范双双，曾涛，朱毓永

（河北民族师范学院，河北 承德 067000）

我国是板栗产量最大的国家，每年板栗的消耗量也最大，但是量大的板栗壳处理工作，成为人们关注的一个重要课题。研究发现，板栗壳中含有大量的药学价值的成分，药性甘甜，对心血管疾病有着很好的防治功效，还能调理脾胃等疾病。其中通过对板栗壳进行乙醇提取之后，发现其中含有丰富的没食子酸、绿原酸、芦丁、绿脓杆菌等。没食子酸对肠道中的菌群具有一定的刺激作用，能杀灭肠道细菌，治疗胃肠道疾病。因此，提取板栗壳的成分具有重要意义。下面将对有效成分的测定及其结果进行研究，总结报告如下。

1 一般资料与方法

1.1 材料与设备

板栗去壳，将板栗壳研磨成粉末，置于阴凉处备用；选取90%的没食子酸作为对照品，96．6%的绿原酸对照品及90．7%的芦丁对照品。甲醇、乙睛、色谱纯、超纯水等。高效液相色谱仪，型号1510系列，高压四元泵，在线脱气机、自动进样器、PDA二极管阵列检测器、柱温箱、显微镜系统即摄像头；超声波清洗器、电子天平秤及粉碎机、旋转蒸发仪。

1.2 方法

（1）样品配制。将板栗壳置于显微镜下，使用粉碎机将板栗壳碾压成粉末，进行切片配制；选取丙三醇-50%乙醇（1:1）溶液中软化48h，依次转移到70%乙醇、80%乙醇及90%的乙醇，使用脱洗机进行脱洗，分别于3h后，使用无水乙醇溶液进行2次冲洗，10min/次。脱水后将材料依次放于正丁醇-无水乙醇，1h后置于正丁醇-无水乙醇溶液中再进行脱洗，30min后，置于正丁醇中反复再冲洗1次。待溶液彻底清澈后，将石蜡加入融合，调制成1:1比例的溶液，将混合溶液倒出；将55℃的石蜡置于器皿中，然后将溶液置于其中24～48h；浸润完毕后，将材料埋于石蜡中，完全凝固后制成切片，10～16μm1片，使用蒸馏水将切片冲洗干净，置于恒温台上的展片中，使用电热干燥剂进行烘干，完全去水后，置于烘干机中，设定温度为36℃，烘切片24h，并进行2次熔蜡，30min/次，依次放入二甲苯-无乙醇水溶液中，再此进行染色，操作同前面切片的制作流程，最终获得固体切片，然后使用显微镜进行观察，并拍照。粉末切片目筛，选择粉碎过后的40目筛，取粉末少量作为样品，置于干净的载玻片上，滴加水合氯醛溶液，使用酒精灯加热，滴上稀甘油溶液，密封后置于显微镜下观察，观察中横切面细胞分布状态。

（2）色谱测定方法。使用Hypersil ODS2型号的高效液相色谱仪器，设定色谱柱为250×46mm，5μm；使用乙睛-水-甲醇-水溶液，与水混合配制成水醋酸或磷酸作为流动相，利用等度进行脱洗，分离没食子酸、绿原酸及芦丁成分，设定最大可获取波长为275nm，流速为1ml/min，柱温30℃，进样体积为10μL。分别取没食子酸1．4mg/ml、绿原酸 1．73mg/ml及芦丁 1．4mg/ml对照品，加乙醇溶液进行固定，测定获得没食子酸、氯酸溶液及芦丁的 含 量 分 别 为 52．34、66．01 和 49．80μg/ml； 将 所有溶液都配制并装于器皿中，置于4℃温度中备用。

（3）供试品溶液的配制。对板栗壳进行目筛后，恒温干燥。使用天平秤称取0．2g板栗壳粉末，分别加入极性不同的甲醇、乙醇、乙酸乙酯各30ml，置于40℃，频率为20kHz超声设备下，间歇提取45min，冷却过滤后，蒸发后提取溶剂，残渣中添加甲醇溶解定容至25ml，用0．23μm有机过滤。

2 结果

2.1 显微镜下在纵横切面成像的特征

按照板栗壳的横切面、纵切面果皮细胞的特点，中果皮石细胞和石细胞环带、内果为较多的非腺毛果皮。其中有很多的石细胞，细胞呈不均匀结构、大小，排列并不规律；壁稍厚，且外面有一层角质层；中果皮由数列细胞组成，且零散有小型外韧纤维管束，内果皮上有薄壁细胞。

2.2 切片基底组织的特征

根据纵横切面的分布特点，切片基底组织也呈现一定的特点，其细胞结构内有方晶体和草酸钙晶体，大量的石细胞呈圆形，且还有石细胞群带，呈不规则分布，分枝状，可见明显的分枝，并且有明显的空隙。

2.3 没食子酸、绿原酸及芦丁含量的测定

样品处理条件下，选取不同比例的乙醇和甲醇，板栗壳提取溶液呈深色，含有量的沉淀素，有可能使得测定结果受到一定的干扰。在经过萃取后，使用石油醚浸润后，通过乙酸乙酯超声脱洗，最终提升了测定结果的精准度。经过上述样品的配制后，精密度取板栗粉末0．2g；在30ml石油醚浸润30min后，弃去石油醚液，过滤药渣并蒸干；加30ml乙酸乙酯，经过间歇性超声提取后再次过滤，去掉乙酸乙酯后，残渣加甲醇溶液，并解定溶液至25ml。最终在色谱条件下，获得了乙腈-0．4%磷酸或甲醇-0．4%磷酸，通过梯度脱洗之后，形成3种成分，并分离其它液体的干扰，最终在色谱测定下，获得没食子酸含量 0．33～0．3649mg/g、绿原酸为0．128～0．142mg/g、芦丁为 0．183～0．234mg/g。色谱对 3种成分的敏感度均较高，且呈一定规律的波长。

3 结果

板栗作为重要的壳斗科植物，具有很强的生药价值，在现代药理研究中，均表明其具有很高的医用价值，作用十分广泛。因此，加强对板栗壳中有效成分的提取，不仅能减轻我国每年处理板栗壳产量的压力，还能有效合理地开发和利用板栗壳的优先生药资源，为临床提取药物品种奠定坚实的基础。因此，我国应该注重全面提升板栗壳的医药和保健价值。板栗壳中含有大量的乙醇、乙酸乙酯、氯仿及丁正醇，还有丰富的黄酮、酚类及有机酸等类物质，以没食子酸、绿原酸及芦丁等成分为主，是重要的抗菌消炎的成分，还能预防衰老，抗氧化和自由基，预防肿瘤等药理活性。所以，对其成分及含量的测定，能建立板栗壳的质量检验标准。

根据韦琴的研究结果，他采用高效液相色谱和铁盐催化比色法，对板栗壳中的原花青素成分进行测定，最终发现高效液相色谱技术的应用，其操作方便，效果精准，实践证实了该方法的应用价值。在本次研究中，也使用了高效液相色谱对其含量进行测定，其结果显示，板栗壳在显微鉴定下，呈一定的特征，中横切面外果皮细胞呈圆柱形或栅状排列，其中含有较大的石细胞或石细胞群，中果皮内侧有石细胞呈环状带，并密集分布着草酸钙簇晶体和方晶体。最终通过作性状、组织切片及粉末特征的处理后发现，采用高效液相色谱对没食子酸、绿原酸及芦丁含量进行测定后，发现3种成分的含量分别呈一定的相关性，且RSD峰面曲线也存在一定的特点。高效液相色谱测定方法，在操作中更加方便，且结果精准，为板栗壳生药标准的建立奠定了坚实的基础。

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