浅谈全自动免疫组化仪的制片质量与细节

2017-08-10黄凌艳福建医科大学附属龙岩市第一医院病理科福建龙岩364000

中国医疗器械信息 2017年11期

黄凌艳福建医科大学附属龙岩市第一医院病理科（福建龙岩 364000）

浅谈全自动免疫组化仪的制片质量与细节

黄凌艳福建医科大学附属龙岩市第一医院病理科（福建龙岩 364000）

随着现代医疗水平的进步，全自动免疫组化仪在临床中的应用也日益广泛，全自动免疫组化仪能够有效提高免疫组化染色结果的准确性和可靠性，但由于受各种因素影响，全自动免疫组化仪在自动染色过程中也可能出现一些假象，降低染色结果准确性。因此，本文就全自动免疫组化仪的制片质量以及相关细节等进行了分析探讨，从而提高全自动免疫组化仪的制片质量。

全自动制片质量免疫组化仪相关细节

全自动免疫组化仪在应用过程中不可避免会出现一些假象，影响结果可靠性，因而本文以罗氏benchmark XT全自动免疫组化仪为例，总结了其应用过程中的经验教训和应注意的细节，从而提高全自动免疫组化仪的制片质量，具体如下。

1.标本处理与蜡块选择相关细节

操作过程中，保障抗原的完整性和不弥散极为重要，抗原完整是试验成功的重要前提，所以高度注重该细节。对于已经细胞坏死或丢失抗原的材料，无论怎么操作都无法取得好的染色效果。另外，在实施组织处理时，应充分固定组织，以免因为组织固定不符合要求而影响组织的染色特性。除了标本处理外，组织蜡块处理也极为重要，在良好组织固定的基础上，应给予规范的组织脱水、浸透等处理，以免因处理不当导致组织蜡块出现染色假象。所以，对于全自动免疫组化仪来说，理想的免疫组化蜡块，在具有检测肿瘤成分的同时，还应具备内对照的正常组织成分。

2.组织切片处理相关细节

在对组织切片进行处理的过程中，褶皱、刀痕、折叠以及气泡等都有可能导致切片的厚度不均匀，出现非特异性染色现象，所以在处理组织切片时，切片的厚度以3～4μm为宜，63～65˚C烤片2h左右，合理控制温度，若温度过高也会影响抗原保存[1]。另外，应彻底清除石蜡，若对石蜡清除不彻底也会干扰或抑制抗原与抗体的结合。如下图1所示，脱蜡不彻底或有油泡残留在载玻片上都会影响抗体的均匀分布，进而对抗原和抗体的结合造成影响，从而出现不显色或染色不均等情况。因此，为防止出现载玻片亲油情况，除选择带正电荷防脱载玻片外，在组织切片和烤片结束前，应将切片在5%～10%的牛奶溶液中浸泡15～20min，然后将其放入洗洁精稀溶液中荡去残留奶液，并用清水洗净。为保障浸泡效果，应及时更换新鲜牛奶，合理控制牛奶浓度。

图1. 石蜡清除不彻底或残留油污的影响

3.染色前相应准备细节

在开展染色工作前，应打印清晰的检测项目条码标签，将其张贴在玻片上，将标签表面水分擦干，检查仪器运行情况，确保仪器能够正常运行。在实施染色前，应对玻片进行检查，对试剂管口的半月形液面进行检查，正确安装AFM，及时将液面中的气泡除去，检查接口环有没有扣紧，对各种散装试剂进行检查，如缓冲液、脱蜡试剂、修复液以及封盖油膜等，及时检查废液桶清空和各管道通畅情况，在检查确认仪器各环节无误后，再运行染色程序。

4.染色程序运行细节

在运行染色程序时，由于受各种因素影响，通常会有报警现象发生，对于各种报警应及时给予有效处理。经检查发现是机器自身原因，应首先查看是否为加热板问题，及时安排专业工程师对其进行维修。在同一次染色过程中，全自动免疫组化仪无法同时运行两种一抗滴定方式，只能运行手工滴定和或自动滴定中的一种，所以如果选择一抗手工滴定程序应及时根据提示进行滴加。在实施滴加操作前应对组织切片进行检查，观察其是否存在油污和油泡等情况，及时发现前期处理不当玻片并给予补救[2]。尽量提高抗体工作液低温储存的时间，改善抗体工作液的稳定性。与手工染色高温修复温度相比，全自动免疫组化仪的修复温度相对较高，可达99.5˚C，因此应尽可能选择对温度要求不高且具有较高特异性的单克隆号抗体为一抗。

5.抗体检测程序细节

在应用全自动免疫组化仪检测的过程中，“Protocol”的制定极为重要，Ultraview通用DAB检测试剂盒，主要通过苋紫媒染剂和萘酚实现染色。因此，在使用这种方法对各种抗体进行检测时，必须实施多次预实验，严格按照各步骤要求控制孵育的温度，明确孵育过程中存在的干扰因素，从而选择出适合每种抗体的理想“Protocol”，通常情况下，标记目标抗体强表达，同时背景表达低表达是最理想的结合[3]。检测过程中，由于修复过度或不正确修复都会导致非特异染色，从而出现假阳性现象。另外，还应注意热处理的对检测结果的影响，虽然热处理可以在一定程度上加速化学反应，但同时也会导致染色强度降低，从而使得检测结果发生假阴性的机率升高[4]。全自动免疫组化仪应用过程中，还应严格按照要求设置对照，通过观察阴阳组织切片情况，对组织切片检测结果进行分析。在确保染色质量和检测结果真实性的条件下，可对染色程序进行适当改进和调整。孵育时间或修复时间延长，并不一定可以提高抗体的阳性率，应尽量避免选用高温42˚C孵育或超长修复，37˚C孵育时间尽量控制在1h内，常温孵育时间应在1h以上。

6.仪器维护相关细节

为保障检测的效果，还应注重对仪器的清洗和维护，熟悉仪器的性能，在日常工作结束后，及时按照清洗程序对其进行清洗，对各AFM试剂瓶的清洁情况进行检查，及时对其进行消毒处理并风干。将500mL稀释消毒灭菌液倒入AFM试剂瓶内，将其充分摇匀，使其附着于容器表面并静置几分钟后，适用蒸馏水将其彻底洗净。切片托盘的清洗应使用消毒灭菌溶液擦洗，让灭菌液在电热板表面停留约10min后洗净[5]。将一定量的浓缩消毒灭菌放入空桶中，对废液桶进行清洗，使用200mL浓缩液，并将其与“花王”牌消毒液和蒸馏水混合，共增加至3000L，能够对仪器设备起到较好的消毒灭菌效果。对于仪器设备，应每隔3个月进行一次全面的消毒灭菌，每半年应进行一次全面维护[6]。在使用或维护仪器时，应严格按照要求操作，轻柔装卸试剂桶。