真菌毒素的危害、限量标准及快速定量检测方法

2017-08-09上海飞测生物科技有限公司供稿

食品安全导刊 2017年22期

□ 上海飞测生物科技有限公司供稿

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一种真菌可以产生多种不同的真菌毒素，不同的真菌亦可产生相同的真菌毒素。目前已知能产生真菌毒素的真菌有150余种，产生的真菌毒素约有300种，其中包括黄曲霉毒素、赭曲霉毒素、玉米赤霉烯酮以及其衍生物类毒素、A型单端孢霉烯族、B型单端孢霉烯族等。一般真菌的生长和繁殖都需要一定的温、湿度条件，最适宜生长温度一般为20～30℃。当真菌处于干燥、低温或与其他真菌竞争的应激情况时，就会产生霉菌毒素，由于真菌生长有一定的地域性，因此，不同区域占优势的真菌毒素种类也不同。

真菌毒素的分类

主要的真菌毒素有以下几种：

DON（呕吐毒素）

DON主要以玉米污染最为严重，其次为小麦麸，小麦及菜棉籽粕中的检出率显著低于前者。抽样检测中配合饲料检出率100%，仔猪配合饲料超标率46%，肉大鸡配合饲料未见超标，并且禽类对DON耐受性较强，而猪较敏感，仔猪尤为如此。

AFT（黄曲霉毒素）

蛋白原料易受到霉菌的感染，如花生、大豆、棉籽粕、苜蓿草等。花生极易感染黄曲霉菌，因此在使用花生麸时应严格检测其中黄曲霉毒素的含量。另外，玉米中也较易感染黄曲霉毒素。

在全国内抽样的1000份饲料中，黄曲霉毒素B1含量由高到低依次为棉粕、家禽配合饲料、菜粕、玉米、仔猪配合饲料、麦麸、豆粕、鱼粉和小麦。我国饲料普遍受到黄曲霉毒素B1的污染，其含量在不同区域和饲料种类间存在差异。

ZEN（玉米赤霉烯酮）

玉米赤霉烯酮对畜禽的毒副作用主要表现为雌性激素亢进，能引起猪和牛的不孕或流产。猪对霉菌毒素敏感，特别是哺乳或哺乳仔猪。在所有家畜中，猪对ZEN最为敏感，饲料中含有1mg/kg以上的ZEN就足以引起猪的雌激素中毒症，玉米赤霉烯酮主要污染玉米，也可污染小麦、大麦、燕麦和小米等。

OTA（赭曲霉毒素）

OTA主要产生菌是赭曲霉、纯绿青霉，这类产毒素的真菌广泛生栖在玉米、大麦、小麦、花生、大豆、高粱、荞麦、大米、棉籽以及某些青干饲草中，动物食用被其污染的原料生产的饲料，可引起中毒。OTA对食品污染的范围较广，包括谷物、咖啡豆、豆类、可可豆、葡萄干、啤酒和葡萄汁等。

FB1（伏马毒素）

伏马毒素(Fumonisins)是一类霉菌毒素，又名烟曲霉毒素，广泛存在于玉米、小麦、大米等粮谷类食品中，对人体健康有潜在的危害，在食品霉菌污染方面仅次于黄曲霉毒素。

TS-2（T-2毒素）

T-2毒素是单端孢霉烯族毒素中毒性最强的一种，广泛存在于自然界中。T-2毒素具有致畸性和弱致癌性，主要损伤动物机体的造血器官(抑制骨髓和脾的再生造血功能)、免疫器官(降低免疫功能)、消化系统(引起消化道出血坏死)、神经系统及生殖系统等。

真菌毒素对动物和人的危害

真菌毒素类是由真菌类产生的具有毒性的次生代谢物，广泛污染农作物、食品及饲料等各种植物性产品(李鹏等，2005)。真菌毒素的特点主要有：普遍性、微量性、蓄积性、隐蔽性、协同性。危害人类健康的真菌毒素主要来源于麦角菌、曲霉、青霉、镰刀菌和链格孢的次生代谢产物(D'Mello，2003)。产毒真菌类污染食品后，可使食用者中毒，有些毒素甚至可以诱导基因突变和产生致癌性作用，有些则显示出对某些特定器官的毒性。

中国及主要国家对真菌毒素的限量标准

中国对食品中真菌毒素限量标准

中国对饲料中中真菌毒素限量标准

其他国家和组织真菌毒素限量标准

加拿大CFIA对饲料中真菌毒素的限量规定

欧盟对饲料真菌毒素的限量标准

真菌毒素常用检测方法

目前检测霉菌毒素的方法主要分为两大类：确认方法和快速方法。确认方法主要基于理化仪器设备，如薄层色谱法(TLC)、气相色谱法(GC)、高压液相色谱法(HPLC)和各种联用技术如气质联用(GC-MS)、液质联用(HPLC-MS)等；快速方法主要是基于免疫化学基础上的免疫分析方法，如免疫亲合柱-荧光检测(IAC-FLD)、酶联免疫吸附法(ELlSA)和胶体金免疫层析方法等。

酶联免疫吸附法ELISA和胶体金快速检测卡是企业常用的快速检测方法，但也均存在各自的优缺点：ELISA方法的灵敏度相对较高，且能定量检测，但操作的过程相对复杂，步骤较多，检测时间较长，对环境和人员要求高，环境和基质干扰严重，且需要使用标准品，对操作人员危害比较大；胶体金检测卡可以满足现场快速的要求，能在5～10min内快速测定，但是只能定性，且灵敏度较低，肉眼观察主观性较强，重复性差。

图1 荧光微球

上海飞测黄曲霉毒素FPOCT快速定量检测方法

上海飞测生物科技有限公司基于领先的荧光定量FPOCT技术平台，开发出黄曲霉毒素荧光定量快速检测系统，结合了胶体金快速、酶联免疫定量以及色谱法准确的特点，仅需8min即可快速准确定量地测定出粮油谷物饲料中的黄曲霉毒素，灵敏度高（0.5ppb），线性范围宽（1～75ppb），结果高度符合国标法，为黄曲霉毒素的快速检测和控制提供了一种全新的技术手段。

上海飞测黄曲霉毒素FPOCT快速定量检测原理

将样品滴加在加样区时，样品中的待测物与结合垫中的荧光微球标记抗体结合并通过毛细作用向前层析，当达到检测区后，检测线T线上固定的抗原与剩余的部分荧光微球标记抗体结合，检测线T线上结合的荧光微球标记抗体的量与样品中待测物的量成反比，质控线C线结合的荧光标记物样品中待测物的量无关，其它荧光标记物继续层析达到吸收区。层析结束后，采用荧光读数仪的读取T线和C线的荧光强度并计算T/C值，通过仪器内置的标准曲线即可计算出样品中待测物的含量。