刘宏 胡伦文 李玉杰 李涛

[摘要] 目的 对一起疑似霍乱疫情的病原菌进行实验室检测。方法 按照《霍乱防治手册》（第六版）对采集的480份标本进行霍乱弧菌检测。结果 O139霍乱弧菌血清凝集试验阳性的标本共16份，其中患者粪便（或肛拭）标本共10份，外环境样品6份。结论 这起疫情是一起因聚餐引起的霍乱O139暴发疫情。

[关键词] 霍乱；实验室检测；暴发；疫情

[中图分类号] R254.7 [文献标识码] A [文章编号] 1672-5654（2017）06（b）-0053-02

霍乱是由O1群或O139群霍乱弧菌引起的急性肠道传染病，该病发病急，传播快，波及范围广，能引起大范围流行，属甲类传染病。湖北省松滋市位于湖北省中南部，处于平原与丘陵结合地区，2012年8月曾发生一起输入性霍乱疫情，疫情的发生主要跟食用被霍乱弧菌污染的水产品，特别是甲鱼有关[1-2]。2016年10月5日8时，松滋市疾控中心接到市人民医院电话报告一例疑似霍乱病例。疾控中心立即组织相关专业人员赶赴现场核实调查处理并收集患者标本进行复核，复核鉴定结果为O139群霍乱弧菌阳性，毒力基因CTX阳性。截止10月14日，该起暴发疫情累计报告病例10例（其中健康带菌者2例），所有病例均来自陈店镇夹马槽村婚宴就餐者。结合流行病学特征，临床表现和实验室检测结果综合分析，确定这是一起因聚餐引起的霍乱O139暴发疫情。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 采样器材 10 mL碱胨水管、含50 mL 10倍浓缩碱胨水的广口瓶，500 mL无菌广口瓶，一次性无菌采样袋，肛拭采样器，无菌棉签，一次性纸杯，酒精灯，灭菌规格板（5 cm2），10 mL复方中和剂管，10 mL无菌生理盐水管等。

1.1.2 检测试剂 碱性蛋白胨水增菌液，庆大霉素琼脂培养基，TCBS琼脂，O1、O139群霍乱弧菌检测胶体金试剂，O1、O139群霍乱弧菌诊断血清，氧化酶试剂，革兰氏染液，营养琼脂，以上试剂均在有效期内使用。

1.2 方法

1.2.1 检测标准 对采集的所有标本均严格按照《霍乱防治手册》[3]（第六版）进行病

原学检测。

1.2.2 采样方法 （1）粪便、呕吐物：用棉签取适量于10 mL碱胨水管。无粪便标本可采集肛拭，将棉拭子插入患者直肠内3～5 cm，旋转360°，置于碱胨水管中，弃去手接触的部分。（2）水体标本：①盐水瓶法：采集30 cm深度以内的表层水450 mL置于含50 mL 10倍浓缩碱胨水瓶中。②moore纱布集菌法：将纱布放在水中，放置24 h后，将带水的纱布放入碱胨水瓶中送检。③食品：针对不同的可疑食品，取适量于无菌采样袋中，注意采集过程中不能交叉污染。④海（水）产品：选取海（水）产品或涂抹拭子，置于无菌采样袋或试管中送检。⑤物体表面：用灭菌棉拭子蘸取碱胨水后涂擦相关污染物体表面，放入碱胨水管中。消毒效果监测采样：将灭菌棉签润湿后用无菌规格板采集100 cm2的污染物表面，放入采样管中送检。

1.2.3 标本种类及数量 患者粪便或肛拭标本63份，病例家居外环境样品（主要是厕所粪便和水樣）47份，参加集中就餐人员肛拭样品61份，密切接触者肛拭样品29份，食品、水产品（甲鱼、基尾虾等）16份，物表样品14份，消毒效果监测样品120份，医疗机构应急监测腹泻病例排泄物标本130份，合计480份。

1.2.4增菌、分离培养 ①增菌。将标本接种于碱胨水中置37℃培养6～8 h，注意观察增菌液生长情况，增菌时间也可适当延长。当标本含菌量较少时，如患者恢复期检测、带菌状况调查，为提高检出率，可进行二次增菌。水体（包括食品、海水产品、物表涂抹标本等）必要时也可进行二次增菌。②划线分离、金标快检。取适量表层增菌液接种于庆大霉素平板和TCBS平板，置37℃培养18～24 h；同时取增菌液用霍乱弧菌O1和O139快检金标试纸进行初步的筛查试验，为检测赢得时间和提供下一步检测方向。③菌落形态。霍乱弧菌菌落为圆形、半透明、表面光滑、扁平、边缘整齐。庆大霉素平板上菌落为无色，TCBS琼脂上菌落为黄色。

1.2.5 菌株鉴定 ①形态与染色。对可疑菌落进行革兰氏染色镜检，为革兰氏阴性短小稍弯曲的杆菌，无芽孢，无荚膜，菌体两端钝圆或稍平。②氧化酶试验。用灭菌木质牙签挑取24 h生长纯培养菌落涂抹在氧化酶试纸上，观察颜色变化，1～2 min内出现黑紫色为阳性，不变色为阴性。③血清凝集。分别取霍乱O1多价、O139群诊断血清一滴于洁净玻片上，然后挑取少许单个纯培养可疑菌落与标准血清混合，1 min内出现凝集为阳性，同时用生理盐水做对照。④动力试验。取纯培养物在暗视野显微镜下观察霍乱弧菌呈穿梭样运动。

1.3 药敏试验

该实验室不能开展药敏试验，该试验由省疾控卫检所协助完成。

2 结果

①因为松滋市此起霍乱疫情为湖北省2016年首发疫情，必须将首发病例标本送至湖北省疾控中心卫检所复核鉴定。鉴定结果如表1。

②病原菌株药敏试验结果。该病原菌株对庆大霉素、阿奇霉素、氯霉素耐药；氨苄西林、头孢他啶中介；氨苄西林、头孢唑啉、头孢噻肟、红霉素、环丙沙星、甲氧苄啶等敏感。

③经实验室检测，O139霍乱弧菌血清凝集试验阳性的标本共16份，其中患者粪便（或肛拭）标本共10份（含健康带菌者2例），外环境样品6份。6份外環境阳性标本分别为婚宴东家消毒前厕所粪便、3例确诊病例家中化粪池、厕所粪便消毒前标本。其余的环境标本、食品、密切接触者标本和腹泻病例应急检测等结果均为阴性。

3 讨论

该起霍乱暴发疫情涉及范围广，人数多，包含松滋市5个乡镇，陈店镇168名、老城镇27名、沙道观镇1名、新江口镇19名、八宝镇2名，还有沙市5名，宜昌6名，合计228名。在共同就餐人员中检索出2例健康带菌者，通过及时发现，及时采取隔离措施，为防止疫情的蔓延起到了积极的作用。在此次霍乱疫情应急处置中，正是检验人员有条不紊、夜以继日的辛苦付出，还有荆州市和省级疾控中心实验室各级领导们的专业指导和技术支撑，在最短时间内报告检测结果，使得松滋市政府及时启动突发公共卫生事件四级应急响应，为疫情的联防联控、及时控制传染源，切断传播途径、防止疫情的蔓延起到了重要的作用。该次霍乱暴发疫情无死亡病例，无二代病例发生。

3.1 传染源情况不明

病例和带菌者均来自陈店镇夹马槽村9月30日—10月1日的婚宴。根据流行病学调查，怀疑该次婚宴菜单中基围虾污染可能是该起疫情的主要原因。经调查了解：基围虾在9月30日下午清洗干净，水煮沸后放入锅中焯水5 min捞出，配调料后上桌，供应30日、1日2 d，放在冰箱保存。首发病例自述10月1日晚将晚宴桌席剩余的基围虾打包放冰箱后第2天没有加热就一次性吃完，1 d后发病，恶心呕吐，腹泻十余次到医院就诊。由于时隔多日，无法采集到当日婚宴剩余的基围虾，前后两次在基围虾采购点（水产品批发市场）采集基围虾、养殖水、物表等相关标本，均未检出霍乱弧菌，无法确定传染源，但流行病学调查表明是聚餐时感染，这和罗同勇[4]所述一致。湖北省疾控中心卫检所反馈，该起疫情分离株经溯源分析，在国家数据库中未发现相似株。

3.2 加强食品安全督导检查

十月初为国庆小长假，居民探亲访友、旅游出行等聚餐需求大量增加，同时该月为婚礼宴请高峰期，餐饮服务卫生条件、食品质量安全难以适应消费要求。通过该次调查发现，松滋市本地农村自办宴席，加工食品场地卫生条件差，加上缺乏有效的監管，食品在生产、加工、贮存和消费环节容易被污染[5]，所以要加强农村食品卫生安全检查与管理，广泛开展健康教育宣传，提高农村居民自我防病防疫意識，特别是要加强农村自办宴席的监管，从源头上减少此类事件的发生。

[参考文献]

[1] 丁晓莉，李文桥，喻同琦，等.一起O139群霍乱疫情的调查[J].公共卫生与预防医学，2014，25（2）：99-100.

[2] 邱兴庆，吴家兵，高永军，等.一起聚餐所致O139霍乱疫情和甲鱼市场调查[J].实用预防医学，2013，20（2）：171-174.

[3] 肖东楼.霍乱防治手册[M].6版.北京：人民卫生出版社，2013.

[4] 罗同勇，余滨，艾运生，等.武汉市2008年一起霍乱O139型疫情的应急处置经过[J].现代预防医学，2011，38（3）：544-546.

[5] 周建波，黄竹林，张劲夫.长沙市农村四起聚餐霍乱暴发疫情调查分析[J].实用预防医学，2004，11（3）：528-529.

（收稿日期：2017-03-16）