程亮 章斌 于裕 张颖

非小细胞肺癌患者血清血管生成素样蛋白2水平的临床意义

程亮 章斌 于裕 张颖

目的探索非小细胞肺癌患者血清血管生成素样蛋白2水平的临床意义。方法收集我院收治的47例非小细胞肺癌(non-small cell lung carcinoma, NSCLC)患者，同时选取同期健康体检者为对照，检测两组人群的血清血管生成素样蛋白2(angiopoietin-like protein2, ANGPTL2)水平。并应用ROC/AUC分析其诊断的敏感性和特异性。结果NSCLC患者血清ANGPTL2水平显著高于健康对照组(6342±2048对3600±1748 pg/mL，P<0.0001)。ANGPTL2水平的升高与临床分期、淋巴结转移密切相关。结论血清ANGPTL2是临床上潜在有效的诊断NSCLC的生物标记物。

非小细胞肺癌；血管生成素样蛋白2

在全球范围内，肺癌是最常见的恶性肿瘤之一，其发病率和死亡率均很高，5年生存率仅16%左右[1],其中，85%为非小细胞肺癌(non-small cell lung carcinoma, NSCLC)。在我国，随着社会经济的发展、人口已经老龄化以及大气污染日益加重，肺癌也逐渐成为恶性疾病死亡的首要原因[2]。早期的肺癌手术后5年生存率很高，甚至可以通过手术获得治愈。因此，如何尽早发现、诊断肺癌是提高疗效的关键。由于血清样本获取有着简单、易行、创伤小的优点，找到合适、高效的肺癌血清诊断标记物有着极大的社会效益。

恶性肿瘤的发生、发展是多种因素共同作用的结果。慢性炎症刺激在癌症发生、发展，侵袭和转移中发挥了重要作用[3]。血管生成素样蛋白2(angiopoietin-like protein2, ANGPTL2)属于分泌性细胞外基质蛋白家族，与慢性炎症关系密切。NSCLC患者血清中ANGPTL2的水平如何以及其诊断价值国内尚少有报道。因此，本研究旨在探索NSCLC患者血清中的ANGPTL2浓度与患者临床特征之间的关系并分析其可能存在的诊断价值。

资料与方法

一、一般资料

我们收集了2015-2016年在本院接受手术治疗的47例NSCLC患者的血清样品。 其中男性27 例，女性20 例；年龄51-70岁，平均(63.27±7.55)岁；同时选择我院健康体检者47例为对照组，男性30例，女性17例；年龄50-68 岁，平均(62.19±7.39)岁。所有入选者均签署知情同意书。两组入选者的年龄、性别具有可比性，差异均无统计学意义(P>0.05)。所有患者均经手术病理检查确诊，并按照国际抗癌联盟TNM分期标准进行分期。患者的详细临床病理参数总结在(表1)中。

二、血清样本检测

在手术前获得血液样品。 离心后分离血清(2500rpm，10分钟)并储存在-80℃超低温冰箱中。所有标本均由同一名医师使用酶联免疫吸附法(ELISA)试剂盒(Quantikine; R&D Systems，Minneapolis，Minn)测定，根据制造商的说明书测量ANGPTL2的水平。 所有样品均一式两份检查，并将二者的平均值用于统计分析。

三、数据统计

结 果

一、 NSCLC患者血清ANGPTL2水平与健康对照的关系

NSCLC患者血清ANGPTL2水平显著高于健康对照组(6342±2048对3600±1748 pg/mL，P<0.0001)。

二、 NSCLC患者血清ANGPTL2水平与临床病理参数的关联

接着我们研究血清中的ANGPTL2水平和NSCLC患者的临床病理特征之间的关联。我们发现增加的ANGPTL2水平与淋巴结转移(P=0.002)和临床分期(P<0.001)强烈相关。 然而，与其他临床病理参数，包括年龄(P=0.77)，肿瘤大小(P=0.91)，组织学类型(P=0.08)无关。(见表1)。

三、 ROC/AUC分析

使用ROC曲线绘制血清ANGPTL2水平，以鉴定可以区分NSCLC患者和健康人群的最佳截点。 ROC曲线分析显示，在最佳截点(5117pg/mL)时，ANGPTL2的血清水平具有78.3%的敏感性和77.0%的特异性，曲线下面积(AUC)为0.836(P<0.001，95%CI：0.787-0.885，见图1)。同时还发现ANGPTL2可以更好的区分临床分期早和分期较晚的NSCLC患者，AUC为0.92(95%CI0.89-0.95)，灵敏度为0.91，特异性为0.86。

表1 NSCLC患者血清ANGPTL2水平与临床病理特征关系

图1 区分NSCLC患者和健康人群血清ANGPTL2水平的敏感性78.3%，特异性77.0%， AUC： 0.836(P<0.001, 95% cI: 0.787-0.885)

讨 论

寻找高敏感性和特异性的NSCLC血清学标志物，对于NSCLC的早诊、早治，提高远期生存率有着极为重要的临床意义。

近年来， 越来越多的研究认为肿瘤微环境中的慢性炎性刺激对肿瘤的发生、发展和抗肿瘤治疗等有重要作用。众所周知，由环境暴露(包括吸烟和吸入污染物(二氧化硅或石棉))引起的炎症增加了癌症的风险[4-6]。另外，肥胖诱导的慢性炎症也有增加癌症的风险[7]。而ANGPTL2在其中起着重要的作用[8]。 ANGPTL2可增加化学诱导皮肤鳞状细胞癌小鼠模型中的炎症致癌作用[9]。在人类一些肿瘤中也证实了ANGPTL2基因表达增加，包括前列腺癌，胃癌、乳腺癌和肝癌等[10-13]。

ANGPTL2作为一种分泌蛋白，已被证实与多种疾病有关。ANGPTL2主要从脂肪组织和心肌组织中分泌。在肿瘤的发生和发展过程中，肿瘤细胞可以分泌ANGPTL2进入血液循环[14]。我们的研究也证实了，在NSCLC患者中，其血清ANGPTL2水平明显升高，达到(6342±2048)pg/mL，而健康人群为(3600±1748)pg/mL，二者相比具有显著性统计学差异。进一步的研究发现，血清ANGPTL2的最佳截点为5117pg / mL。其敏感性和特异性分别为78.3%，77%，AUC为0.836。这表明，血清ANGPTL2是临床上一种潜在有效的肿瘤标记物来应用于NSCLC的诊断和鉴别。

在分子水平，已有的研究表明在多种肿瘤细胞中ANGPTL2基因均呈高表达，并且表达水平与淋巴结转移、临床分期以及不良预后密切相关[15-16]。这与我们研究的结果相一致，血清ANGPTL2水平也可以很好的反映NSCLC患者的淋巴结状态、临床分期。我们发现增加的ANGPTL2水平与淋巴结转移(P=0.002)和临床分期(P<0.001)强烈相关。 然而，与其他临床病理参数，包括年龄(P=0.77)，肿瘤大小(P=0.91)，组织学类型(P=0.08),吸烟(P=0.79)无关。通过ROC/AUC分析，发现在NSCLC患者中筛选出临床早期患者的敏感性和特异性均较高，AUC为0.92(95%CI0.89-0.95)，灵敏度为0.91，特异性为0.86。

总之，我们的研究结果提示血清ANGPTL2可以作为NSCLC的潜在生物标志物，有一定的诊断价值，在临床上可以很好的帮助区分早期NSCLC。但是本研究局限在于样本量较小，后续工作需要扩大样本量。另外，依靠单一的血清标记物来诊断NSCLC在临床上有很大的局限性，因此，今后还应探索ANGPTL2联合其他肿瘤标记物来诊断NSCLC的可能性。

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Clinicalvalueofserumangiopoietin-likeprotein2inpatientswithnon-smallcelllungcarcinoma

CHENLiang,ZHANGBin,YUYu,ZHANGYing

DepartmentofThoracicSurgery,JiangsuProvinceHospitalofTraditionalChineseMedicine,Nanjing,Jiangsu210029,China

ObjectiveTo investigate the clinical value of serum angiopoietin-like protein2 (ANGPTL2 )in patients with non-small cell lung carcinoma (NSCLC).MethodsThe study selected 47 patients with NSCLC as the study group and healthy people as the control group. Enzyme-linked immunosorbent assay was used to measure the levels of ANGPTL2. Sensitivity, specificity and area under curve (AUC) for serum ANGPTL2 levels were determined using receiver operator characteristic (ROC) analysis.ResultsThe expression of serum ANGPTL2 in patients with NSCLC was significantly higher in the control group than in the control group (6342±2048 vs. 3600±1748 pg/mL,P<0.0001). ROC curve analysis showed that at the optimal cut-off (5117 pg/mL), the serum level of ANGPTL2 had a sensitivity of 78.3% and a specificity of 77.0% for distinguishing breast cancer patients from healthy controls with an area under the curve (AUC) of 0.836 (P<0.001, 95% confidence interval: 0.787-0.885).ConclusionOur data indicate that serum ANGPTL2 level has potential value for early detection of NSCLC.

non-small cell lung carcinoma; angiopoietin-like protein2

2017-03-23]

10.3969/j.issn.1009-6663.2017.11.032

江苏省六大人才高峰项目(No 2016-WSW-015)

210029 江苏 南京，江苏省中医院 南京中医药大学附属医院心胸外科