胡 林 敬胜男 赖志红

成都中医药大学附属医院 四川 成都 610075

穴位埋线对非酒精性脂肪肝大鼠的治疗作用及部分机制研究

胡 林 敬胜男 赖志红

成都中医药大学附属医院 四川 成都 610075

穴位埋线 非酒精性脂肪肝 大鼠 脂联素

肿瘤坏死因子-α近年来非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）发病率呈“井喷式”增长，且发病趋于低龄化，已成为全球肝病相关发病率和死亡率的主要原因。笔者采用穴位埋线治疗本病取得一定疗效，本研究通过观察NAFLD大鼠穴位埋线治疗后相关指标的变化，探讨穴位埋线对NAFLD可能的作用机制，特报道如下。

1 材料与方法

1.1 实验动物：同批次健康SDF级雌性大鼠30只，体质量200±20g，由成都达硕生物科技有限公司提供，合格证号0002906，生产许可证SCXK（川）2008-24。

1.2 试剂及设备：KRYOSTAT 1720型冰冻切片机：德国Leitz公司；BMJ-Ⅲ型包埋机：常州中威电子仪器厂；PHY-Ⅲ病理组织漂烘处理仪：常州中威电子仪器厂；多功能酶标仪（Thermo公司KRYOSTAT 1720型冰冻切片机）；日立7170a全自动生化分析仪：日立公司；Chemi-Doc XRS+凝胶成像分析系统、PCR仪：BioRad公司；大鼠脂联素（ADP）检测试剂盒（RD，货号：201503）；肿瘤坏死因子α（TNF-α）检测试剂盒（RD，货号：201502）。

1.3 分组及造模：实验前先适应性饲养3d，标记后随机将大鼠分为空白组11只和造模组21只。空白组饲以标准饲料，造模组饲以高脂饲料（标准饲料88%+胆固醇2%+猪油10%）来复制非酒精性脂肪肝大鼠模型，各组大鼠均自由饮水。连续饲养10周，第10周末各组随机抽取大鼠1只处死取材，做肝脏病理组织血检查证实脂肪肝已形成[1-2]。

将造模成功的20只大鼠随机分为穴位埋线组和假埋线组，各10只。穴位埋线组参照《实验针灸学》进行穴位定位[3]，埋线方法：取大鼠足三里、中脘、天枢、气海、丰隆，碘酒常规消毒大鼠穴位皮肤，用消毒镊子将0.5cm生物可降解线置入一次性埋线针具套管内，斜向大鼠脊柱方向快速刺入上述穴位皮下，针拔出后用消毒棉签按压针孔数秒，创口无需其他特殊处理即完成1次穴位埋线操作，14天后重复，共4次，疗程为8周。假埋线组不埋入生物可降解线，余操作步骤同治疗组。

治疗8周后，大鼠禁食不禁饮12h后，次日清晨称重，用3%戊巴比妥钠（30mg/kg）腹腔麻醉。腹主动脉取血8ml，3000r/min离心血清5min，－20℃保存备用。脱颈椎处死大鼠，迅速摘取肝脏，称重。4℃ 0.9%氯化钠溶液冲洗，在距肝边缘5mm处取相同部位肝左叶组织若干块，大小约1.5cm×1.5cm×0.5cm，-80℃冷冻保存，做常规油红0染色病理切片。

1.4 检测指标：①肝指数：分别称重大鼠体重及摘取的全肝脏，计算肝指数。②肝脏组织病理：取肝左叶冰冻切片，常规油红O法染色，采用Ridit法计算各组疗效的Ridit平均值以分级评价各组大鼠肝脂肪变性程度。③血清生化指标：采用全自动生化仪测定，由成都中医药大学检验科协助检测血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）。④脂联素（ADP）与肿瘤坏死因子-α（TNF-α）：采用双抗体夹心ELISA方法检测静脉上清中的ADP与TNF-α。

1.5 统计学方法：应用SPSS19.0统计软件，计量资料用±s表示，组间比较采用单因素方差分析，计数资料采用Ridit分析，P＜0.05有统计学意义。

2 结果

2.1 各组大鼠体重、肝湿重及肝指数比较：见表1。假埋线组及穴位埋线组大鼠体重、肝湿重及肝指数明显高于空白组，表明造模成功；治疗8周后，穴位埋线组大鼠体重、肝湿重及肝指数明显低于假埋线组，差异具有统计学意义（P＜0.01）。

表1 穴位埋线对大鼠体重及肝重变化的影响（±s）

表1 穴位埋线对大鼠体重及肝重变化的影响（±s）

注：与空白组比较，*P＜0.05；与假埋线组比较，#P＜0.01。

肝指数（%）组别 只数 体重（g） 肝湿重（g）空白组假埋线组穴位埋线组3.08±0.59 4.09±0.49*3.48±0.46#10 10 10 310.56±55.97 410.08±47.46*337.78±18.30#9.54±2.33 16.65±1.42*12.00±3.10#

2.2 分级评价各组大鼠肝脂肪变性程度：见表2。正常组大鼠肝组织光镜下未见明显异常，假埋线组大鼠肝组织可见中到重度弥漫性肝细胞脂肪变，穴位埋线组大鼠肝细胞脂肪变以轻到中度为主。与假埋线组比较，穴位埋线组肝脏脂肪变程度轻，Ridit平均值明显降低（P＜0.05）。

2.3 各组大鼠血清生化指标比较：见表3。假埋线组、穴位埋线组大鼠血清中TC、TG、ALT、AST水平较空白组均升高；穴位埋线组大鼠血清TC、TG含量与空白组比较，差异无显著统计学意义（P＞0.05）；穴位埋线组血清TC、TG、ALT、AST明显低于假埋线组，差异具有统计学意义（P＜0.01）。

表2 大鼠肝脂肪变性程度分级评价情况

表3 穴位埋线对大鼠生化指标的影响（±s）

表3 穴位埋线对大鼠生化指标的影响（±s）

注：与空白组比较，#P＜0.01；与假埋线组比较，*P＜0.01。

组别空白组假埋线组穴位埋线组AST（U/L）36.45±10.17 112.33±17.69#68.56±15.46#*只数10 10 10 ALT（U/L）36.83±18.23 80.67±18.01#42.17±4.67*TC（mmol/L）1.34±0.12 2.35±0.32#1.45±0.23#*TG（mmol/L）0.21±0.06 0.49±0.12#0.22±0.07#*

2.4 穴位埋线对大鼠ADP与TNF-α的影响：见表4。

表4 穴位埋线对大鼠血清ADP、TNF-α的影响（±s）

表4 穴位埋线对大鼠血清ADP、TNF-α的影响（±s）

注：与空白组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与假埋线组比较，#P＜0.05，##P＜0.01。

TNF-α（ng/L）13.04±1.45 23.23±1.23**14.98±1.45**##组别空白组假埋线组穴位埋线组只数10 10 10 ADP（mg/L）21.58±0.82 12.98±5.56**18.61±2.03*#

3 讨论

NAFLD属中医学“胁痛”“肝着”“积聚”等范畴，其发病多由于先天禀赋不足，肾精亏虚，水不涵木；或过食肥甘厚味、饮食不节，或嗜酒过度致脾失健运，饮食脂浊积聚，湿浊内生，聚而成痰，留滞肝络；或情志劳倦内伤等致肝失疏泄，气滞血瘀。故临床采用行气、利湿、祛痰、化瘀的治疗原则[4]。穴位埋线是针灸和埋线疗法的延伸，“长效针感”保留针灸的持续作用，加强治疗效果。中脘为胃之募穴，可调胃和中，补虚纳气，降逆化滞；配大肠之募穴天枢，能疏调脏腑，行气消食导滞，活血化瘀；与丰隆相配，能加强利湿化痰、疏通经络、消脂降浊功效。气海、足三里为补虚之要穴，固肾益精，补中益气，改善脏腑功能。天枢、中脘、气海均位于腹部，持续刺激能减少脂肪组织在腹部的积聚。诸穴合用，共奏健脾消食行气、祛痰化瘀之功。

目前认为NAFLD的发病与胰岛素抵抗（IR）、脂肪酸代谢紊乱、氧化应激、细胞因子等因素相关。IR被认为是中心环节，脂质过多症和高胰岛素血症导致脂肪在肝细胞内蓄积，而异常的肝细胞对胰岛素敏感性降低，加重IR。脂肪变肝细胞和脂肪组织分泌多种细胞因子，各种原因诱导氧化应激、脂质过氧化不平衡及炎症反应使肝细胞再次受到损伤。此过程中，谷胱甘肽水平降低导致JNK信号传导过度活化，促炎症因子TNF-α的分泌增加，通过多信号传导通路产生并加重IR，形成恶性循环。且肝脏是TNF-α的重要靶器官，TNF-α可抑制外周脂肪组织分解，并通过与肝细胞膜上的TNF受体结合，促进肝细胞凋亡和坏死[5]。有学者发现ADP是影响肝脏细胞脂肪变性以及炎症的独立影响因素，低ADP与IR的肝脂肪聚集有密切关系[6]。本研究结果表明：穴位埋线能升高脂联素含量而降低TNF-α的含量，改善肝组织脂肪变性程度，降低大鼠血清TC、TG、ALT、AST水平，推测穴位埋线通过影响血清ADP及TNF-α含量对NAFLD产生一定的干预作用，其疗效可能与改善IR有关。

[1]陈剑明，王丙信，伏爱国，等.高脂饮食诱导非酒精性脂肪肝大鼠模型的实验研究[J].中华中医药学刊，2016，34（11）：2709-2712.

[2]徐叔云.药理实验方法学[M].3版.北京：人民卫生出版社，2002：1351.

[3]李忠仁.实验针灸学[M].北京：中国中医药出版社，2003：329-332.

[4]王小奇，刘庆生，桑怡，等.理气化痰祛瘀方治疗非酒精性脂肪肝34例临床研究[J].浙江中医杂志，2012，47（9）：637-638.

[5]Ercin CN，Dogru T，Genc H，et al.Insulin resistance but not visceral adiposity index is associated with liver fibrosis in nondiabetic aubjects with nonalcoholic fatty liver disease[J]. Metab Syndr Relat Disord，2015，13（7）：319-325.

[6]Musso G，Gambino R，Biroli G，et al.Hypoadiponectinemiapredictstheseverityofhepaticfibrosis and pancreatic Beta-cell dysfunction in nondiabetic nonobese patients with nonalcoholic steatohepatitis[J].Am J Gastroenterol，2005，100（11）：2438-2446.

2017-06-08