姜煜琪

摘 要：目的：建立检测原料药格列喹酮残留溶剂检定方法并建立其检验方法学。方法：本次测定使用Agilent 7890A气相色谱仪，J&W; Scientific DB-624毛细管色谱柱和J&W; Scientific HP-INNOWax毛细管色谱柱，氢火焰离子化检测器，以顶空进样和手动进样法通过外标法测定格列喹酮中相关工艺残留溶剂。结论：该方法应用合理、准确可靠，采用外标法分别进样分析，精密度和重复性良好，可以应用于原料药格列喹酮内含的各类残留溶剂的测定，并应用于残留溶剂方面的质量控制。

关键词：格列喹酮，残留溶剂，方法学

格列喹酮是高活性胰岛β细胞激动剂，具有较强的选择性，在第二代口服磺脲类降糖药中应用广泛。由于其绝大部分由胆汁代谢排除，故适用于肝、肾功能不全及具有相关代谢障碍的糖尿病患者，尤其适用于Ⅱ型糖尿病合并肾病的治疗，药效安全稳定。[1]本次研究通过一系列实验，建立了完整的格列喹酮残留溶剂检验方法，实验结果表明，本方法重复性好、准确可靠，适用于现有工艺过程中格列喹酮残留溶剂的质量控制。

一、仪器及实验样品

Agilent 7890A气相色谱仪，Agient 7964E顶空进样器（美国Agilent科技有限公司）；Ms204s/01化学分析天平（瑞士Mettler Toledo公司）。

原料药格列喹酮（某公司，T1708001，T1708002，T1709003），色谱纯甲醇、乙醇、正丙醇、二甲苯、环己烷、N，N-二甲基甲酰胺，二甲基亚砜。

二、实验过程与实验结果

2015年版《中国药典》（四部）附录[2]中确定气相色谱法为测定残留溶剂的首选方法，本文选用气相色谱法对工艺内残留溶剂进行测定。

（1）仪器硬件及条件选择

为保证实验的易操作性及各残留成分检测的准确性，本实验选用J&WScientificDB-624;毛细管色谱柱（6%氰丙基苯基-94%二甲基硅氧烷固定液，30m×0.53mm，膜厚3μm，中等级性）测定甲醇、乙醇、正丙醇、环己烷，溶剂采用二甲基亚砜进行试验，按毛细管柱顶空进样系统程序升温法如下条件进行测试程序：

选择火焰离子化检测器（FID）和J&WScientificHP-INNOWax;毛细管色谱柱（聚乙二醇固定液，30×0.53，膜厚1μm，强极性）测定二甲苯和N，N-二甲基甲酰胺，按毛细管柱手动进样系统程序升温法如下条件进行测试程序：

测得出峰时间：DB-624色谱柱中甲醇2.60min，乙醇3.48min，正丙醇4.05min，环己烷8.10min，溶剂二甲基亚砜15.58min。HP-INNOWax色谱柱中二甲苯11.3min-12.4min，N，N-二甲基甲酰胺15.25min，溶剂二甲基亚砜19.21min。上述各峰出峰时间合理易辨认，分离度符合实验要求，溶剂不干扰待测溶剂出峰，适用于本次實验的要求。

（2）样品和对照品配制

以二甲基亚砜为溶剂配制甲醇、乙醇、正丙醇、环己烷100μg/mL的混合溶液，精密量取混合对照品A置顶空瓶中，密封瓶口，即得对照品溶液A。以二甲基亚砜为溶剂配制二甲苯100μg/mL，N，N-二甲基甲酰胺50μg/mL的混合溶液，即得对照品溶液B。

精密称定本品适量，置50mL容量瓶中，加入适量二甲基亚砜胺振摇使溶解，冷却后定容，配制成40mg/ml的样品溶液，即得供试品溶液b。精密量取适量置于顶空瓶内，密封瓶口，即得供试品溶液a。

（3）条件推定

①升温程序：调整色谱柱DB-624柱箱升温程序为：起始柱温40℃，保持10min，以40℃的速率升至180℃，保持3分钟。调整色谱柱HP-INNOWax柱箱升温程序为：起始柱温为60℃，以每分钟10℃的速率升至180℃，保持3分钟，再以每分钟50℃的速率升至230℃，保持3分钟。

②进样口条件：原料药格列喹酮在高温下稳定，故确定顶空进样和手动进样进样口温度均为200℃，分流比1：10避免色谱柱超载同时保证实验稳定性。

③检测器条件：在200℃，250℃，300℃下分别测定样品残留溶剂，其中250℃以上温度对实验重复性没有明显影响，故确定检测器温度为250℃。

④顶空进样器条件：采用通用条件85℃，加热时间30min。经测定不影响实验测定，可以满足实验要求。

（4）方法学考察

①线性测试：按照“2.2”项下要求分别配制相对浓度为50%，80%，100%，150%，200%的对照品溶液，按照“2.3”项下推定条件分别进样并记录色谱图，通过计算色谱图甲醇、乙醇、正丙醇、环己烷、二甲苯、N，N-二甲基甲酰胺峰面积进而计算各组分线性常数。结果表明上述对照品组分在实验范围内均成线性比例，各组分线性常数k>0.98，符合实验要求。

②重复性测试：按照“2.2”项下要求配制对照品溶液，按照“2.3”项下推定条件连续进样12针，分别计算12针中各对照品成分峰面积的RSD%。结果表明上述各对照品组分RSD%<1%，符合实验要求。

③精密度测试：取原料药样品，每份样品分为6份，按照“2.2”项下要求配制对照品溶液，将6份样品各连续测定6次，同时安排两名实验员按照“2.3”项下推定条件进行平行实验，分别计算两批样品中各对照品峰面积平均值、含量平均值及上述两者的RSD%，再将两名实验员的得出各项结果进行比较计算，得出两者计算结果的RSD%。结果表明上述两批样品中各组分的峰面积平均值、含量平均值及上述两者的RSD%均符合限度要求，不同实验员所得结果间的RSD%小于允许值，符合实验要求。

（5）实际测定

取原料药格列喹酮3批，按照“2.2”项下要求配制对照品溶液，按照“2.3”项下条件分别进样，分别记录色谱图中各对照成分峰面积并计算其残留量。结果表明3批样品可以正常检验，各种对照品残留量均符合规定要求。

三、总结

气相色谱法是测定残留溶剂的药典首选方法，该方法具有易于操作、重复性好、精密度高等诸多特点。本文通过实验参数筛选和方法学研究，确定了在现有工艺流程中各类可能残留溶剂的检验参数，并通过实际实验加以确认，证明了该方法具有准确、简便、重复性好等优点，现已应用于本原料药的质量控制实验中。

参考文献：

[1]格列喹酮.医学百科[引用日期2018-7-10]

[2]国家药典委员会.2015年版《中国药典》（四部）附录 中国医药科技出版社