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1.内蒙古蒙医药工程技术研究院，内蒙古 通辽 028000；2.内蒙古民族大学蒙医药学院，内蒙古 通辽 028000

贯众，蒙古文名亦称“敦布-热拉勒”[1]。较早载于《认药白晶鉴》：“敦布-热拉勒，生崖阴侧。叶绿色，叶似火焰喷射状生于茎两侧，叶背部具很多斑点，根被黄色毛，去毛似草绿蛇，带毛则似猴尾。味甘。亦有生林下者……”[2]，《无误蒙药鉴》也有相同记载[3]。1986年贯众以蒙古文名“纳日斯-乌布斯”载入《内蒙古蒙药材标准》[4]，药材来源为鳞毛蕨科植物粗茎鳞毛蕨DryopteriscrassirhizomaNakai和球子蕨科植物荚果蕨Matteucciastruthiopteris(L.)Todaro的带叶柄基的干燥根茎。本文荚果蕨贯众的原荚果蕨Matteucciastruthiopteris(L.)Todaro为球子蕨OnocLeaceae 科，荚果蕨属Matteuccia蕨类植物。其主要功能为清热、解毒、愈伤。用于流感、视力模糊、胃胀满、作呕、声哑食噎、神志恍惚、头晕、肉食中毒、毒热、伤热。主要含荚果蕨黄素(matteuorie)、去甲氧基荚果蕨素(desmethoxy-rnatteucinol)、荚果蕨素(matteueinol)、芹菜素(apigenin)、甲氧基荚果蕨辛(methoxy matteucin)、荚果蕨苷A(matteuorienate A)、荚果蕨苷B(matteuorienate B)、5,7-二羟基-6-甲基-4′-甲氧基二氢黄酮、荚果蕨素7-O-β-D-葡萄糖苷等黄酮类成分[5-7]。

1 仪器与材料

1.1 仪器 UV-2501PC 紫外分光光度计(日本岛津)；T6新世纪紫外分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)；电子天平(SQP 北京赛多利斯仪器有限公司)；电子天平(BS224S北京赛多利斯仪器有限公司)； KQ-600DB 数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。

1.2 材料 荚果蕨贯众X1采集于内蒙古赤峰市巴林右旗罕山(批号：20160901)；X2采集于内蒙古呼伦贝尔鄂伦春(批号：20160913)；X3采集于湖北黄石神农架(批号：20160906)；X4采集于黑龙江哈尔滨(批号：20161023)；X5采集于内蒙古通辽扎鲁特旗罕山(批号：20160825)；X6采集于内蒙古兴安盟扎赉特旗(批号为20160907)；X7采集于河北安国(批号为20160928)。芦丁对照品(批号：100080-201610，中国食品药品检定研究院)。硅胶G(薄层色谱用)天津市光复精细化工研究所；薄层色谱硅胶G板(青岛海洋化工有限公司制造)；羧甲基纤维素钠(国药集团)。其它所用试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 实验方法

2.1.1 对照品溶液的制备 取芦丁对照品20 mg，精密称定，置50 mL具塞瓶中，加70%乙醇适量，置水浴上微热使溶解，放冷，加70%乙醇至刻度，摇匀，作为。精密量取25 mL，置50 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，既得(每1 mL含0.2 mg)。薄层鉴别选择了赤峰市巴林右旗提供的产于罕山的X1(批号20160901)样品作为对照药材研究建立了薄层色谱鉴别项。

2.1.2 供试品溶液的制备 取本品粗粉约0.4 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇溶液50 mL，密塞，称定重量，加热回流30 min，放冷，再称定重量，用70%乙醇溶液补足减失的重量，摇匀。

2.2 方法学考察

2.2.1 测定波长的确定 取芦丁对照品溶液和供试品溶液，在200～900 nm波长范围内进行光谱扫描。如图1所示，显示二者均在510 nm处有最大吸收。故测定波长确定为510 nm。

2.2.2 线性关系考察 精密量取对照品溶液1、2、3、4、5、6 mL，分别置25 mL量瓶中各加35%乙醇至6.0 mL，加5%亚硝酸钠溶液1 mL，混匀，放置6 min，再加10%硝酸铝溶液1 mL，摇匀，放置6 min。加氢氧化钠试液10 mL，再加35%乙醇至刻度，摇匀，放置15 min，以相应试剂为空白，在510 nm的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。得回归方程；y=0.4703x-0.0204，r=0.9998，结果表明样品浓度在0.2～1.2 mg/25 mL范围内，与其吸光度呈良好线性关系。

2.2.3 精密度试验 按“2.1.2”项下的方法制备供试品溶液，精密吸取1 mL，6份，各置25 mL容量瓶中，分别照标准曲线绘制项下的方法，自“加35%乙醇至6 mL”起，依法测定吸光度，并统计分析。该方法精密度良好，RSD为1.26%。

2.2.4 稳定性试验 取“2.2.3精密度试验”项下的供试品溶液1 mL，置25 mL容量瓶中，照标准曲线绘制项下的方法，自“加35%乙醇至6 mL”起，依法每间隔规定时间测定吸光度，并统计分析。表明供试液在25 min内测定，结果稳定，RSD为2.00%。

2.2.5 重复性试验 取荚果蕨贯众样品X4(黑龙江，批号20161023)，按“2.1.2”项下的方法制备供试品溶液6份，各精密吸取1 mL，置25 mL容量瓶中，分别照标准曲线绘制项下的方法，自“加35%乙醇至6 mL”起，依法测定吸光度，并计算分析总黄酮含量。表明该测定方法重复性良好，RSD为0.91%。

2.2.6 加样回收率实验 取已知总黄酮含量的荚果蕨贯众样品X4粉末约0.1 g，精密称定，平行6份，置具塞锥形瓶中每份分别精密加入芦丁对照品70%乙醇溶液8 mL(8.125 mg/mL)，70%乙醇溶液42 mL，密塞，称定重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用70%乙醇溶液补足减失的重量，过滤。各精密吸取2 mL，置25 mL容量瓶中，分别照标准曲线绘制项下的方法，自 “加35%乙醇至6 mL”起，依法测定吸光度，并计算回收率。平均回收率为98.05%，RSD为0.66%。表明测定方法准确可靠。

2.3 样品含量测定 取荚果蕨贯众样品各3份，每份约0.4 g，精密称定，分别按“2.1.2”项下的方法制备供试品溶液；各精密吸取1 mL，置25 mL容量瓶中，分别照标准曲线绘制项下的方法，自“加35%乙醇至6 mL”起，依法测定吸光度，并计算总黄酮含量。见表1。

表1 不同产地样品含量测定结果

3 薄层色谱鉴别

取本品粉末1 g，加甲醇10 mL，超声处理30 min，滤过，滤液浓缩至1 mL，作为供试品溶液。另取荚果蕨贯众对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2015年版四部通则0502)试验，吸取供试品溶液4 μL、对照药材溶液5 μL，分别点于同一硅胶G板上，以环己烷-丙酮(6∶1)为展开剂，展开，展距8cm以上，取出，晾干，喷以5%磷钼酸试液，在105℃加热至斑点清晰。结果展开系统的供试品色谱中，在于对照药材色谱相应的位置上，均显相同颜色的斑点；斑点Rf值适宜，显色清晰，色谱分离好。如图2所示。

4 讨论

鳞毛蕨科植物粗茎鳞毛蕨Dryopteris crassirhizoma Nakai的带叶柄基的干燥根茎，《中国药典》一部，1977年版[8]始即以绵马贯众收载至今[9]。故本研究将球子蕨科植物荚果蕨Matteuccia struthi opteris(L.)Todaro的带叶柄基的干燥根茎，以荚果蕨贯众独立品种立项研究。

定性研究首选芹菜素为对照品进行预试验，因含量特低而未果。又因无其它成分的法定化学对照品和法定对照药材，而选择了赤峰市巴林右旗提供的产于罕山的X1(批号20160901)样品作为对照药材研究建立了薄层色谱鉴别项。

本研究曾首选所含芹菜素作为定量控制本品质量的特征指标成分，进行了高效液相色谱法测定其含量的研究。结果因含量甚低，取样量过大，无可行性，而未能深入进行研究。其它成分目前尚无法定化学对照品。所以参照《中国药典》2015年版一部载沙棘“含量侧定”项下总黄酮的测定方法，研究建立了比色法测定荚果蕨贯众总黄酮的含量测定方法。结果表明该方法简便、快捷、准确、重复性好。