甄小龙，贺沙沙*，吴丽萍

(甘肃中医药大学附属医院 1.药学部； 2.儿科，甘肃 兰州 730010)

婴幼儿腹泻是指发生于婴幼儿期的一种胃肠道功能紊乱综合征。由于婴幼儿胃肠道、肝肾功能及免疫功能等发育尚未成熟，容易受各种细菌、病毒感染而引起腹泻，其中以轮状病毒(rotavirus，RV)腹泻最为常见[1]。感染RV的婴幼儿主要临床表现为发热、呕吐、腹泻及粪便呈黄色水样性等，严重者会发生水电解质平衡紊乱及致命性脱水，威胁患儿身体健康及生命安全。目前，对于该病尚无特效治疗方法或药物[2]。微生态疗法可有效改善腹泻患儿的肠屏障功能及肠道菌群，治疗腹泻[3]。为探讨微生态疗法对婴幼儿RV腹泻的治疗效果，本研究纳入RV腹泻患儿150例，以其中采用常规西药治疗的75例RV腹泻患儿为对照，对另外75例RV腹泻患儿采用微生态疗法进行治疗，比较两者疗效，同时分析不同治疗方法对患儿免疫功能的影响。

1　材料与方法

1.1　材料

1.1.1一般资料：选择2016年9月至2017年7月甘肃中医药附属医院收治的RV腹泻患儿150例，所有患者均符合《实用儿科疾病诊疗手册》中小儿腹泻的诊断标准[4]，且RV抗原均呈阳性。将150例患儿随机分为对照组和实验组，各75例。实验组中男44例，女31例；年龄5个月～2岁，平均(1.6±0.3)岁；病程15 h～3 d，平均(1.8±0.6)d；对照组中男40例，女35例；年龄6个月～2岁，平均(1.7±0.5)岁；病程12 h～3 d，平均(1.7±0.9)d。两组患儿在性别、年龄及病程方面无差异，有可比性。纳入标准：1)粪便常规培养及致病性肠杆菌培养呈阴性；2)就诊前3个月未曾使用微生态制剂及抗生素治疗。排除标准：1)非RV感染的腹泻患儿；2)伴有严重并发症的患儿。本研究获医院伦理委员会批准，所有患儿家属均知情同意。

1.1.2主要试剂：RV快速检测试剂盒(R&D，深圳子科生物科技有限公司)；CD3 (FITC)/CD4 (PE)/CD8 (Cy5-PE)荧光单克隆抗体试剂盒(Thermo，上海北诺生物科技有限公司)；免疫球蛋白A(IgA)ELISA试剂盒、免疫球蛋白G(IgG)ELISA试剂盒、免疫球蛋白M(IgM)ELISA试剂盒(上海晶抗生物工程有限公司)。

1.2　方法

1.2.1治疗方法：入院后均进行抗病毒、感染、补液、纠正电解质紊乱及酸碱失衡等支持治疗。在此基础上，对照组患儿给予思密达(蒙脱石散)治疗，1岁以下患儿1袋/d，1～2岁患儿1～2袋/d，以温水冲服；实验组加用金双歧(双歧杆菌乳杆菌三联活菌片)治疗，1岁以下患儿1片/次，1～5岁患儿2片/次，可直接嚼服，或碾碎后溶于温热牛奶中冲服。两组均连续治疗3周。

1.2.2观察临床疗效及临床症状：于治疗72 h后，根据排便次数、粪便性状及临床症状(发热、呕吐、脱水等)改善情况进行临床疗效评估，计算总有效率；比较两组的止泻时间、退热时间及呕吐症状消失时间。疗效评价标准[5]：1)显效：治疗72 h后，粪便性状及次数均恢复正常，临床症状全部消失；2)有效：治疗72 h后，粪便性状及次数明显好转，临床症状明显改善；3)无效：治疗72 h后，临床症状、粪便性状及次数均无明显好转或甚至加重。总有效率=[(显效+有效)/本组观察例数]×100%。

1.2.3胶体金法检测RV抗原：于治疗前、治疗1、2、3周后分别留取两组患儿的粪便标本。1)将胶体金试剂盒放置室温平衡30 min后使用；2)将粪便稀释处理后备用；设定实验孔、对照孔、空白孔，按顺序在各反应孔加入20 μL待测粪便，对照孔、空白孔不加；3)除空白孔外，每孔加入100 μL酶结合物，37 ℃孵育1 h；4)弃去孔内液体，洗板5遍，最后甩干孔内液体；5)每孔加入底物A、B各50 μL，温育15 min；5)加入终止液50 μL，酶标仪检测OD450，分析RV病毒抗原转阴率。

1.2.4流式细胞计量术检测T淋巴细胞亚群：治疗前后抽取两组患儿的外周静脉血；采用流式细胞计量术测定外周血中T淋巴细胞亚群，分析CD3+、CD4+、CD8+细胞百分率及CD4+/CD8+比值。

1.2.5酶联免疫吸附法(ELISA)检测IgA、IgG和IgM：采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清中免疫球蛋白A(IgA)、IgG和IgM水平。

1.3　统计学分析

2　结果

2.1　两组临床疗效比较

实验组总有效率显著高于对照组(P<0.05)(表1)。

2.2　两组临床症状改善情况比较

与对照组比，实验组止泻时间、退热时间及呕吐症状消失时间均较短，组间差异有统计学意义(P<0.05)(表2)。

2.3　两组治疗后RV病毒抗原转阴情况比较

实验治疗1、2周后的RV病毒抗原转阴率均明显高于对照组(P<0.05)；治疗3周后，实验组RV病毒抗原全部转阴，对照组仍有12.0%的阳性率(P<0.05)(表3)。

2.4　两组治疗前后的免疫功能变化

实验组治疗后的外周血CD3+、CD4+和CD4+/CD8+比值以及血清IgA、IgM水平均较治疗前显著升高(P<0.05)，并且明显高于对照组治疗后(t=3.627、6.544、2.372、4.656、2.709，P<0.05)(表4、表5和图1)。

2.5　不良反应情况

治疗期间，两组患儿均未出现不良反应。

3　讨论

RV是一种无囊膜的的双链RNA病毒，是引起婴幼儿腹泻的主要病原体之一。全世界每年约有超过60万人因RV感染致死，其中4岁以下婴幼儿是主要的感染群体[6]。研究表明,RV腹泻一方面可影响肠道正常的菌群结构，破坏肠屏障和拮抗作用；另一方面腹泻会使小肠上皮细胞受到损害，影响其正常吸收功能[7]。所以，微生态治疗法和肠黏膜保护剂对腹泻患儿的治疗有积极的作用。金双歧属于微生态疗法的常用药物，其具有保护胃黏膜的作用。蒙脱石散属于胃肠黏膜保护剂，其具有抑制消化道的病毒和细菌的作用。多项研究表明：两种药物联用具有协同增效作用[8- 9]。但是目前关于两种药物合用对腹泻患儿免疫功能的研究报道较少。本研究采用金双歧联合蒙脱石散治疗腹泻患儿，旨在研究微生态疗法对患儿免疫功能的影响及疗效分析。

表1　两组临床疗效比较Table 1　Comparison of clinical efficacy between the two groups[n(%)]

*P<0.05 compared with the control group.

表2　两组临床症状改善情况比较Table 2　Comparison of clinical symptoms between two n=75, day)

*P<0.05 compared with the control group.

表3　两组治疗后RV病毒抗原转阴率比较Table 3　Comparison of the negative rate of RV virus antigen after treatment between two groups[n(%)]

*P<0.05 compared with the control group.

表4　两组治疗前后的细胞免疫功能变化Table 4　Changes in cellular immune function before and after treatment in both

*P<0.05 compared with before treatment;▲P<0.05 compared with the control group.

表5　两组治疗前后的体液免疫功能变化Table 5　Before and after treatment of humoral immune function changes in two g/L)

*P<0.05 compared with before treatment;▲P<0.05 compared with the control group.

A.after treatment in the control group; B.after treatment in the experimental group图1　两组治疗后流式细胞图Fig 1　Flow charts after treatment in two groups

微生态疗法治疗RV腹泻的途径之一就是利用益生菌调整肠道微生态。本研究结果显示，实验组总有效率明显高于对照组，止泻、退热及改善呕吐症状的效果优于对照组，且在治疗1、2周后RV病毒抗原转阴率显著高于对照组，并于治疗3周后达到全部转阴的效果，说明在两种药物联合治疗RV腹泻的疗效优于单纯蒙脱石散治疗。其可能的作用机制为：金双歧是由双歧杆菌、保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌3种活菌组成的微生态制剂；双歧杆菌能形成肠道防御屏障，阻止病原菌的定植、入侵；其代谢产物可降低肠道pH值，抑制病原菌生长[10]。研究表明,RV感染引起的免疫功能紊乱会导致腹泻的发生及疾病发展[11]。在RV感染的免疫机制中，除了体液免疫，细胞免疫也同样参与，其中CD4+、CD8+T淋巴细胞起到了关键的作用[12]。本研究中，实验组治疗后的外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+比值以及血清IgA、IgM水平明显高于对照组治疗后，提示相对于常规西药疗法，微生态疗法可缓解RV腹泻患儿的免疫功能紊乱，进而提高疗效。这主要是金双歧能增强免疫功能，提高机体对病原体的防御能力。此外，本研究两组患儿在治疗期间均未出现不良反应，说明微生态疗法安全性较高。

综上所述，应用微生态疗法治疗婴幼儿RV腹泻，其疗效显著，能快速改善腹泻症状，安全性较高，可显著改善腹泻患儿的免疫功能，值得临床进一步研究。