郑思艳， 吕艳丽， 解启宝

(1.中国农业大学动物医学院， 北京 海淀 100193 ；2.中国牧工商集团有限公司， 北京 丰台 100070)

猫上呼吸道疾病(URTD)是引起幼猫发病和死亡的重要原因之一，通常由一个或多个病原感染引起的，从而出现以呼吸道或眼部疾病为特征的猫呼吸道疾病症候群(FRDC)，常见的感染病原有FCV，FHV，支原体，衣原体，波氏杆菌等[1-2]。 由于各种病原引起的临床症状相似，很难通过临床症状进行疾病的判定。 因此运用分子生物学方法进行病原鉴定，对临床治疗以及合理预防提供指导性作用[3]。

1 研究对象与研究方法

1.1 病料来源 2016 年5 月-2017 年3 月以中国农业大学动物医院接诊的具有上呼吸道感染症状的病猫为研究对象，采集每只患猫的眼结膜、口咽和鼻黏膜拭子276 例。 2016 年9 月对北京出现上呼吸道感染症状的某猫舍进行调查，采集病料30 份。

1.2 发病情况统计 对306 例患猫的年龄及发病时间进行统计分析。

1.3 PCR 检测

1.3.1 DNA 和RNA 提取 参照北京艾德莱生物科技有限公司的病毒基因组DNA/RNA 快速提取试剂盒说明书提取DNA 和RNA。

1.3.2 PCR 和RT-PCR 扩增 参考GenBank 报道的FHV、FCV 基因序列，设计引物FHVU、FHVD、FCV-F、FCV-R，按照Bianka 等人设计的支原体[4]、衣原体[5]引物和反应体系，扩增FCV、FHV、支原体、衣原体。

1.3.3 电泳 待PCR 反应结束后，取5 μL 产物置于1.0 %琼脂凝胶上电泳，紫外灯下观察结果。

1.3.4 PCR 测序 将PCR 产物送至奥美德诺公司测序，然后将测序结果与NCBI 中的序列进行比对。

2 结果

2.1 FCV、FHV、支原体、衣原体检出情况 见表1。对所有306 份样本分别进行FHV、支原体、衣原体的PCR 检测比对，FCV 的RT-PCR 检测比对，其中检出FHV 阳性样本67 份，阳性率为21.9%；检出FCV 阳性样本102 份，阳性率为33.3%；检出支原体阳性样本111 份，阳性率为36.3%；检出衣原体阳性样本4 份，阳性率为1.3%。

2.2 FCV、FHV、支原体、衣原体混合感染情况 见表2。 在306 份样本中，共有73 份混合感染情况，其中检出FHV、FCV 混合感染13 份，阳性率4.2%(13/306)，FHV、支原体混合感染19 份，阳性率6.2%(19/306)，FCV、支原体混合感染32 份，阳性率10.5%(30/306)，支原体、衣原体混合感染1 份，阳性率0.3%(1/306)， FHV、FCV、支原体混合感染8 份，阳性率2.6%(8/306)。

表1 FHV、FCV、支原体、衣原体检出情况

表2 FHV、FCV、支原体、衣原体混合感染情况

2.3 FCV、FHV、支原体感染患猫年龄分布 见表3。 在所有检测样本中，有年龄记录的共302 份，FHV 检测结果为阳性的样本有年龄记录的共63份，其中大于9 岁年龄段出现上呼吸道临床症状的猫检出FHV 的阳性率最高(28.6%)，3 月龄以下年龄段最低(14.8%)；FCV 检测结果为阳性的猫有年龄记录的共102 份，其中3 月～6 月年龄段出现上呼吸道临床症状的猫检出FCV 的阳性率最高(41.2%)，1 岁～9 岁年龄段最低(21.5%)；支原体检测结果为阳性的猫有年龄记录的共109 份，其中小于3 月龄出现上呼吸道临床症状的猫检出支原体的阳性率最高(42%)，9 岁以上年龄段最低(7.1%)。

2.4 FHV、FCV、支原体感染阳性率与发病时间的关系 见表4。 FHV 在2016 年10 月的检出率最高(42.9%)，9 月最低(5.7%)；FCV 在2016 年7 月的检出率最高(52.2%)。 9 月最低(20.8%)；支原体在2016 年7 月的检出率最高(52.2%)。 5 月最低(9.5%)。

表3 FHV、FCV、支原体感染患猫年龄分布

3 讨论

3.1 FCV、FHV、支原体阳性率的比较 FHV 和FCV 是引起呼吸道疾病的常见病毒。 本次调查中共采集306 份表现临床症状的患猫的样本，共获得FHV 阳性样本67 个(21.9%)，FCV 阳性样本102个(33.3%)，FCV 阳性率高于FHV 的阳性率。 这与在巴西南部南里奥格兰德州采集样本检测的一致[6]。 对于有临床表现和无临床表现的健康猫而言，FCV 的患病率相较于FHV 更高些，其原因可能是疫苗的应用，研究表明，疫苗很可能减少了排放FHV 的患猫的数量，而对于排放FCV 的患猫数量影响不显著[7]；因为FCV 是RNA 病毒，具有广泛的遗传性和抗原多样性；而FHV 是稳定的DNA 病毒，所以，疫苗可较好的预防FHV 感染[8]。 此外，FCV携带猫会连续不断的排毒，而FHV 携带猫只是间歇性的排毒，也是FCV 阳性率高于FHV 阳性率的可能原因之一。 支原体作为一种共生菌，只有在与其他病原同时出现时才具有致病性，如FHV[9]。 本调查显示，111 例支原体阳性样本中，混合感染的达到60 例，并且其单一阳性率高于FCV 和FHV，支原体为共生菌，将其列为上呼吸道感染的主要病原存在争议，但由于其常导致上呼吸道感染的继发感染，故在治疗上呼吸道感染性疾病时仍应充分考虑。

表4 FHV、FCV、支原体感染阳性率与发病时间的关系

本调查中，104 例(34%)表现临床症状的患猫并未检测出FHV、FCV、支原体和衣原体，提示除了这四种病原外，可能还有其他病原参与引发呼吸道疾病，如真菌，波氏杆菌和其他病毒[10-11]。 在呼吸道疾病的晚期采样可能检测不到病毒[11-12]。 病料从采集到检测的转运过程中，病原的降解也可导致检测不出相应的病原[13]，为避免样本的降解，需立即放入- 20 ℃冻存，并可能在96 小时内进行检测[14]。

3.2 FCV、FHV、支原体感染患猫发病年龄比较本次调查，9 岁以上的猫FHV 检出率最高，而3 月龄以下的猫检出率最低，原因可能为FHV 病毒感染后会终身带毒，病毒终身潜伏于神经细胞内，应激等因素会引起病毒的再次激活和散播[15]，老年猫由于机体抵抗力降低，感染发病的可能性增大；而3 月龄以下的幼猫由于母源抗体的保护和生存环境相对稳定，受到的应激影响较小而检出率较低。 初生幼猫可获得母源抗体的保护，但持续时间一般不超过10 ～14 周[16]，幼猫一般在10 周龄左右进行疫苗接种，在随后的4 ～8 周内完成免疫程序，而且FCV作为RNA 病毒，具有较强的变异性，疫苗的保护力度有限[16]，这可能是本文中3 ～6 月年龄段的幼猫的FCV 阳性率最高的原因。 幼年猫由于抗感染能力较弱，继发支原体的几率高，因此其阳性样本中幼年猫所占比例最高。

3.3 FCV、FHV、支原体感染患猫发病时间比较本调查中，FHV 在冬季较夏季检出率高，而FHV 在夏季较冬季检出率高，这与病毒的理化特性相关，因为FHV 为有囊膜的病毒，对热抵抗力差[17]，而FCV 为无囊膜的RNA 病毒，对外界环境具有较强的抵抗力，对较高天气温度不敏感。 2016 年10 月的FHV 和FCV 检出率均较高，支原体检出率也高于年均水平，这与该时间段猫只贸易活跃的情况吻合，相关性仍需进一步探索。 猫在冷、热应激状态下，机体抵抗力下降，支原体作为条件致病菌可趁机“肆虐”，因此，7、8 月和12、1 月，支原体的检出率高。

4 结论

本次调查针对具有上呼吸道感染症状的患猫，主要感染病原有支原体、FCV、FHV，FCV 阳性率高于FHV 阳性率；幼猫支原体和FCV 检出率最高，老年猫FHV 检出率最高；在7、8 月高温时支原体和FCV 检出率最高，10 月份FHV 检出率最高。