.10(1H,s,H-6),8.37(1H,d,J= 8.0 Hz,H-1),8.15(1H,d,J= 8.0 Hz,H-4),7.91(1H,s,H-7),7.69(1H,t,J= 8.0 Hz,H-3),7.63(1H,t,J= 8.0 Hz,H-2),7.34(1H,s,H-10),6.18(2H,s,OCH2O); ESI-MSm/z:224 [M + H]+. 以上波谱数据与参考文献[9]一致.

4,5-Dehydroanhydrolycorine(5):C16H11NO2; 白色粉末;1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ:8.02(1H,d,J= 3.6 Hz,H-12),7.97(1H,s,H-7),7.90(1H,d,J= 8.0 Hz,H-1),7.73(1H,d,J= 8.0 Hz,H-3),7.65(1H,s,H-10),7.44(1H,t,J= 8.0 Hz,H-2),6.88(1H,d,J= 3.6 Hz,H-11),6.15(2H,s,OCH2O),1.22(2H,br s,H-6); ESI-MSm/z:250 [M + H]+. 以上波谱数据与参考文献[10]一致.

Lycorine(6):C16H17NO4; 无色晶体(MeOH);1H NMR(400 MHz,DMSO-d6)δ:6.79(1H,s,H-10),6.66(1H,s,H-7),5.94 and 5.92(each 1H,s,OCH2O),5.35(1H,br s,H-3);13C NMR(100 MHz,DMSO-d6)δ:145.7(s,C-8),145.2(s,C-9),141.7(s,C-4),129.7(s,C-6a),129.6(s,C-10a),118.5(d,C-3),107.0(d,C-10),105.1(d,C-7),100.6(t,OCH2O),71.7(d,C-1),70.2(d,C-2),60.8(d,C-4a),56.7(t,C-6),53.3(t,C-12),40.2(d,C-10b),28.1(t,C-11); ESI-MSm/z:288 [M + H]+. 以上波谱数据与参考文献[11]一致.