曹丽群　旷开其　王清　邹彬彬　谭智文　谢毓滨

[摘要] 目的 分析献血者ABO血型鉴定困难的原因，保证血型鉴定的准确。方法 收集2012年1月—2015年12月长沙地区221名微板比色法检测的ABO血型正反定型不符的样本，运用经典的试管法进行系统的ABO血型血清学鉴定。结果 221名ABO血型鉴定困难的原因依次为：抗体减弱（51.13%）、存在同种抗体（15.84%）、ABO亚型（14.48%）、其他原因（11.77%）、存在冷凝集素（5.88%）、抗原减弱（0.90%）。共检出32例ABO亚型，其中7例存在不规则抗A或抗B抗体。结论 ABO血型鉴定困难的样本，采用正确的处理方案，可以得到正确的结果，既不浪费血液资源，也可保障输血安全。

[关键词] ABO血型；鉴定困难；解决方案

[中图分类号] R457 [文献标识码] A [文章编号] 1672-5654（2018）10（c）-0001-03

Causes and Solution Plans of Difficulty in Identification of ABO Blood Group of 221 Cases of Blood Donors

CAO Li-qun， KUANG Kai-qi， WANG Qing， ZOU Bin-bin， TAN Zhi-wen， XIE Yu-bin

Changsha Blood Center， Changsha， Hunan Province， 410001 China

[Abstract] Objective To analyze the causes of difficulty in identification of ABO blood group of 221 cases of blood donors and ensure the accuracy of blood type identification. Methods The samples of unconformity of positive and reverse ABO blood typing tested by the microplate colorimetric method of 221 cases in the Changsha from Januaty 2012 to December 2015 were collected， and the classic test method was used for systematic ABO serological identification of blood group. Results The causes of difficulty in identification of ABO blood group of 221 cases of blood donors： antibody weakened（51.13%）， having the same type of antibody （15.84%）， ABO subtype （14.48%）， other causes（11.77%），having cold agglutinin（5.88%） and antigen weakened（0.90%）， the ABO subtype of 32 cases was tested， including 7 cases with irregular antibody A or B. Conclusion The accurate treatment plan for samples with difficulty in identification of ABO blood group can obtain an accurate result， which does not waste the blood resources and ensure the blood transfusion safety.

[Key words] ABO blood type； Difficulty in identification； Solution

血型是血液中各種成分的遗传多态性标志。自1900年Karl Landsreiner 发现人类第一个血型系统—ABO血型系统至今，人们已发现红细胞上有36个血型系统，300多种血型抗原。其中ABO血型系统是人类血型系统中抗原免疫性最强的一个血型系统，而且有着其他血型系统所没有的独特性质。具体表现在：血清中常存在反应强的抗体，而红细胞上缺乏相应的抗原，许多组织细胞分泌液中也有规律地存在着A、B、H抗原。这两种特有的性质使ABO血型系统成为输血与器官移植中最重要的血型系统[1]。ABO血型鉴定的正确与否对于献血者本身及保障临床输血安全都非常重要，该研究对2012年1月—2015年12月长沙地区无偿献血人群中筛出的221名ABO血型鉴定困难的样本进行了系统的血型血清学鉴定，现将产生原因及解决方案报道如下。

1 材料与方法

1.1 标本来源

收集长沙地区无偿献血者献血后留取的EDTA-K2抗凝静脉血标本，所有献血者均符合《献血者健康检查要求（GB18467-2011）》。

1.2 主要试剂

抗-A、抗-B单克隆标准血清（长春博德生物制药有限责任公司、上海血液生物医药有限责任公司）；反定型ABO标准红细胞，直接抗球蛋白试剂，抗-M、抗-N、抗-H、抗-A1，不规则抗体筛查细胞，抗体鉴定谱细胞（均由上海血液生物医药有限责任公司生产）；抗AB（Diagast）；凝聚胺介质试剂（珠海贝索生物技术有限公司）；以上试剂均在有效期内使用。

1.3 主要仪器设备

全自动智能加样系统（TECAN EVO， STAR，XANTUS），酶标仪（TECAN SUNRISE），震荡仪（微孔板恒温震荡器），血型血清学离心机（KUBOTA KA-2200），光学显微镜（Olympus CX21）等。

1.4 方法

1.4.1 血型初筛 使用抗A、抗B标准血清，采用纸板法进行ABO血型正定型检测，并在标本管上标示初筛血型。

1.4.2 血型复查 采用抗A、抗B标准血清50 μL分别与浓度为3%的献血者红细胞反应，判读正定型结果；采用A型、B型红细胞试剂50 μL分别与献血者血清50 μL反应，判读反定型结果。ABO正反定型检测采用微板比色法进行，仪器加样完成后采用震荡仪充分混匀，静置1 min，最后使用酶标仪判读结果。对于凝集强度不均，血型判定困难，或者ABO正反定型不符的标本进行复查，复查后仍血型确定困难时，送输血研究室进一步鉴定。

1.4.3 血型鉴定 采用试管法进行系统的血型血清学鉴定。鉴定实验包括：重新做正反定型，发现异常时根据具体情况增加实验，正定型实验增加抗-AB、抗-A1、抗-H试剂或者换用不同厂家的抗-A，抗-B试剂，反定型实验增加试剂O细胞和自身细胞做为补充对照，改变温度（室温、4℃和37℃）或改变血清量（如怀疑抗体减弱时，血清量加倍）等方法比较反应强度变化，不规则抗体筛选及鉴定；吸收放散实验等。

2 结果

该次研究共检出221名ABO血型鉴定困难样本，其中最常见的原因是抗体减弱，占51.13%，其次是同种抗体的存在及ABO亚型，其他原因，冷凝素的存在，抗原减弱也是重要的干扰因素。2012年1月—2015年12月ABO血型鉴定结果不明确的原因分析见表1。其中，共检出32名共11种ABO亚型样本，其中7例存在IgG类抗A或抗B抗体，其检出情况见表2。

3 讨论

患者输注ABO血型不合的血液后会出现急性溶血性输血反应。进行输血前交叉配合实验，可以有效预防溶血性输血反应的发生。而准确地对患者及献血者进行ABO血型鉴定是保证交叉配血成功的基础。ABO血型鉴定的过程中难免遇到疑难血型，如何选择合适的血液输注给合适的患者，常常困扰着输血科工作人员。事实上，只要避开抗原抗体反应，遵循抗原少输多，抗体无输有的原则，进行交叉配血后相合再输注，一般来说是安全的。

该次研究涉及的221名ABO血型定型困难者均为健康无偿献血者，可以基本排除因血液系统、肿瘤等相关性疾病导致的血型抗原、抗体表达异常。该文调查发现产生ABO定型困难的主要原因有抗体减弱、存在同种抗体、ABO亚型、其他原因、存在冷凝集素、抗原减弱。这与国内文献报道[2-4]基本一致。

抗体减弱原因居首，占51.13%，其中抗-B减弱占 76.10%，抗-A减弱占23.89%。这与张坤莲等[5]学者统计的辽宁地区献血者抗体减弱比例（抗-B减弱占62.43%，抗-A减弱占23.36%）基本一致。该次调查中还发现有4例固定献者均为抗B抗体减弱，2例献血者为抗原减弱，因未做家系调查，有待进一步追踪研究原因。排除单纯因抗体减弱导致血型鉴定困难的方案：①要在抗体最适反应温度下反应；②应用新鲜的ABO红细胞与之反应；③加做吸收放散等实验排除ABO亚型。对弱凝集都要高度重视，不管是抗原减弱还是抗体减弱，都应引起足够的重视，一个都不放过[6-7]。

献血者血清中存在同种抗体和冷凝集素也会导致献血者正反定型不合，如果抗体漏检发往临床，将导致临床输血交叉配血实验时出现次侧不合而产生困扰甚至退血。为了节约宝贵的血液资源，建议将存在不规则抗体的献血者红细胞三洗后用于临床，血浆不能供应临床。对于这类献血者也应在个人献血档案中进行标注，提示该献血者再次献血时要高度重视，对于某些有高效价特异性抗体的献血者，尤其是IgG抗体，建议该献血者不宜再次常规献血，其血清可用于制备抗血清进行实验研究[8]。该次统计的35例同种抗体中，抗-M抗体占绝大部分（28例，80.00%），既有单纯IgM型，也有IgG及IgM混合型。发现2例IgM型抗-P1抗体。另外2例存在IgM性质抗体，未确定出特异性，可能与抗体鉴定谱细胞的质量有关[9]。反定型加O细胞，结合自身对照，能发现自身抗体和同种抗体，再用筛选细胞和谱细胞能鉴定抗体的特异性。存在抗体的献血者红细胞经三洗后用于临床，血浆制品淘汰。

该研究中，ABO亚型是导致献血者正反定型不合的第二大原因。当弱的抗原反应在健康献血者中发现时，亚型是最可能的解释。ABO抗原的亚型在A抗原中最多，所以在献血者中的A亚型（B亚型极少见）有被错误鉴定为O型的危险[1]。一旦ABO亚型献血者漏检，当成O型血输注给没有相应抗原的患者，就会发生溶血性输血反应或者刺激产生相应抗体。既有安全隐患，也浪费宝贵的血液资源。抗-AB分型血清能检出不与抗-A或抗-B试剂发生反应的A及B亚型。加做抗-A1，抗-AB和抗-H，必要時做吸收放散试验确认抗原或进行血型物质检测，可以综合判定ABO亚型[6]，如果难以鉴定亚型型别，就判定“弱A/弱B”型。因为即使鉴定清楚亚型的型别，临床也不一定能找到同型的患者来输注。若把“弱A/弱B”型血输给相应ABO型别的患者，既安全有效，又不浪费宝贵的血液资源。这类献血者将被征集进行ABO血型基因分型帮助做进一步确认，并且在其献血档案中进行标注，下次再献血时高度重视，以免漏检造成危害。为了最大限度地保护患者的利益，避免给临床输血带来困扰，该中心暂时屏蔽经血清学鉴定为亚型的献血者，不允许其常规献血，具体应该如何处置，有待相关政府部门出台政策。

其他原因也是该次统计中发现的导致定型困难的常见原因，经血型参比实验室反复实验，正反定型都提示血型正常。分析造成这类错误的主要原因有：①红细胞悬液配制过浓或过淡；②试剂未按照正常储存条件保存导致抗体效价、亲和力降低甚至失效；③器材不洁；④自动加样不准或漏加；⑤离心过度或不足；⑥震荡及静置时长不准确等。改正措施有：①规范操作，严格按标准操作规程操作；②强化试剂管理，确保试剂在有效期内和得到正确的使用，按需领用、正确储存、先开启先用完、定期监测质量，避免低效价试剂的使用[7]，有条件的实验室可以备一套不同厂家或批号的试剂；③强化工作人员责任心，严格做好质量控制，对可能出现的原因一一排查。因为人员和仪器难免不出错，制度也不一定绝对完美。但是只要做到操作规范，细心核对，就可以及时发现错误，纠正错误，将不良后果降到最低。

综上所述，血型鉴定是一项高度严谨的工作，工作人员必须严格遵守操作规程，熟练掌握各种实验技能，认真对待每一份标本，仔细辨别各种异常情况，保证献血者血型定型准确。血型鉴定过程中，发现ABO正反定型异常时，应高度重视，排除技术原因仍出现正反定型不合时，应采取合适的方法进行系统的血型血清学鉴定，确定血型后采取相应的处理方案，与临床做好充分的沟通。否则一旦错误定型的血液发往临床，由于未及时发现，错误地输注给患者后，将导致无效输血甚至发生溶血性输血反应，危及患者生命。

[参考文献]

[1] 刘达庄.免疫血液学[M].上海：上海科学技术出版社，2002：32-127.

[2] 俞广舒，凌霞，林苹苹，等.杭州地区无偿献血者ABO血型正反定型不符调查分析[J].中国输血杂志，2013，26（1）：65-66.

[3] 谭庆芬，罗志.无偿献血者ABO血型正反定型不符分析[J].中国输血杂志，2009，22（6）：436-437.

[4] 刘敬闪，戚海，何路军，等.献血者ABO血型正反定型不符情况分析[J].临床血液学杂志，2013，26（12）：842-843.

[5] 张坤莲，黄旭颖，周助人，等.732例全自动血型分析仪检测ABO血型结果不确定的分析[J].中国输血杂志，2017，9（30）：1012-1015.

[6] 向东.ABO亚型的检测[J].中国输血杂志，2010，23（8）：577-579.

[7] 刘冬，曾付芳，魏胜男.无偿献血初筛血型错误原因分析[J].中国输血杂志，2014，27（4）：431-432.

[8] 刘福昌，许春玲，姜珍一，等.献血者ABO血型正反定型不符18例分析[J].中国输血杂志，2014，27（4）：393-395.

[9] 陈春霞，魏曾珍，谭金哲，等.国内抗体筛查细胞试剂比对[J].中国输血杂志，2017，30（11）：1243-1245.

（收稿日期：2018-07-21）