微型月季小仙女茎段快繁体系建立的研究

2017-09-03彭奎莉张重叶王雨薇金子煜车代弟

种子科技 2017年8期

关键词：茎段外植体仙女

彭奎莉，张重叶，王雨薇，金子煜，车代弟*

（东北农业大学园艺园林学院/园林植物遗传育种与生物技术实验室，哈尔滨黑龙江150030）

微型月季小仙女茎段快繁体系建立的研究

彭奎莉，张重叶，王雨薇，金子煜，车代弟*

（东北农业大学园艺园林学院/园林植物遗传育种与生物技术实验室，哈尔滨黑龙江150030）

本研究以微型月季小仙女(Rosa The Fairy)优良的茎段为外植体，筛选最适灭菌条件，发现采用1/2MS可以进行有效的芽诱导；MS+0.4 mg/L 6-BA+0.1 mg/L IAA培养基可以有效诱导微型月季组培苗的增殖，增殖系数最高可达7.33；培养基1/2MS+0.1mg·L-1IBA可以有效诱导组培苗生根，生根率达到83.33%，平均每株根数为14.67。初步建立了小仙女快繁体系，以期为小仙女育种研究提供技术支撑。

小仙女；茎段；快繁体系；培养基

小仙女(Rosa The Fairy)是一种微型月季（Rosa chinensis Minima）[1]，株型矮小、花期长、花形精美，是良好的地被绿化或盆栽材料，应用前景广泛，越来越受到人们的重视。

但是，由于微型月季植株矮小、茎细、扦插繁殖较难、繁殖系数较低，影响其规模化生产[2]，因此，建立高效、稳定且可用于遗传改良的小仙女快速繁殖体系具有重要意义。

我国目前对微型月季组织培养的研究较少，因此本实验以小仙女优良品种为材料，对影响建立茎段高频快繁体系的激素组合进行研究，得到植株在各个阶段的适宜培养方式，建立快繁体系，为小仙女育种研究提供技术支持。

1 试验材料与方法

1.1 外植体的选择及消毒

试验材料小仙女优质品种由东北农业大学园林育种与生物技术实验室保存。

取生长健壮无病虫害的带芽茎段为外植体，用洗衣粉水浸泡20 min，流水冲洗1 h，移至超净工作台，然后用75%酒精浸泡90 s，无菌水清洗3遍，采用2.0%、4.0%、6.0%NaClO 3个浓度灭菌，设置6 min、12 min、18 min 3个时间处理，每种处理接种10个外植体，3次重复，接种15 d后观察记录。

培养条件为：MS基本培养基，温度25±1℃，光照时间12 h/d。

1.2 继代培养

当外植体材料上萌发的芽长到0.5～1 cm时，将芽切下转入继代培养基进行培养，继代培养基以MS为基本培养基，加入不同浓度的6-BA及NAA，每个处理样品30个，25 d后观察记录。

1.3 生根培养

当小仙女组培苗长到2～3 cm时，转入生根培养基中，以1/2 MS为基础培养基，设置2因素(NAA、IBA) 3水平试验，接种后观察记录。

2 结果与分析

2.1 不同消毒时间对外植体污染率的影响

由表1可见，茎段的染菌率比较低，其中2%的Na-ClO处理12 min、18 min，4%的NaClO处理6 min染菌率为0，表明较高NaClO浓度及较长的消毒时间利于小仙女茎段灭菌；但6%的NaClO处理12 min、18 min，虽然污染率为0，但叶片死亡数增加，表明Na-ClO对外植体茎段造成一定的损伤。不同NaClO浓度和消毒时间对茎段灭菌情况有较大的影响，所以外植体在2%的NaClO处理12 min、18 min，4%的NaClO处理6 min效果最好，污染率为0、叶片损伤也相对较少。

表1 不同NaClO浓度和灭菌时间污染率比较情况

2.2 不同激素种类和浓度对小仙女继代的影响

由表2可见，培养基中含0.4 mg/L 6-BA，0.1 mg/L IAA激素的X4处理的增殖系数最大，为7.33；X1处理增殖系数最小，为0.03；在X1-X6组合中，随着6-BA激素浓度增加，分化系数随之增大。实验表明，适量激素能促进其生长发育，过量的激素反而抑制植株的生长。

2.3 不同激素组合对小仙女生根的影响

由表3可见，在9组1/2MS培养基中，不加NAA、IBA激素处理的，生根率可达100%，但部分根系发黑；加0.1mg·L-1IBA激素的培养基中不定根诱导效果最好，根系细长、明显。不同浓度的NAA、IBA对小仙女诱导不定芽生根有一定的抑制作用，诱导出的不定芽的数量较少，而且根系细短而柔软。

表2 不同激素组合对小仙女继代的影响

3 讨论与结论

目前，国内几乎没有对小仙女的专门报道，而早在1996年产于丹麦的微型月季就已高达3 500万株[3]。研究发现，利用带芽茎段为外植体直接进行离体培养，建立了微型月季的快速繁殖体系，但繁殖频率较低[4]。本研究初步建立了小仙女的快繁体系，为其育种研究奠定基础。

小仙女外植体用75%酒精消毒90 s，2%的NaClO处理12 min、18 min，4%的NaClO处理6 min，污染率为0。细胞分裂素可以促进丛生芽的增殖[5]，与低质量浓度的NAA配合使用时，随着6-BA质量浓度的增加，增殖倍数增加，当质量浓度为0.4 mg/L时达到最大，继续增大，增殖倍数变化不大，反而有下降趋势。结果表明小仙女增殖的最佳培养基为：MS+ 0.4 mg/L 6-BA+0.1 mg/L IAA，最佳生根培养基为1/2MS+ 0.1 mg/L IBA。

[1]陈有民.园林树木学[M].中国林业出版社，1988.

[2]朱建华，汤晓.月季[M].北京：金盾出版社，1992.

[3]Müller R，Andersen AS，Serek M.Differences in display lifeofminiaturepottedroses(RosahybridaL.)[J].Sci Hortic，1998（76）：59-71.

[4]于冰沁.微型月季组织培养的研究[J].辽宁农业科学，2005（4）：53-54.

[5]谭文澄,戴策刚.观赏植物组织培养技术[M].中国林业出版社，1991:147-171.