玉山江?艾克木

【摘要】 目的：探討西红康治疗早期糖尿病肾病（diabetic nephropathy，DN）的实验研究。方法：62只大鼠中选取50只进行肾切除并一次性腹腔注射50 mg/kg链脲佐菌素（STZ）复制DN大鼠模型，48只造模成功并随机分为模型组、西红康组、开博通组、糖适平组，其余不做任何处理的为正常对照组，每组各12只，连续给药4周，检测并记录大鼠血糖、24 h尿蛋白、肾重/体重、尿素氮（BUN）、肌酐（Scr）、糖化血红蛋白（HbA1c）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、脂联素及E-选择素含量。结果：模型组24 h尿蛋白、肾重/体重、HbA1c、Scr、BUN、血糖、TC、TG、LDL-C、脂联素及E-选择素含量均较正常对照组升高（P<0.01），HDL-C含量较正常对照组降低（P<0.01）；西红康组、开博通组、糖适平组的24 h尿蛋白、肾重/体重、HbA1c、Scr、BUN、血糖、TC、TG、LDL-C、脂联素及E-选择素含量均较模型组降低（P<0.01），HDL-C含量较模型组升高（P<0.01）。结论：西红康能够通过降低DN大鼠尿蛋白、血糖及血脂水平，减少脂联素分泌及E-选择素表达，进而延缓DN大鼠发展。

【关键词】 西红康； 糖尿病肾病； 大鼠； 脂联素； E-选择素

【Abstract】 Objective：To explore experimental study on xihongkang in treatment of early diabetic nephropathy（diabetic nephropathy，DN）.Method：In 62 rats，50 rats were selected for nephrectomy and intraperitoneal injection of 50 mg/kg streptozotocin（STZ） to replicate the DN rat model，48 rats were randomly divided into model group，xihongkang group，captopril group，gliguidone group，the other without any treatment as normal control group，12 rats in each group，administered continuously for 4 weeks.The concentration of blood glucose，24 h urine protein，kidney weight/body weight，blood urea nitrogen（BUN），creatinine（Scr），glycosylated hemoglobin（HbA1c），total cholesterol（TC），triglyceride（TG），low density lipoprotein cholesterol（LDL-C），high density lipoprotein cholesterol（HDL-C），adiponectin and E-selectin was detected and recorded.Result：The contents of 24 h urine protein，kidney weight/body weight，HbA1c，Scr，BUN，blood glucose，TC，TG，LDL-C，adiponectin and E-selectin of model group were higher than those of normal control group（P<0.01），and HDL-C content was lower than that of normal control group（P<0.01）.The contents of 24 h urine protein，kidney weight/body weight，HbA1c，Scr，BUN，blood glucose，TC，TG，LDL-C，adiponectin and E-selectin of xihongkang group，captopril group，gliguidone group were lower than those of model group（P<0.01），and HDL-C content was higher than that of model group（P<0.01）.Conclusion：Xihongkang can reduce the DN rat urine protein，blood glucose and blood lipid levels，reduced adiponectin secretion and expression of E-selectin，and delay the development of DN rats.

【Key words】 Xihongkang； Diabetic nephropathy（DN）； Rats； Adiponectin； E-selectin

First-authors address：Affiliated Hospital of Chinese Medicine Affiliated to Xinjiang Medical University，Urumqi 830000，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2017.34.005

糖尿病肾病（diabetic nephropathy，DN）是糖尿病最为常见的微血管并发症之一，是糖尿病患者死亡的首要原因，是进展为终末期肾病最为重要的原因[1-2]。近些来DN发病率呈上升趋势，对患者身心健康造成严重影响，因此寻求对DN的早期诊断、治疗将具有重要意义[3-5]。中医认为DN属于气阴两虚夹瘀证、脾肾两虚证，根据此治疗原则，本课题组经过多年临床研究获得经验方-西红康，此方具有益气养阴，滋补肝肾，活血化瘀之功效，对DN患者有显著治疗作用[5-7]，但西红康具体的作用机理尚未可知，因此本研究将复制DN大鼠模型，探讨西红康对DN大鼠血脂、血糖水平及脂联素、E-选择素含量的影响，为西红康更深入的临床应用提供理论依据。现报道如下。endprint

1 材料與方法

1.1 实验动物 由新疆医科大学第一附属医院提供180～200 g的昆明雄性大鼠62只，在室温（20±2）℃中分笼饲养。

1.2 主要试剂与仪器 西红康（由黄芪、女贞子、水蛭、大黄、枸杞子、红景天、西红花组成）由中药房提供，通过水煎并过滤浓缩成1 g/mL的生药。卡托普利片（开博通）由中美上海施贵宝制药厂提供；格列喹酮片（糖适平）由北京第六制药厂提供；链脲佐菌素（STZ）购自美国sigma公司；大鼠脂联素酶联免疫检测试剂盒购自北京普尔生物科技有限公司；E-选择素酶联免疫吸附试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司；FT-6自动计算机放射免疫测量仪购自北京核仪器厂；BECKMAN CX7全自动生化分析仪购自美国贝克曼公司；Sartorius精密电子天平购自北京赛多利斯天平有限公司；Accu-chek Advantage血糖仪购自德国罗氏公司。

1.3 模型的建立 采用10%水合氯醛麻醉大鼠后，将背部毛剪去，并消毒，做背部切口后在腹膜外切除右肾，左肾保留1/2。术后1周，按50 mg/kg的STZ腹腔注射大鼠造模，48 h取血，并留取24 h尿液。正常饲养2周后，测定血糖、尿蛋白、尿量，若血糖值>16.6 mmol/L、尿量>原尿量150%、尿蛋白排泄>30 mg/（kg·d），说明DN模型构造成功，共有50只大鼠进行造模，其中48只造模成功并存活[8-10]。

1.4 分组及给药 将造模成功的48只大鼠随机分为模型组、西红康组、开博通组、糖适平组，每组各12只。其中西红康组大鼠每天给予药粉1 g/kg；开博通组大鼠每天给予卡托普利片4.17 mg/kg；糖适平组每天给予格列喹酮片5 mg/kg；模型组每天给予等量生理盐水；连续4周，每天灌胃1次。其余12只正常大鼠作为正常对照组，不做任何处理[10]。

1.5 标本的制备及检测 各组大鼠连续给药4周，称重后断尾取血，室温静置1 h，3000 r/min离心10 min，取得上清液待测。采用全自动生化分析仪测定血清中尿素氮（BUN）、肌酐（Scr）、糖化血红蛋白（HbA1c）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）。同时根据试剂盒说明书采用放射免疫法测定脂联素含量，ELISA双抗体夹心法测定可溶性E-选择素含量；另外取肾组织，并称重，计算肾组织与大鼠重量比值。

1.6 统计学处理 采用SPSS 17.0软件对所得数据进行统计分析，计量资料用（x±s）表示，组间比较采用t检验，多组间比较采用单因素方差分析（One-way ANOVA）。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组大鼠生化指标比较 模型组的24 h尿蛋白、肾重/体重、HbA1c、Scr及BUN含量均较正常对照组升高（P<0.01）；西红康组、开博通组、糖适平组的肾24 h尿蛋白、肾重/体重、HbA1c、Scr及BUN含量均较模型组降低（P<0.01）。见表1。

2.2 各组大鼠血糖、血脂水平比较 模型组的血糖、TC、TG及LDL-C含量均较正常对照组升高（P<0.01），HDL-C含量较正常对照组降低（P<0.01）；西红康组、开博通组、糖适平组的血糖、TC、TG及LDL-C含量均较模型组降低（P<0.01），HDL-C含量较模型组升高（P<0.01）。见表2。

2.3 各组大鼠血清中脂联素及E-选择素含量比较 模型组的脂联素及E-选择素含量均较正常对照组升高（P<0.01）；西红康组、开博通组、糖适平组的脂联素及E-选择素含量均较模型组降低（P<0.01）。见表3。

3 讨论

祖国医学认为“本虚标实”是DN的基本病机，应从气因两虚论治，采用“益气养阴”“滋阴补肾”“活血化瘀”等进行治疗[5，11-12]，本课题组根据此原则并结合多年临床经验拟定了西红康方对DN患者进行治疗，取得良好效果，能够显著提高患者生活质量，为中医治疗DN开辟新思路和方法[5-7]，但具体机理未知，因此本研究将对此展开探讨。本研究首先参考相关文献[8-10]，将大鼠右肾切除并一次性注射STZ复制DN模型，结果发现血糖值>16.6 mmol/L、尿量>原尿量150%、尿蛋白排泄>30 mg/（kg·d），说明DN模型构造成功，且有48只大鼠存活，存活率高。接着探讨西红康对DN大鼠的治疗作用，并选取开博通及糖适平作为阳性对照。研究结果显示，模型组的24 h尿蛋白、肾重/体重、HbA1c、Scr及BUN含量均较正常对照组升高（P<0.01）；西红康组、开博通组、糖适平组的肾24 h尿蛋白、肾重/体重、HbA1c、Scr及BUN含量均较模型组降低（P<0.01）。表明西红康能显著的降低24 h尿蛋白、肾重/体重、HbA1c、Scr及BUN含量，提示西红康具有降低DN大鼠尿蛋白，改善肾功能的作用，与西红康的临床应用效果一致[6-7]。另外DN伴随着糖脂代谢的异常，高脂血症加速了大血管动脉粥样硬化的发生，促进了糖尿病肾小球的硬化[3-4]。血脂中高含量的TG、TC、LDH-C，低含量的HDL-C会导致机体凝血异常，产生血栓，形成动脉粥样硬化，促进肾小球硬化，同时高糖条件下的糖基化终末产物的聚集也严重损害肾组织[3-4，13]。因此本研究进一步的探讨西红康对DN大鼠血糖及血脂水平的影响，结果显示，模型组的血糖、TC、TG及LDL-C含量均较正常对照组升高（P<0.01），HDL-C含量较正常对照组降低（P<0.01）；西红康组、开博通组、糖适平组的血糖、TC、TG及LDL-C含量均较模型组降低（P<0.01），HDL-C含量较模型组升高（P<0.01）。表明西红康能显著的降低血糖、TG、TC、LDH-C含量，升高HDL-C含量，提示西红康能够通过降糖、降血脂进而延缓DN大鼠的病情发展。endprint

脂联素是1995年Scherer等从小鼠脂肪细胞中分离出来的一种活性因子，是脂肪组织在人体血浆中最为丰富的蛋白，是迄今为止当脂肪容量增大而分泌量反而减少的脂肪因子。脂联素位于染色体的3q27上，有2种受体，具有抗炎、抗动脉粥样硬化、抗氧化、改善胰岛素抵抗、调节血糖血脂等作用[14-15]。临床研究证实，脂联素水平与DN患者内皮损伤程度、尿蛋白等病情进展密切相关，检测DN血浆中脂联素的表达，能一定程度的反映DN的病情[16-17]。因此本研究进一步的探讨西红康对DN大鼠血浆中脂联素水平的影响，结果显示，模型组的脂联素含量较正常对照组升高（P<0.01）；西红康组、开博通组、糖适平组的脂联素含量均较模型组降低（P<0.01）。表明西红康能显著的降低DN大鼠血浆中脂联素含量，提示西红康可能通过抑制脂联素分泌，提高胰岛素抵抗，进而降低血糖、血脂，最终延缓DN的发展。

E-选择素是选择素家族的一员，是一种分子量107～115 kDa的细胞表面糖蛋白，是介导白细胞与内皮细胞粘附最为主要的粘附分子。E-选择素表达量的升高能够直接锚定白细胞，使白细胞活化，向内皮细胞表面滚动、附着及粘附等，进而使内皮细胞活化，产生白介素、白三烯等炎症因子，损伤内皮细胞，并且使单核细胞、中性粒细胞等炎症细胞浸润肾小球、肾小管间质，加速DN的发生发展[18-20]。因此E-选择素作为促炎因子的一种，在DN的发生发展过程中起着重要作用，本研究将进一步探讨西红康对DN大鼠血清中E-选择素含量的影响，结果显示，模型组E-选择素含量较正常对照组升高（P<0.01）；西红康组、开博通组、糖适平组E-选择素含量均较模型组降低（P<0.01）。表明西红康能够显著降低DN大鼠血清中E-选择素含量，提示西红康可能通过降低E-选择素含量，发挥抗炎作用，进而延缓DN大鼠的发展。

综上所述，西红康能够通过降低DN大鼠尿蛋白、血糖及血脂水平，减少脂联素分泌及E-选择素表达，进而延缓DN大鼠发展。

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（收稿日期：2017-11-02） （本文编辑：董悦）endprint