胡美庆 陶茂根 胡建生

胃癌前病变不同阶段胃黏膜DNA甲基化表达分析及临床意义

胡美庆 陶茂根 胡建生

目的 探讨胃癌前病变不同阶段胃黏膜DNA甲基化表达差异及临床意义。方法 选取2011年1月至2012年12月病理检查诊断为慢性萎缩性胃炎、肠上皮化生、轻-中度异型增生、重度异型增生、胃癌患者196例；另选择慢性浅表性胃炎患者55例（病理结果确诊为慢性浅表性胃炎，HP感染阴性）为对照。分别提取所有患者的DNA，酚/氯仿抽提法提取；采用甲基化特异聚合酶链反应（MSP）法检测胃黏膜组织c-myc，p16，hMLH1DNA甲基化表达并比较。结果 慢性浅表性胃炎组均未发生p16甲基化、c-myc基因甲基化、hMLH1基因甲基化；随着病理严重程度的增加，p16甲基化、c-myc基因甲基化、hMLH1基因甲基化表达的病例数逐渐增多，胃癌组患者中p16甲基化、c-myc基因甲基化、hMLH1基因甲基化表达均为最高（P＜0.05）。结论 随着病理严重程度的递增，各项DNA甲基化表达情况也逐渐增多，这对于胃癌的早期诊断、早期治疗、预后分析均有重要意义；且可以对胃癌前病变进行早期干预治疗，以及定期的随访观察，减少胃癌的发生。

胃癌前病变 DNA甲基化 p16基因 c-myc基因 hMLH1基因

胃癌是常见的消化道恶性肿瘤之一，居全球肿瘤发病率和病死率的第二位［1］。严重危害人类的健康。我国是胃癌的高发国，其病死率占各肿瘤的首位。由于胃癌目前疗效尚难令人满意，癌前发现、癌前诊断和癌前治疗已成为减少胃癌发病率的重要策略。作者应用甲基化特异聚合酶链反应（MSP）法及免疫组化（SP法），检测不同阶段胃癌前病变患者的胃黏膜c-myc，p16，hMLH1DNA甲基化表达情况，分析在不同阶段的胃癌前病变中各项DNA甲基化表达的差异及其临床意义。

1 临床资料

1.1 一般资料 选取2011年1月至2012年12月本院病理检查结果明确为慢性萎缩性胃炎、肠上皮化生、轻中度异型增生、重度异型增生、胃癌的患者196例，男105例，女91例；年龄18～70岁。同时选取慢性浅表性胃炎患者55例（病理结果确诊为慢性浅表性胃炎，HP感染阴性）为对照组，男30例，女25例；年龄20-82岁。分析不同病变阶段各组p16甲基化、c-myc基因甲基化、hMLH1基因甲基化表达情况。

1.2 方法 （1）组织DNA的提取：采用常规的酚-氯仿方法提取组织DNA。（2）p16、c-myc、Hmlh1基因DNA甲基化的检测：采用甲基化特异性-PCR扩增（MSP）法检测胃黏膜组织c-myc，p16，hMLH1DNA甲基化表达。检测结果分为阴性和阳性。结果提示有DNA甲基化表达为阳性，结果提示无DNA甲基化表达为阴性。

1.3 统计学方法 采用SPSS22.0统计软件。阳性表达率的组间比较用χ2检验，以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

慢性浅表性胃炎组均未发生p16甲基化、c-myc基因甲基化、hMLH1基因甲基化；不同阶段病变各组的p16甲基化、c-myc基因甲基化、hMLH1基因甲基化均有表达，慢性萎缩性胃炎组中p16甲基化、c-myc基因甲基化、hMLH1基因甲基化表达患者最少，随着病理严重程度的增加，p16甲基化、c-myc基因甲基化、hMLH1基因甲基化表达的病例数逐渐增多，胃癌组患者表达最高（P＜0.05）。慢性浅表性胃炎组中p16甲基化、c-myc基因甲基化、hMLH1基因甲基化均未发生；其余各组中p16基因甲基化发生率均为最高，c-myc基因甲基化发生率次之，hMLH1基因甲基化发生率最低。

表1 P16、c-myc、hMLH1DNA甲基化与不同阶段胃癌前病变病理特征的关系

3 讨论

胃癌是消化系统常见的恶性肿瘤之一，严重的危害人类的健康。我国是胃癌的高发国，其病死率仍占各种肿瘤的首位。其发生系多因素、多阶段、多基因异常累积导致，是一个由量变到质变的多步骤变化的过程，即由慢性胃炎—胃黏膜萎缩肠化—异型增生—胃癌逐步演变而成［2］。由于胃癌疗效尚难令人满意，癌前发现、癌前诊断和癌前治疗已成为减少胃癌发病率的重要策略。

c-myc基因是一种高度保守的DNA结合蛋白类癌基因，具有刺激细胞增生、诱导细胞凋亡的双重功能。P16基因是一种重要的抑癌基因，直接参与细胞周期，并在细胞周期的许多环节起关键的调控作用。p16蛋白可抑制激酶的活性，阻碍细胞由G1期向S期的过渡。hMLH1是一种DNA错配修复基因，其缺陷可导致复制错误的大量增加，导致细胞恶变，肿瘤形成。

近年来研究发现，作为表遗传学的重要组成部分，DNA甲基化是肿瘤中最常见的分子改变之一，5’CpG岛甲基化致抑癌基因失活是引起细胞恶化的重要步骤［3-5］。目前，国内外的一些研究主要在发现各种不同的肿瘤相关基因参与了胃癌、胃癌前病变的发生，为胃癌、早期胃癌的诊断提供更多的信息。舍雅莉等［6］研究发现p16基因启动子区甲基化导致的基因沉默可能与胃癌的发生和发展密切相关；王维等［7］研究认为c-myc基因产物在胃癌的发生发展中发挥着重要的作用；邹叶青等［8］研究认为胃癌中存在hMLH1基因启动子甲基化，hMLH1基因启动子甲基化在胃癌前病变阶段就已经存在，可能是胃癌的早期事件之一。

本资料结果显示，慢性浅表性胃炎组均未发生p16甲基化、c-myc基因甲基化、hMLH1基因甲基化；不同阶段胃癌前病变各组的p16甲基化、c-myc基因甲基化、hMLH1基因甲基化均有表达情况，慢性萎缩性胃炎组中p16甲基化、c-myc基因甲基化、hMLH1基因甲基化表达的患者最少，随着病理严重程度的增加，p16甲基化、c-myc基因甲基化、hMLH1基因甲基化表达的病例数逐渐增多，胃癌组患者中p16甲基化、c-myc基因甲基化、hMLH1基因甲基化表达均为最高。随着病理严重程度的递增，各项DNA甲基化表达情况也逐渐增多，这对于胃癌的早期诊断、早期治疗、预后分析均有重要意义；且可以对胃癌前病变进行早期干预治疗及定期随访观察，以减少胃癌的发生。

［1］ Capuzzi D,Santoro E,Hauck WW,et al．Fhit Expression in Gastric Adenocarcinoma correlation with disease stage and survival．Cancer,2000,88(10):24-34

［2］ 轩菡,顾康生．基因甲基化与胃癌前病变和胃癌的相关性．现代肿瘤医学,15(12):1866-1868．

［3］ Gebhard C,Benner C,Ehrich M,et al．General transcription factor binding at CpG islands in normal cells correlates with resistance to de novo DNA methylation in cancer cells．Cancer Res, 2010, 70(4):1398-1407．

［4］ Portela A,Liz J,Nogales V,et al．DNA methylation determines nucleosome occupancy in the 5′-CpG islands of tumor suppressor genes．Oncogene,2013,32(47):5421-5428．

［5］ Irizarry RA,Ladd-Acosta C,Wen B,et al．The human colon cancer methylome shows similar hypo-and hypermethylation at conserved tissue-specific CpG island shores．Nat Genet,2009,41(2):178-186．

［6］ 舍雅莉,张煦,李能莲,等．胃癌组织中p16基因甲基化与其蛋白表达的相关性及临床意义．肿瘤,2010,30(12):1038-1041．

［7］ 王维,罗和生,余保平．人胃癌及癌前病变中NF-KappaB和c-myc蛋白的表达与意义．肿瘤防治研究,2202,29(4):285-287．

［8］ 邹叶青,张善忠,刘川,等．胃癌及癌前病变组织中hmLH1基因启动子甲基化与MSI的关系．江西医学院学报,2008,48(3):16-23．

Objective To explore the clinical significance of gastric mucosal DNA methylation expression at different stages of pathological changes before gastric carcinoma. Methods 196 patients who were diagnosed as chronic atrophic gastritis, intestinal metaplasia, mild to moderate dysplasia, severe dysplasia and gastric carcinoma by pathological examination from January 2011 to December 2011 in our hospital were selected as study group; other 55 cases of patients with chronic superficial gastritis （pathological results diagnosed with chronic superficial gastritis，HP infection negative）were chosen as control group. The DNA of all subjects were extracted respectively by phenol/chloroform extraction. The expression of c-myc, p16 and hMLH1DNA methylation in gastric mucosa was detected and compared by methylation specific polymerase chain reaction (MSP). Results The p16 methylation，c - myc gene methylation and hMLH1 gene methylation were not detected in the chronic superficial gastritis group；and with the increase of pathological severity，the number of cases with p16 methylation，c - myc gene methylation and hMLH1 gene methylation gradually increased. The expression of P16 methylation,c-myc gene methylation and hMLH1 gene methylation were highest in gastric cancer group（P＜0.05）. Conclusion With the increase of pathological severity，the DNA methylation expression is also gradually increased，for the analysis of the early diagnosis，early treatment and prognosis of gastric cancer has important significance. The early intervention treatment and regular follow-up observations can be used to treat precancerous lesions of gastric cancer and to reduce the occurrence of gastric cancer.

Precancerous lesion of stomach DNA methylation p16 gene C-myc gene hMLH1 gene

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