乳腺癌组织中EZH2及p53蛋白表达及其临床意义
2017-11-11张雪云王晓武王丰梅
张雪云，王晓武，王丰梅
(青海大学附属医院乳腺甲状腺外科，青海 西宁 810001)
乳腺癌组织中EZH2及p53蛋白表达及其临床意义
张雪云，王晓武，王丰梅
(青海大学附属医院乳腺甲状腺外科，青海 西宁 810001)
目的研究乳腺癌组织中果蝇zeste基因增强子同源物2(EZH2)及p53蛋白的表达及临床意义。方法选择从2016年1～10月在青海大学附属医院诊治的乳腺癌患者40例纳入本次研究，将40例患者术区所取的乳腺癌组织记为观察组，另取同期在医院治疗的40例纤维瘤患者的手术切除组织记为对照组，比较乳腺不同组织中EZH2及p53蛋白的表达，分析乳腺癌组织中EZH2及p53蛋白的表达与其病理情况的关系，以及乳腺癌组织中EZH2与p5蛋白表达的相关性。结果乳腺癌组织中EZH2及p53蛋白的阳性率分别为52.50%、47.50%，均明显高于纤维瘤组织的20.00%和15.00%，差异均有统计学意义(P＜0.05)。乳腺癌组织中EZH2及p53蛋白的阳性表达与有淋巴结转移及分子亚型为Basal-like型有关，差异均有统计学意义(P＜0.05)；根据Spearman法对相关性分析后发现，乳腺癌组织中EZH2与p5蛋白的阳性表达之间呈正相关(r=0.66，P＜0.05)。结论乳腺癌组织中的EZH2及p53蛋白均存在较强的阳性表达，且两者之间的表达呈正相关。
乳腺癌组织；EZH2；p53蛋白；表达；作用机制
伴随医学科技的迅猛发展，当前临床对于乳腺癌的诊断及治疗均获得了长足的进步。乳腺癌患者的病情也逐渐倾向于凭借病理组织学和免疫组织化学，以及分子遗传学等指标的综合评判以进行诊断[1]。但是，目前，关于肿瘤复发和转移，以及耐药等问题依旧是制约着乳腺癌诊治的难题，强化对于乳腺癌在分子水平表达方面的研究十分必要。EZH2是调控基因，p53属于抑癌基因，两者均为近年来较为突出的基因研究热点[2]。为更好地掌握乳腺癌组织在蛋白水平的表达情况，并了解疾病的发生和发展机制，从而找到相关指标靶点，本文通过分析EZH2及p53蛋白在乳腺癌组织当中的表达意义和作用机制，旨在为临床治疗提供理论依据，现报道如下：
1 资料与方法
1.1 一般资料 选择从2016年1～10月在青海大学附属医院诊治的乳腺癌患者40例纳入本次研究，均为女性，年龄29～78岁，平均(54.32±2.19)岁。 纳入标准：(1)所有患者均符合乳腺癌的诊断标准，并由术后病理学的检测证实；(2)年龄≥29岁；(3)预计生存时间＞3个月。排除标准：(1)其他类的恶性肿瘤；(2)病历资料缺失者；(3)无手术指征者。将40例患者术区所取的乳腺癌组织记为观察组，另取同期在医院治疗的40例纤维瘤患者的手术切除组织记为对照组，两组患者的基线资料差异均无统计学意义(P＞0.05)，见表1。本研究经医院伦理委员会批准。
表1 两组患者一般资料的比较(例，x±s)
表1 两组患者一般资料的比较(例，x±s)
组别 例数 年龄(岁) 淋巴结转移 组织学类型 分子亚型肿瘤分期Ⅰ期HER-2(+)≥60 22 20 40 40观察组对照组Z/t值P值＜60 18 20肿瘤直径(cm)≤2 19 22＞2 21 18 2.017 0.109平均年龄53.97±2.18 54.28±2.20 0.633 0.529Ⅱ期11Ⅲ期20无19有ILC 21 21 IDC 19 LuminalA 10 Luminal B 14 Basal-like 13 1.249 0.187 9---------------------------3------
1.2 研究方法 检测涉及的免疫组化染色方式选择MaxVision法，其中兔抗人EZH2型多克隆抗体和通用两步法试剂盒及p53等试剂盒均购于上海劲马+上海恒远公司。将两组组织制成石蜡切片后，给予抗原修复，利用过氧化物酶相关阻断剂在室温下孵育约10 min。使一抗在4℃下过夜，将二抗在室温下孵育约15 min。再用DAB显色5 min，经苏木精染色约2 min，全部过程应用磷酸盐缓冲液(PBS)进行冲洗，以PBS代替一抗用于阴性对照。
1.3 结果评判 EZH2蛋白以显微镜下的高倍视野中细胞核呈黄色亦或是棕黄色颗粒记为阳性，对每张切片均观察5个视野。通过半定量评分法进行统计：(1)未着色记为0分，淡黄色记为1分，棕黄色记为2分，棕褐色记为3分。(2)对阳性细胞的百分比进行计分，阴性记为0分，阳性细胞的数目＜25%记为1分，25%～50%记为2分，50%～75%记为3分，＞75%记为4分。使(1)和(2)相乘，结果＞3分记为阳性。p53则将细胞核中有棕黄色颗粒记为阳性，取5个高倍视野，其中阳性细胞的比例＜10%记为阴性，≥10%记为阳性。
1.4 观察指标 比较乳腺不同组织中EZH2及p53蛋白的表达，分析乳腺癌组织中EZH2及p53蛋白的表达与其病理情况的关系，以及乳腺癌组织中EZH2与P5蛋白表达的相关性。
1.5 统计学方法 应用SPSS21.0软件进行数据分析，计数资料采用χ2检验，等级资料的比较选择秩和检验，计算Z值；计量资料以均数±标准差(±s)表示，采用t检验，相关性分析使用Spearman法进行评价，P＜0.05为差异有统计学意义。
2 结 果
2.1 乳腺不同组织中EZH2及p53蛋白的表达比较 乳腺癌组织中EZH2阳性定位在细胞核，阳性率为52.50%，p53蛋白也定位在细胞核，阳性率为47.50%，均明显高于纤维瘤组织的20.00%和15.00%，差异均有统计学意义(P＜0.05)，见表2、图1和图2。
表2 乳腺不同组织中EZH2及p53蛋白的表达比较[例(%)]
图1 EZH2阳性免疫组化图（HE染色，×400）
图2 P53阳性免疫组化图（HE染色，×400）
2.2 乳腺癌组织中EZH2及p53蛋白的表达与其病理情况的关系 乳腺癌组织中EZH2及p53蛋白的阳性表达与有淋巴结转移及分子亚型为Basal-like型有关，差异均有统计学意义(P＜0.05)，见表3。
2.3 乳腺癌组织中EZH2与p5蛋白表达的相关性 根据Spearman法对相关性分析后发现，乳腺癌组织中EZH2与p5蛋白的阳性表达之间呈正相关，见表4。
表3 乳腺癌组织中EZH2及p53蛋白的表达与其病理情况的关系（例，±s）
表3 乳腺癌组织中EZH2及p53蛋白的表达与其病理情况的关系（例，±s）
病理情况年龄(岁)＜60≥60肿瘤直径(cm)≤2＞2肿瘤分期ⅠⅡ期Ⅲ期淋巴结转移例数EZH2阳性 χ2值p53阳性 χ2值0.123 P值0.7260.082 P值0.775 18 22 10(55.56)11(50.00)9(50.00)10(45.45)0.3820.5360.4220.516 19 21 9(47.37)12(57.14)8(42.11)11(52.38)2.5060.1132.5060.113 9 11 20 6(66.67)7(63.64)8(40.00)6(66.67)6(54.55)7(35.00)19.5580.0006.5130.011无有19 21 3(15.79)18(85.71)5(26.32)14(66.67)组织学类型ILC IDC分子亚型LuminalA型Luminal B型HER-2(+)型Basal-like型0.3820.5360.0000.987 21 19 12(57.14)9(47.37)10(47.62)9(47.37)6.5830.0006.2740.000 10 14 3 13 2(20.00)4(28.57)1(33.33)12(92.31)3(30.00)4(28.57)1(33.33)11(84.62)
表4 乳腺癌组织中EZH2与p53蛋白表达的相关性分析
3 讨 论
近年来的统计数据显示，全球每年因乳腺癌死亡的患者大约为46万，在所有因恶性肿瘤致死病例中占比约14%，对患者的生命安全造成了极大的威胁[3]。在我国，乳腺癌的发病率长期位居女性恶性肿瘤排行的首位，且有着逐渐上升的相关趋势。目前临床上关于引起乳腺癌的主要作用机制仍未明晰，但经基因组学实验研究结果显示，诸多原癌基因和抑癌基因，以及与之相关的蛋白质在编码上也产生了变化[4]。因此，监测上述基因在乳腺癌组织当中的表达，对于辅助临床诊治具有不容忽视的作用。
本研究结果显示，乳腺癌组织中EZH2及p53蛋白的阳性率均分别著高于纤维瘤组织，这符合Jiang等[5]和程维刚等[6]的报道结果，提示EZH2及p53蛋白在乳腺癌组织中的阳性表达明显上升。究其原因，主要是与两者的表达机制有关。具体而言，EZH2基因是在1996年时由Hobert通过酵母双杂交手段分析原癌基因——Vav蛋白的产物时首次发现的，其属于组蛋白发生甲基化时的一种重要工具酶，是PcG基因家族的成员[7]。其主要定位在人染色体7q35中，长度为40 kb，已被认为是候选癌基因。p53基因属于人类肿瘤当中的一类最易突变的重要抑癌基因，其包括野生型以及突变型等亚型，与乳腺癌的关系比较紧密。简言之，EZH2可参与针对细胞周期所进行的调控过程中，其阳性表达可使细胞迅速进至S期，致使转录机制在一定程度上失调，从而加速细胞增殖，对肿瘤的生长具有一定的促进作用[8-9]。EZH2基因处在pRB-E2F信号通路下游，属于下游靶基因。通常pRB在去磷酸化之后可同E2F相结合而产生pRB-E2F复合物，从而抑制了基因转录。本文EZH2蛋白在乳腺癌组织当中的阳性表达可能是因为pRB-E2F通路的异常而导致的。p53基因在突变之后可能致使p53编码蛋白具有的正常功能基本丧失，同时也失去了抑制细胞周期的正常运行以及触发细胞凋亡的作用机制[10-11]。因此，p53蛋白在高表达时往往预示着乳腺癌组织存在较强增殖能力。本文根据Spearman法对相关性分析后发现，乳腺癌组织中EZH2与p53蛋白的阳性表达之间呈正相关，这表明了EZH2与p53蛋白的表达之间存在着协同关联。分析原因，笔者认为主要是因为野生型的p53在激活之后，能够通过与EZH2的启动子相结合，进而抑制EZH2的表达，而当p53基因在突变之后逐渐丧失相关抑制作用，从而使EZH2的表达上升。这也说明了EZH2蛋白在乳腺癌组织当中的表达可能受到p53的调控[12-13]。
此外，本文还发现，乳腺癌组织中EZH2及p53蛋白的阳性表达与有淋巴结转移及分子亚型为Basal-like型有关，这提示发生淋巴结转移，以及分子亚型是Basal-like型的患者具有更高的EZH2及p53蛋白的阳性表达率[14-15]。原因可能在与此类患者的病情相对较重或者分子亚型与调控蛋白的关系更为紧密等因素有关，与研究报道结论相符[16-18]。
综上所述，乳腺癌组织中的EZH2及p53蛋白均存在较强的阳性表达，且两者之间的表达呈正相关，值得临床重视。
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Expression and clinical significance of EZH2 and p53 protein in breast cancer.
ZHANG Xue-yun,WANG Xiao-wu,
WANG Feng-mei.Department of Breast and Thyroid Surgery,the Affiliated Hospital of Qinghai University,Xining 810001,Qinghai,CHINA
ObjectiveTo study the expression and clinical significance of enhancer of zeste homolog 2(EZH2)and p53 protein in breast cancer.MethodsA total of 40 patients with breast cancer,who admitted to Qinghai University Affiliated Hospital from January 2016 to October 2016,were enrolled in this study.The breast cancer tissues collected from 40 patients were selected as the observation group,and another 40 patients with tumor resection in the same period were treated as the control group.EZH2 and p53 protein expression in different tissues of breast were compared,and the relationship between the expression of EZH2 and p53 protein in breast cancer tissues and the pathological changes,and the relationship between the expression of EZH2 and p53 protein in breast cancer tissues were analyzed.ResultsThe positive rates of EZH2 and p53 protein in breast cancer tissues were 52.50%and 47.50%,respectively,which were significantly higher than 20.00%and 15.00%in fibroma tissue(all P＜0.05).The positive expression of EZH2 and p53 protein in breast cancer tissues was correlated with lymph node metastasis and molecular subtypes of Basal-like(all P＜0.05).According to the correlation analysis of Spearman,it was found that there was a positive correlation between the positive expression of EZH2 and p53 protein in breast cancer tissues(r=0.66,P＜0.05).ConclusionThe expression of EZH2 and p53 protein in breast cancer tissues is positive,and the expression of the two proteins is positively correlated with each other.
Breast cancer;Enhancer of zeste homolog 2(EZH2);p53 protein;Expression;Mechanism
R737.9
A
1003—6350（2017）20—3303—04
10.3969/j.issn.1003-6350.2017.20.012
青海大学附属医院中青年科研基金一般项目（编号：ASRF-2015-YB-09）
张雪云。E-mail：406979540@qq.com
2017-02-25)
