高效液相色谱-串联质谱法测定猪肉中的盐酸克伦特罗

2018-08-20

现代食品 2018年13期

（蚌埠产品质量监督检验研究院，安徽蚌埠 233000）

盐酸克伦特罗（CL）又称“瘦肉精”，属于β-兴奋剂[1]，具有舒张支气管、改善通气，舒张和松弛子宫平滑肌的作用，被用作促生长饲料添加剂[2]。但不法分子为了追求经济效益，将其应用到了动物身上，发生了一系列人类“瘦肉精”中毒事件。《食品中可能违法添加的非食用物质和易滥用的食品添加剂名单（第四批）》（整顿办函〔2010〕50号）将CL列入违法添加的非食用物质[3]。因此，寻找一种有效的CL检测方法具有重要意义。

目前，用于检测CL的方法主要有生物传感技术、高效液相色谱法（HPLC）、气相色谱/质谱联用（GC/MS）等[4-5]。生物传感技术仅可用于检测尿液、血清和水溶液中的CL残留，检测范围有限且灵敏度不高。HPLC耗时长，普通的紫外检测器对低浓度CL检测的假阳性率高、灵敏度低[6]。GC/MS法需要经过一系列分离纯化，操作麻烦[7]。本文介绍了液相色谱-质谱法检测CL，具有简单、快速、准确的特点，且适用于大批量样品的测定。

1 实验部分

1.1 仪器和设备

高效液相色谱-串联质谱联用仪（Agilent 1290+6460），电子天平，旋涡混合器，离心机，氮吹仪，pH计，超声波发生器。

1.2 试剂和材料

甲醇，液相色谱纯；乙腈，液相色谱纯；0.2 mol/L乙酸铵缓冲溶液，15.47 g乙酸铵溶解于1 L水中，用适量乙酸调节pH至5.2；甲酸水溶液，2%；氨水甲醇溶液，5%；高氯酸，分析纯；乙酸乙酯；饱和氢氧化钠溶液；MCX阳离子交换柱（60 mg/3 mL，使用前依次用3 mL甲醇和3 mL水活化）；盐酸克伦特罗标准储备液（100 μg/mL）；同位素内标物，盐酸克伦特罗-D9；同位素内标储备液，用甲醇配制成100 μg/mL的标准贮备液；同位素内标工作液，将上述同位素内标储备液用甲醇进行适当稀释。

1.3 色谱条件

色谱柱：Agilent SB-C18（2.1 mm×50 mm，1.8 μm），流速0.3 mL/min，进样量5 μL；柱温为30 ℃。流动相：A=水；B=乙腈。梯度淋洗，见表1。

表1 梯度淋洗表

1.4 质谱条件

干燥器流速，12 L/min；雾化气，22.68 kg；脱溶剂气温度，350 ℃；电离方式，ESI+；碰撞气，高纯氮气；其他质谱参数，见表2。

表2 盐酸克伦特罗主要参考质谱参数表

1.5 样品制备

1.5.1 样品提取

称取2 g左右猪肉样品于50 mL离心管中，加50 μL 400 μg/L的内标工作液和10 mL乙酸铵缓冲溶液于待测样品中，加盖用旋涡混合器混匀，超声20 min，离心8 min（10 000 r/min）。倒出所有上清液于另一个50 mL离心管中，加460 μL高氯酸，漩涡混匀后放置10 min，加入饱和氢氧化钠调节pH在9.5左右，加15 mL乙酸乙酯，漩涡混匀后离心5 min（6 000 r/min）。

转移全部有机相，在50 ℃水浴下用氮气将其吹干。加2%甲酸水溶液，旋涡混合均匀，使残渣充分溶解后备用。

1.5.2 样品净化

将阳离子交换柱连接到真空过柱装置。将上述残渣溶液上柱，依次用3 mL 2%甲酸水溶液、3 mL甲醇洗涤柱子并彻底抽干。最后用4 mL 5%氨水甲醇溶液洗脱柱子上的待测成分。洗脱液在50 ℃水浴下氮气吹干。

准确加入2 mL 10%乙腈水溶液，旋涡混匀，过滤膜供液相色谱-串联质谱测定。

2 结果与讨论

2.1 实验条件的优化

流动相比例对峰形有显著影响。在这个实验中，选择用水和乙腈作为流动相，并选择梯度淋洗，当水与乙腈的比为95∶5时出峰不稳定且峰形不好，当选择这个实验中的梯度淋洗后，出峰时间稳定，且避免了杂质峰的干扰。在最佳色谱条件下，标准品的色谱图、质谱图分别如图1、2所示。

图1 标准品色谱图

图2 标准品质谱图

溶剂的选择对峰形的影响也比较显著。当选择甲醇或乙腈作为溶剂时，峰形杂乱、响应值低，甚至在低浓度时不出峰。在这个实验中，选择10%乙腈水溶液作为溶剂，峰形稳定且灵敏度高。

2.2 液相色谱-串联质谱法测盐酸克伦特罗分析性能

在这个实验中，盐酸克伦特罗的信号强度随着浓度的增大而增大，如图3（a）所示。以盐酸克伦特罗的含量和组分色谱峰面积作标准曲线，从图3（b）可以看出，盐酸克伦特罗的色谱峰面积跟其浓度的大小成正比例关系。在1～20 ng/mL，色谱峰面积（y）与盐酸克伦特罗浓度（x）呈线性关系，检出限为0.33 ng/mL（信噪比为3）。线性回归方程y=1.114x-0.012，相关系数为0.999 5。由此可见，液相色谱-串联质谱法检测盐酸克伦特罗具有良好的分析性能。