秦虎强，胡卓群，高小宁，韩青梅，黄丽丽，陈亚菲，张 强(旱区作物逆境生物学国家重点实验室，西北农林科技大学 植物保护学院,陕西杨凌 712100)

7种杀菌剂对抑制油菜菌核萌发及子囊盘的杀灭效果

秦虎强，胡卓群，高小宁，韩青梅，黄丽丽，陈亚菲，张 强
(旱区作物逆境生物学国家重点实验室，西北农林科技大学 植物保护学院,陕西杨凌 712100)

为探讨不同杀菌剂对抑制油菜菌核萌发及子囊盘的杀灭效果，采取室内测定和田间试验的方法，对7种常用杀菌剂的药效以及不同外部条件对菌核萌发、子囊盘数量及其存活率的影响进行试验研究。结果显示，供试7种杀菌剂均能显著抑制菌核萌发，并对子囊盘有显著的杀灭效果，田间防效均达到70%以上；不同外部条件对菌核萌发、子囊盘数量及其存活率有显著影响，在潮湿状态下菌核萌发率达到64.4%，干燥状态下能够存活但不能萌发，水淹状态下菌核死亡率达到90%以上，在药剂处理条件下虽能存活但萌发率较低；杀菌剂处理对不同深度土壤中的菌核萌发的抑制效果存在明显差异，埋土深度大于7 cm很少萌发子囊盘，小于4 cm能够较好萌发；使用杀菌剂土表喷雾处理能显著抑制菌核萌发产生子囊盘，其抑制率达到66.7%以上，但随埋土深度增加对菌核萌发抑制率明显降低。说明多菌灵、百菌清、菌核净及甲基托布津均可作为今后抑制油菜菌核萌发及杀灭子囊盘的较理想药剂，同时采取稻-油轮作、播栽前土壤深翻或土表药剂处理，能显著降低田间菌源量，是控制病害的有效措施。

油菜菌核病；菌核；子囊盘；杀菌剂；药效

油菜菌核病(Rape sclerotinia rot)是一种世界性病害[1]，俗称烂秆、白秆、霉蔸等，其病原物为核盘菌[Sclerotiniasclerotiorum(Lib.) de Bary]，属子囊菌亚门真菌。在中国长江流域、西南地区和陕西的南部地区危害严重。常年发病株率高达10%～30%，严重时达80%以上，一般可导致减产10%～30%，病情严重时减产达70%以上，含油量降低1%～5%[2]，严重影响油菜产量和品质。

目前，国内外对油菜菌核病的研究较多，尤其在油菜菌核病的致病机理、化学防治、生物防治等方面已取得重要进展。在防治方面，仍以化学药剂防治为主，也是目前最直接、最简便、最有效的防治手段。其主要防治药剂有腐霉利、戊唑醇、百菌清、多菌灵、甲基托布津、咪酰胺、菌核净等[3-4]。主要防治时期为油菜初花期至盛花期进行田间药剂茎叶面喷雾，有利于防止田间菌核子囊孢子的萌发侵染，防病效果比较理想[4-5]，但该期施药由于油菜植株高大，存在施药不便、用药困难、劳动强度大等缺点；同时，国内外尚缺乏有关杀菌剂在抑制菌核萌发和子囊盘杀灭效果方面的研究报道[6]。为了进一步探讨不同杀菌剂对抑制菌核萌发和子囊盘的杀灭效果以及不同湿度、土壤深度条件下对菌核活力、子囊盘萌发的影响，本研究采取室内测定和田间试验的方法，对多菌灵、百菌清、菌核净、腐霉利、戊唑醇、咪酰胺及甲基托布津7种常用杀菌剂的药效以及不同外部条件、土壤深度对菌核萌发、子囊盘数量及其存活率的影响进行试验研究，观察菌核及子囊盘对不同药剂处理的反应，以便为田间早期防治提供参考。

1 材料与方法

1.1 供试菌源

油菜菌核病菌(Sclerotiniasclerotiorium)。油菜菌核为2014年5月中旬在陕西汉中市汉台区油菜收获期田间罹病的油菜茎秆中采集，经4～10 ℃(冰箱储藏间)低温处理50 d后保持在室温、保湿条件下于盆钵沙土中进行培养。

1.2 供试药剂

多菌灵w=50%可湿性粉剂(WP)，山东华阳科技股份有限公司生产；百菌清w=75%可湿性粉剂(WP)，西安美邦药业有限公司提供；菌核净w=40%可湿性粉剂(WP)，山东富先达农药有限公司生产；速克灵w=50%可湿性粉剂(WP)，日本住友化学株式会社生产；戊唑醇w=43%悬浮剂(SC)，拜耳作物有限公司生产；咪酰胺w=25%乳油(EC)，杭州庆丰农化有限公司生产；甲基托布津w=80%可湿性粉剂(WP)，西安204所农用化学品公司生产。

1.3 试剂和仪器

十二烷基硫酸钠，化学纯；冰箱；培养箱；培养皿；5 cm×5 cm培养钵。

1.4 研究内容与试验设计

1.4.1 7种杀菌剂对菌核萌发的抑制效果 供试7种杀菌剂均设5个质量浓度梯度及清水对照(CK)(表1)。

表1 7种杀菌剂质量浓度梯度设置Table 1 Mass concentration gradient of seven fungicides

试验均采取菌体表面喷雾。在室温下5 cm×5 cm培养钵中保湿培养。试验过程采取无菌水土壤保湿措施，保鲜膜覆盖，使土壤一直处于较潮湿状态。每5 cm×5 cm培养钵中放置菌核10粒，试验重复3次，并间隔5～7 d定期观察菌核对不同药剂处理的反应及霉烂情况，统计菌核萌发率、萌发的子囊盘数量等，计算菌核萌发抑制效果，同时建立毒力回归曲线方程，求出各药剂EC50、95%置信限及毒力回归方程相关系数。菌核萌发抑制效果计算公式如下。

抑制效果=[(总菌核数 - 处理后萌发菌核数)/总菌核数]×100%

1.4.2 7种杀菌剂对子囊盘的杀灭效果 试验于室温下5 cm×5 cm培养钵中进行，试验过程采取无菌水土壤保湿措施，保鲜膜覆盖，使土壤一直处于较潮湿状态，菌核在土壤中埋藏深度为0～2 cm，待菌核萌发出子囊盘后开始喷施药剂。试验设计及药剂处理同“1.4.1”。每处理播菌核5粒，3次重复，并定期3～5 d观察统计菌核子囊盘萌发率、子囊盘对不同药剂处理的反应及死亡(变色或溃烂)情况，统计后期子囊盘萌发情况，计算子囊盘萌发率，并比较不同药剂对子囊盘的杀灭效果，同时建立毒力回归曲线方程，求出各药剂EC50、95%置信限及毒力回归方程相关系数。防效计算公式如下。

防效=处理后腐烂死亡子囊盘数/总子囊盘数×100%

1.4.3 不同湿度条件对菌核萌发及存活率的影响 试验在室温下培养皿中进行。设干燥、潮湿、淹水、多菌灵w=50% WP 3.33 mg/mL菌体表面喷雾共4个处理，每皿菌核30粒，3次重复，定期用自来水保湿，间隔5～7 d定期观察菌核对不同处理的反应、子囊盘萌发及死亡(变色、变软或溃烂)情况，记载菌核萌发数量、萌发的子囊盘数量、死亡菌核数量等，统计菌核萌发率、死亡率等。1.4.4 不同土壤深度条件下杀菌剂对菌核萌发的抑制效果 试验在室温下5 cm×5 cm培养钵中进行，试验过程使用无菌水采取土壤保湿措施，土壤一直处于较潮湿状态。试验处理设菌核在土壤中埋藏深度分别为0(土表)、2、4、7、10 cm 5个处理，每处理均采用多菌灵w=50% WP 3.33 mg/mL菌体或土表喷雾，每处理菌核5粒，3次重复，同时设相同土壤埋藏深度不用药对照组，药后定期3～5 d观察菌核对不同处理的反应及死亡情况(发黑变色、或腐烂)及后期菌核子囊盘萌发情况，统计菌核死亡率及菌核子囊盘萌发率。

1.4.5 不同杀菌剂对油菜菌核子囊盘的田间防效试验 试验地点设在汉中市汉台区老君镇付庙村(33°11′47.57″N，107°05′66.35″E)，试验于3月上旬子囊盘萌发始盛期进行，药剂处理见表6，并设不施药对照，处理区面积6 m2，处理间重复3次。在药前和施药后15 d分别调查处理区子囊盘数及腐烂死亡子囊盘数，计算不同药剂处理对子囊盘的杀灭效果。防效计算公式如下。

防效(%)=[PT1×(1+K)-PT2]/[PT1×(1+K)]×100%

其中：K=(对照区药后子囊盘数-对照区药前子囊盘数) /对照区药前子囊盘数；K为校正系数；PT1为药剂处理区药前子囊盘数；PT2为药剂处理区药后子囊盘数。

1.5 统计分析

应用唐启义等[7]DPS 数据处理软件对田间试验结果进行处理和方差分析，并建立回归方程，计算EC50；采用Duncan’s新复极差法进行差异显著性检验。

2 结果与分析

2.1 7种不同杀菌剂对菌核萌发的抑制效果

供试7种杀菌剂对菌核萌发均有显著抑制效果(表2)。从对菌核萌发的抑制效果来看，7种杀菌剂分别以质量浓度为3.33、2.0、3.33、3.33、1.67、1.67、0.67 mg/mL及以上时效果最好，在施药后15 d其抑制效果均达到80.0%以上，其适宜施药质量浓度分别为3.33～10.0、2.0～3.33、3.33～10.0、3.33～10.0、1.67～3.33、1.11～1.67、0.67～1.0 mg/mL。经方差分析，各药剂不同质量浓度处理间差异达显著水平(P<0.05)。

从表3结果看出，杀菌剂使用质量浓度与菌核萌发抑制效果均呈负相关。7种杀菌剂EC50相比较，以戊唑醇w=43% SC、咪酰胺w=25% EC及甲基托布津w=80% WP效果较好，百菌清w=75% WP和速克灵w=50% WP次之，而以菌核净w=40% WP和多菌灵w=50% WP略差。

2.2 7种杀菌剂对子囊盘的杀灭效果

从杀灭效果(表4)来看，7种杀菌剂分别以施药质量浓度为3.33、1.43、3.33、3.33、1.67、1.67和1.0 mg/mL以上时效果较佳，杀灭效果可达到80%以上，其适宜施药质量浓度分别为2.0～3.33、1.43～2.0、3.33～10.0 mg/mL、1.67～3.33、1.67～3.33、1.67～3.33和1.0～2.0 mg/mL。经方差分析，各药剂不同质量浓度处理间差异均达显著水平(P<0.05)。

从表5看出，7种杀菌剂施药质量浓度与子囊盘的杀灭效果均呈负相关。EC50相比较，以戊唑醇w=43%SC、百菌清w=75%WP、甲基托布津w=80%WP及咪酰胺w=25%EC较好，速克灵w=50%WP次之，而以多菌灵w=50%WP及菌核净w=40%WP略差。

表2 7种杀菌剂对抑制菌核萌发药后15 d的效果Table 2 Antifungal effects of seven fungicides on sclerotial germination with under 15 d post treatment

注：数据为“平均数±标准差”。数据后同行不同小写字母表示经Duncan’s新复极差法检验差异显著性(P<0.05)。下同。

Note:Data in the table are “mean±SD”.Data followed by different lowercase letters in the same row indicate significant difference atP<0.05 level by Duncan’s new multiple range test.The same below.

表3 7种杀菌剂对抑制菌核萌发药后15 d的室内毒力测定Table 3 Laboratory toxicity measurement of sclerotial germination with seven fungicides at 15 d post treatment

表4 7种药剂对子囊盘药后15 d的杀灭效果Table 4 Effecacy of seven fungicides on apothecial production at 15 d post treatment

表5 7种药剂对子囊盘药后15 d的室内毒力测定结果Table 5 Laboratory toxicity measurement of apothecia with seven fungicides at 15 d post treatment

2.3 不同湿度条件对菌核萌发及存活率的影响

不同湿度条件对菌核的萌发率、子囊盘数量及其存活率有显著影响(表6)。在干燥状态下，菌核均能存活但不能萌发；在保湿状态下，菌核能够较好地萌发并产生子囊盘，菌核萌发率达到64.4%，90 d后菌核存活率达到95.6%；在水淹状态下，菌核较少能够萌发并产生子囊盘，存活率较低，仅为8.9%；多菌灵w= 50% WP 3.33 mg/mL 表面药剂处理，菌核萌发率和子囊盘数量与水淹状态相比相当或略高，但明显低于潮湿状态，而菌核存活率较高，可达到70%以上。

表6 不同外部条件对菌核萌发及存活率的影响Table 6 Influence of different external conditions on sclerotial germination and it survival rate

注：数据后同列不同小写字母表示经Duncan’s新复极差法检验差异显著(P=0.05)，下同。

Note：Data followed by different lowercase letters in the same column indicate significant difference atP=0.05 level by Duncan’s new multiple range test. The same below.

2.4杀菌剂对不同土壤深度条件下菌核萌发的抑制效果

采用杀菌剂处理，对不同深度土壤中的菌核萌发的抑制效果存在明显差异(表7)。在土壤表层，菌核能够很好的萌发，萌发率高达93.3%，而经杀菌剂处理后，菌核未见萌发，抑制效果达到100%；菌核埋土深度2～4 cm，在不施药情况下，菌核能够较好的萌发，杀菌剂处理对菌核的萌发抑制率达到66.7%以上，只有部分能够萌发，对子囊盘数量的抑制率达到73.3%以上；在菌核埋土深度7～10 cm状态下，菌核均很少萌发，也未见产生子囊盘。

2.5 不同杀菌剂对子囊盘的田间杀灭效果

结果表明(表8)，7种药剂对子囊盘均有显著杀灭效果，防效均达到70%以上。

表7 杀菌剂土表喷雾对不同土壤深度菌核萌发的抑制效果Table 7 Fungicides inhibition effect on sclerotial germination by soil surface spray with different depths

表8 不同杀菌剂对油菜菌核子囊盘的田间杀灭效果Table 8 Effecacy of different fungicides on rape Sclerotinia Sclerotiorium apothecia in field

3 讨 论

核盘菌在油菜上的侵染循环主要以气传的子囊孢子或分生孢子从寄主的花、衰老叶或伤口侵入，以病健组织接触构成再侵染[8]。而在田间，菌核萌发并释放大量子囊孢子的时期与油菜花期基本吻合[5,9]。因此，化学防治适期为油菜初花期至盛花期，此时进行药剂茎叶面喷雾有利于防止田间子囊孢子的萌发侵染，防病效果虽比较理想[4-5,10]，但该期施药由于油菜植株高大，存在施药不便、用药困难、劳动强度大等缺点。王振荣等[6]研究认为，油菜菌核病病原子囊孢子属近距离传播，子囊孢子传播距离一般在200 m范围内，部分可扩散300 m外，在子囊萌发始盛期，采用乙多洗复配剂对田埂子囊盘杀灭效果达95%以上，可有效地降低初侵染菌源量和油菜发病程度。谢桂英等[11]研究结果显示，草甘膦、乙羧氟草醚、精喹禾灵、乙草胺和莠去津等5种除草剂能明显抑制油菜菌核病菌菌丝生长和菌核萌发。本研究结果表明，供试7种杀菌剂对油菜菌核萌发均有显著抑制效果，并对子囊盘有较好的杀灭效果。因此，对油菜连片种植区，在油菜现蕾初花期、菌核萌发前采用上述药剂对田埂、地头、侧边以及旱茬油菜田等易留落菌核之处进行地面喷雾施药，可以有效地抑制菌核的萌发和降低子囊盘的数量；而在菌核萌发盛期，施用上述药剂对子囊盘有较好的杀灭效果，可显著降低田间菌源量，不仅使化学防治时期提前，克服目前花期施药存在的缺点弊端，而且可达到防病目的。

杨谦等[12]研究认为，菌核经干燥处理后不能萌发产生子囊盘。本研究结果显示，不同湿度等外部条件对菌核萌发、子囊盘数量及其存活率有显著影响。菌核在干燥状态下能很好地存活但不能萌发，在潮湿状态下能够很好的萌发，在水淹和药剂处理下，菌核虽能萌发，但萌发率较低，溃烂死亡率显著提高，尤其在水淹状态下菌核溃烂死亡率达到90%以上。因此，在油菜收获后，采取稻-油水旱轮作或药剂土表处理，可有效降低田间菌源量，这与田间试验结果基本一致。

杀菌剂处理对不同深度土壤中的菌核萌发的抑制效果存在明显差异。菌核在埋土深度大于7 cm 以上很少萌发产生子囊盘；在土壤表层和埋土深度小于4 cm条件下，能够很好的萌发，其萌发率达73.3%以上，使用杀菌剂土表喷雾处理后，能显著的抑制菌核的萌发并产生子囊盘，其抑制率达到66.7%以上，但随埋土深度加大对菌核萌发抑制率明显降低，这与杨谦等[12]研究结果基本一致。说明，在生产实际中，除菌核萌发期采用药剂防治技术外，采取土壤深翻措施，也可大大降低当年菌核的萌发率，从而达到降低菌源量和控制病害的目的。

Reference：

[1] 张 源,阮 颖,彭 琦,等.油菜菌核病致病机理研究进展[J].作物研究,2006(5):549-551.

ZHANG Y,RUAN Y,PENG Q,etal.Research progress of the pathogenesis ofSclerotiniasclerotioumin rape seed[J].CropResearch,2006(5):549-551(in Chinese with English abstract).

[2] 李丽丽.世界油菜病害研究概述[J].中国油料,1994,16(1):79-81.

LI L L.The world rape disease research overview[J].OilCropsofChina,1994,16(1):79-81(in Chinese with English abstract).

[3] 秦虎强,高小宁,左叶信,等.不同药剂和农业措施对油菜菌核病的防治研究[J].西北农业学报,2011,20(4):173-178.

QIN H Q,GAO X N,ZUO Y X,etal.Control effect of different fungicide and agricultural measureson the rapeSclerotiniastem rot[J].ActaAgriculturaeBoreali-occidentalisSinica,2011,20(4):173-178(in Chinese with English abstract).

[4] 秦虎强,陈芳颖,付鼎程,等.油菜菌核病菌对10种杀菌剂的敏感性及不同药剂田间防效[J].西北农林科技大学学报(自然科学版),2011,39(7):117-122.

QIN H Q,CHEN F Y,FU D CH,etal.Sensitivities determinations ofSclerotiniaSclerotioriumto 10 fungicides and controlling effect of different medicament to the rape Sclerotinia stem rot in Field[J].JournalofNorthwestA&FUniversity(NatureScienceEdition),2011,39(7):117-122(in Chinese with English abstract).

[5] 张信扬,彭连英.油菜菌核病发生规律研究[J].云南农业大学学报,2000,15(3):289-290.

ZHANG X Y,PEN L Y,Studies on the occurrence ofSclerotiumblight of rape oil[J].JournalofYunnanAgriculturalUniversity,2000,15(3):289-290(in Chinese with English abstract).

[6] 王振荣,高同春,胡宏云.防治田埂子囊盘控制油菜菌核病研究[J].植物保护学报,1996,23(2):111-114.

WANG ZH R,GAO T CH,HU H Y.Preventing the occurrence of rape seed stem rot by controlling the apothecia on the field ridges[J].ActaPhytophylacicaSinica,1996,23(2):111-114(in Chinese with English abstract).

[7] 唐启义,冯明光.DPS 数据处理系统-实验设计、统计分析及模型优化[M].北京:科学出版社,2006:551-773.

TANG Q Y,FENG M G.DPS Data Processing System,Experimental Design and Statistical Analysis and Model Optimization [M].Beijing:Science Press,2006:551-773(in Chinese) .

[8] 王崇仁,汪国森, 吴友三.核盘菌侵染循环类型的研究[J].植物病理学报,1992,22(4):293-297.

WANG CH R,WANG G S,WU Y S.On the types of infection cycle of the sclerotiniaceae[J].ActaPhytopathologicaSinica,1992,22(4):293-297(in Chinese with English abstract) .

[9] 郭世平,曾德联,李德友.油菜菌核病发生规律初探[J].中国油料,1989(1):61-64.

GUO SH P,ZENG D L,LI D Y.Preliminary explored on rapeSclerotiumdisease occurring regularity[J].OilcropsofChina,1989(1):61-64(in Chinese with English abstract).

[10] 曹奎荣,王华弟,孙祥良,等.油菜菌核病化学防治适期研究[J].农药科学与管理,2014,35(12):63-66.

CAO K R,WANG H D,SUN X L,etal.Study on suitable time of chemical control againstSclerotiniaSclerotiorum[J].PesticideScienceandAdministration,2014,35(12):63-66(in Chinese with English abstract).

[11] 谢桂英,程绎南,白润娥,等.5种除草剂对油菜菌核病菌的影响[J].农药,2011,50(12):918-920.

XIE G Y,CHENG Y N,BAI R E,etal.Influence of five herbicides on oilseed rapeSclerotiniasclerotiorum[J].Agrochemicals,2011,50(12):918-920(in Chinese with English abstract).

[12] 杨 谦,张翼鹏.核盘菌子囊盘形成的影响因子[J].东北林业大学学报,1995,23(2):126-129.

YANG Q,ZHANG Y P.The effects of some factors influencing carpogenic germination of sclerotia ofSclerotiniasclerotiorum(LIB.)debary[J].JournalofNortheastForestryUniversity,1995,23(2):126-129(in Chinese with English abstract).

EffectofSevenFungicidesonInhibitingGerminationandApotheciaDevelopmentinSclerotiniaSclerotiorium

QIN Huqiang,HU Zhuoqun,GAO Xiaoning,HAN Qingmei,HUANG Lili,CHEN Yafei and ZHANG Qiang
(State Key Laboratory of Crop Stress Biology for Arid Areas，College of Plant Protection,Northwest A&F University,Yangling Shaanxi 712100,China)

In order to explore effect of different fungicides on inhibitingSclerotiniaSclerotiorium,we tested the germination rate of sclerotial,numbers and survival rate of apothecia treated with seven common fungicides under different conditions. The results showed that the all seven fungicides could significantly inhibit sclerotial germination and apothecia development with the control efficacy of over 70% in the field. The germination rate of sclerotia,number and survival rate of apothecia inS.Sclerotioriumhad been significantly effected under different external conditions. The germination rate of sclerotia was 64.4% under wet condition. In contrast,the sclerotia could survive but not germinate in the dry state. The death rate of sclerotia was more than 90% in the watered-out state. The germination rate of sclerotia was very low with the fungicide treatments. The inhibition effect of fungicide treatment on germination rate of sclerotia was different depending on soil depth. Few apothecia were produced when the soil depth was larger than 7 cm. By contrast,much more apothecia were produced when the soil depth was less than 4 cm. By using microbicides soil surface spray,the apothecia production inSclerotiniaSclerotioriumcan be significantly reduced to more than 66.7%. But the inhibition rate was decreased obviously along with the increase of soil depth. The results showed that the premium fungicides in controling the sclerotial germination and apothecial development of Carbendazim,Chlorothalonil,Dimetachlone and Thiophanate-methyl were used together,the effective disease management was taken in crop rotation of rice and rape,deep tilling before sowing or fungicide soil surface treatment in the field.

RapeSclerotiumRot;SclerotiniaSclerotiorium; Aspothecia; Fungicide; Efficacy

2016-08-31

2017-03-24

National Nonprofit Sector (agriculture) Research Project(No.201103016);Special Project of Sci-Tech Innovation and Achievements Transfer of Experimental and Demonstrative Stations (Base) of the Northwest A&F University(No.XNY2013-46)；Disciplines Innovation,Introducing Intelligence Plan of Institutions of Higher Learning(No. B07049).

QIN Huqiang,male,associate research fellow.Research area:plant integrated pest management.E-mail:qinhuqiang@nwsuaf.edu.cn

S435.654; S482.2

A

1004-1389(2017)09-1395-07

(责任编辑：郭柏寿Responsibleeditor:GUOBaishou)

日期：2017-09-12

网络出版地址：http://kns.cnki.net/kcms/detail/61.1220.S.20170912.1741.034.html

2016-08-31

2017-03-24

国家公益性行业(农业)科研专项(201103016)；西北农林科技大学试验示范站(基地)科技创新与成果转化专项(XNY2013-46)；高等学校学科创新引智计划(B07049)。

秦虎强，男，副研究员，研究方向为植物有害生物综合治理。E-mail: qinhuqiang@nwsuaf.edu.cn

黄丽丽，女，教授，博士导师，主要从事植物病理学及病害综合治理研究。E-mail: huanglili@nwsuaf.edu.cn

CorrespondingauthorHUANG Lili ,female,professor,doctoral supervisor. Research area:plant pathology and comprehensive treatment of plant diseases. E-mail:huanglili@nwsuaf.edu.cn