陈雪 胡又 谢颖 王莹

【摘要】目的：明确幽门螺杆菌（H.pylori）感染和高盐饮食对蒙古沙土鼠胃黏膜Trefoil factor 2 （TFF2）表达的影响。方法：用80只MGs建立H.pylori感染的胃疾病模型。免疫组化检测TFF2的表达。结果：成功建立H.pylori感染的MGs模型，免疫组化结果显示，H.pylori+高盐饮食组中，25% （4/16）的MGs为TFF2高表达，明显低于H.pylori组61%（11/18）。结论：高盐饮食会降低H.pylori诱导的MGs胃黏膜TFF2的表达。

【关键词】TFF2；幽门螺杆菌；高盐饮食；胃疾病；蒙古沙土鼠

【中图分类号】R5

【文献标识码】A

【文章编号】2096-5249（ 2018） 03-007-02

前言

胃疾病可有多种因素引起，如H.pylori，高盐等。H.pylori感染可导致多种胃疾病，如浅表性胃炎，萎缩性胃炎、胃溃疡等[1，2]。研究表明，高盐饮食可加剧H.pylori诱导的胃疾病[3-6]。

TFF2主要表达在颈粘液细胞、深窦腺细胞和十二指肠Brunner腺中，可对胃黏膜起到保护作用[7-9]。有研究表明， H.pylori相关性胃疾病中，TFF2表达水平高于非H.pylori相关性胃疾病[10]，肠化生、异型增生以及胃癌组织中TFF2的表达依次减少[11]。但在H.pylori感染和高盐饮食这两种因素同时存在时，TFF2表达情况如何尚未见报道。

本研究通过检测胃黏膜TFF2表达水平以明确H.pylori感染和高盐饮食联合作用对TFF2表达的影响。

1 实验材料和方法

1.1 动物和H.pylori菌株

选用6w雄性SPF级MGs80只，随机分4组：对照组，H.pylori组，高盐饮食组和H.pylori+高盐饮食组，各20只。所有MGs在辽宁千一测试评价科技发展有限公司的屏障系统内饲育管理。

本实验中，选用的H.pylori，NCTC11637，由辽宁千一测试评价科技发展有限公司提供。

1.2 H.pylori接种和高盐饮食处理的实验方案

H.pylori组和H.pylori+高盐饮食组动物灌胃给予Iml的菌株悬浮液（1×108 CFU/ml），对照组和高盐饮食组灌胃给予Iml的生理盐水，每天1次，连续3天。然后，对照组及H.pylori组动物正常饮食，高盐饮食组和H.pylori+高盐饮食组其食物中掺入10%食用盐粉末。52周后，将MGs解剖并观察。

1.3 病理组织学诊断和H.pylori的组织学鉴定

HE结果的诊断标准参照悉尼法，由一位病理专家诊断，后由另一位专家盲法阅片。

采用Warthin-Starry银染（北京雷根生物技术有限公司）鉴定胃组织H.pylori的感染。

1.4 免疫组织化学染色

采用sP试剂盒（福州迈新生物技术开发有限公司），用TFF2抗体（Abcam）免疫组化染色。室温下，过氧化酶阻断剂孵育20min；正常非免疫动物血清（羊）孵育25min；TFF2抗体孵育1小时；生物素标记的二抗孵育lOmin；链菌霉抗生物素一过氧化物酶孵育lOmin；最后DAB显色。

1.5 统计学分析

采用SPSS19.0统计分析。HE结果和TFF2表达均采用Fisher确切概率法。p<0.05有统计学差异。

2 实验结果

2.1 成功建立H.pylori感染的MGs模型，此外，H.pylori+高盐饮食组中胃疾病的发病率明显增加

MCs接种52w后，共存活73只（对照组20只；H.pylori组18只；}L pylori+高盐饮食组16只；高盐饮食组19只）。

通过Warthin-Starry银染，镜下可见胃组织中，H.pylori位于胃黏膜表面粘液层、胃小凹中，呈黑色，弯曲状或短杆状菌（图l，40×）。

HE染色顯示，正常胃黏膜排列整齐，结构正常（图2A，lOx）。对照组中可见浅表性胃炎3例（图2B，10×）；H.pylori组中萎缩性胃炎1例（图2C，20×），浅表性胃炎7例；高盐组出现浅表性胃炎5例；H.pylori+高盐饮食组中出现胃溃疡3例（图2D，10×），浅表性胃炎8例，萎缩性胃炎2例。H- pylori+高盐饮食组（13/16）胃疾病的发病率明显高于H.pylori组（8/18） （P< 0.05）。

2.2 H.pylori感染会使TFF2表达上调，然而，高盐饮食会降低H.pylo ri感染诱导的MGs胃黏膜TFF2的表达。

通过免疫组化分析不同组间TFF2的表达水平。其评分标准为：染色范围：0（0%），l（O-lO%），2（10-50%），3（50-100%）；染色强度：O（无色），1（淡黄色），2（棕黄色），3（棕褐色）。每个样本的得分是染色强度和染色范围的乘积。0-3分为低表达（图3A，40×），4-9分为高表达（图3B，40x）。

对照组中，15%（ 3/20）为TFF2高表达；H.pylori组中，61%（ 11/18）为TFF2高表达，明显高于对照组（P<0.05）；高盐饮食组中，21%（4/19）为TFF2高表达，明显低于H.pylori组（P<0.05），但与其它组相比无统计学差异（P> 0.05）；H.pylori+高盐饮食组中，25%（4/16）为TFF2高表达，明显低于H.pylori组（P<0.05），但与其它组相比无统计学差异（P>0.05）。其中3例胃溃疡TFF2均为低表达。

3 讨论

本研究成功建立了H.pylori长期慢性感染的胃模型。HE染色显示，在H.pylori+高盐饮食组胃疾病发病率高于H.pylori组，且胃溃疡只发生在此组，与H.pylori组相比，虽无统计学差异，但不难看出有加重趋势。因此，可以推断高盐饮食可加剧H.pylori引起的胃疾病。

我们还通过免疫组化检测不同组TFF2的表达。TFF2是胃黏膜分泌的小分子多肽，具有保护修复作用【12】。组化结果显示，H.pylori组中TFF2表达明显高于对照组。这表明H.pylori长期慢性感染会刺激TFF2表达增加，这与Kubota等人【10】在人组织中的研究相一致。H.pylori+高盐饮食组中，胃黏膜TFF2的表达水平明显低于H.pylori组，这也提示高盐饮食会使H.pylori感染诱导的TFF2表达下降，这一发现在本研究中被首次提出。Michelis等人发现，在CagA（cytotoxin-associated geneA）阳性的H.pylori相关性CAG（chronic active gastritis）中，胃窦部TFF2表达明显下降【13】。另外，高盐可促进H.pylori的CagA表达水平上调【14】。本研究中，选用了CagA阳性的H.pyloriNCTC11637菌株。我们推测，高盐饮食之所以会下调H.pylori诱导的胃黏膜TFF2表达水平，是因为在高盐诱导下，CagA毒素分泌增加所致，但具体机制需要进一步深入研究。

总之，本研究显示，H.pylori感染会使TFF2表达上调，但高盐饮食会降低H.pylori感染的MGs胃黏膜TFF2的表达。这一研究结果首次明确了H.pylori感染和高盐饮食联合作用对MGs胃黏膜TFF2表达的影响。

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