戴薇，李世云，刘聪，肖德俊，余路虎

(赣州市人民医院检验科，江西赣州341000)

巨细胞病毒IgM抗体自制室内质控血清的应用及评价

戴薇，李世云，刘聪，肖德俊，余路虎

(赣州市人民医院检验科，江西赣州341000)

目的自制巨细胞病毒IgM抗体（HCMV-IgM）弱阳性外部对照质控血清，评价其临床应用的可行性。方法收集我院HCMV-IgM抗体阳性血清分别与健康人血清混合进行倍比稀释，选择S/CO在1.5～3之间稀释度制备室内质控血清，连续检测20批次，采用“即刻法”分析检测结果，20批次后结果绘制Levey-Jennings质控图，监测室内质控动态。结果自制HCMV-IgM质控血清与北京贝尔有限公司提供的质控血清，两者结果进行对比，CV值比较无统计学差异（P＞0.05），自制HCMV-IgM质控血清变异系数（CV）均小于20%，稳定性符合国家质控物要求。结论自制HCMV-IgM质控血清有很好的稳定性和精密度，可作为实验室检测HCMV-IgM抗体的室内质控血清。

巨细胞病毒IgM抗体；自制室内质控血清；ELISA法

人巨细胞病毒（HCMV）又称巨细胞包涵体病毒，是人类病毒性疾病的常见病原体之一。妊娠妇女感染HCMV可通过胎盘感染胎儿，引起流产、早产、死胎、胎儿宫内发育迟缓，胎儿畸形等[1]。器官移植患者、艾滋病患者、淋巴恶性增生患者或癌症患者，HCMV感染会因为病毒扩散或侵入内脏产生严重的症状，如脾大、肺炎、溶血性贫血症、心肌炎和脑炎。HCMV感染对这类患者可能是致命的[2]。现阶段各地市县级医院检测HCMV-IgM抗体大多都是采用酶联免疫吸咐试验（ELISA）。为了保证实验结果的准确性，实验室室内质量控制是保证检验质量的一个重要环节[3]。目前，临检中心尚无提供商品化的HCMV-IgM室内质控血清，通过其他途径获得不仅十分困难且价格昂贵，本研究通过自制HCMV-IgM弱阳性质控血清与北京贝尔HCMV-IgM质控血清进行比较，现报告如下。

1 材料与方法

1.1 标本来源收集赣州市人民医院住院和门诊患者，HCMV-IgM抗体阳性血清，以及筛选部分阴性健康体检者血清（无脂血、溶血、黄疸、无污染且肝炎标志物、HIV、梅毒抗体均阴性），分别将上述血清充分混匀，经3000×g离心15min去除蛋白质沉淀，56℃加热30min灭活处理备用。用处理后的健康体检者血清对HCMV-IgM抗体阳性血清进行倍比稀释，测定吸光度值（OD）并计算S/CO值。根据ELISA方法学的要求，质控血清S/CO值应在1.5～3.0范围之间[4]，以S/CO值介于1.5～3.0之间对应的浓度作为室内质控血清的最佳稀释浓度进行稀释配制，高压灭菌，加入0.1‰硫柳汞防腐[5，6]，按每份200μl用量分装标记至冷冻管内，-20℃保存。

1.2 仪器与试剂安图Anthos 2010酶标仪；郑州基波JB－1全自动快速立式洗板机；四川诺亚NY/ MMJ酶联免疫反应加速仪；HCMV-IgM质控血清和ELISA试剂均由北京贝尔生物工程有限公司提供。

1.3 检测方法严格按照SOP文件及试剂说明书操作，试验前从冰箱取出试剂及质控血清，放置恢复室温，将自制室内质控血清与北京贝尔质控血清连同患者标本一同试验，剩余质控血清放置2～8℃冰箱冷藏，使用一周。

1.3.1 “即刻法”质控分析[7]连续测定HCMV-IgM自制质控血清及北京贝尔质控血清3次，计算出检测结果的平均值(x)和标准差（s），并按照公式计算SI上限和SI下限。

将SI上限和SI下限与对应SI值进行比较，若SI上限和SI下限均≤n2s值，表明结果在控；若SI上限或SI下限在n2s和n3s之间，表明结果处于“告警”状态；若SI上限或SI下限≥n3s值，表明结果失控。如测定结果在告警和失控状态都应弃去。

1.3.2Levey-Jennings质控图的绘制[8]计算HCMV-IgM自制质控血清20个批次检测结果的均值(x)和标准差（s），输入东软LIS作质控图，依据Westgard多规则质控方法以±2s为警戒限，±3s为失控限。

1.4 统计学方法利用SPSS 21.0统计软件对数据进行分析，计量资料以均值±标准差（x±s）表示，多均数比较采用方差分析，若有差异，利用Dunnett-t检验再进行两者间比较，定检验水准ɑ=0.05，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 连续检测20批次的自制HCMV-IgM弱阳性质控血清S/CO均值(x)为2.1，CV值为13.61%；北京贝尔HCMV-IgM质控血清S/CO均值(x)为2.95，CV值为14.6%；两者CV值比较无统计学差异（P＞0.05）。见表1。

表1 两种质控血清即刻法结果比较

2.2 自制质控血清稳定性和精密度“即刻法”20批次结果（S/CO值）计算出的x、s输入东软LIS Levey-Jennings质控图中，当月结束后汇集前面所有在控结果，计算累积x、s作为下个月的x、s，以次类推，我室连续8个月测定的自制HCMV-IgM弱阳性质控血清结果（S/CO值）CV值均＜20%，符合室内质控要求，每月与第1个月的检测结果比较均无统计学差异(P＞0.05)。见表2。

3 讨论

临床实验室质量管理的第一要素是选择和执行适当的室内质量控制（IQC）程序，依据测定项目的质量要求和方法特点选择统计学标准、控制规则和质控的数目，并严格执行IQC程序以提高IQC的质量[9]。实验室室内质控的目的是为了提高该室的精密度水平，进而提高检测结果的准确性[10]。室内质控品是临床检验实验室质量控制体系不可缺少的一部分，是临床检测质量保证的根源。

表2 自制质控血清稳定性和精密度观察

现各医院ELISA是免疫学检测抗体中普遍应用的试验，除了乙肝、梅毒、艾滋、丙肝，临检中心提供了室内质控品外，其它由于价格昂贵，获得途径难等原因，不能满足临床实验室的检测需求。ELISA由于其操作简便、成本低、适合大批量检查等优点，在整个操作过程中会受到许多因素的影响，如标本的处理，加样、孵育的温度和时间，洗板，洗液的配制浓度，显色时间以及计算临界值等，都会导致检测结果出现较大偏差，为了保证检测质量，试验操作时除了试剂盒里配制的阴、阳性内部对照外，还应同时设立外部弱阳性对照，以监测试验结果的准确性与稳定性。ELISA试剂盒内阳性对照多是合成的半成品或片段，一般不是从阳性标本中获得[11]，不能用来制备质控品。质控样本的基质须与待测标本一致，因此制备弱阳性质控血清时，我室是收集阳性病人血清，用健康人血清作为基质，稀释阳性标本血清，排除基质效应。为保证蛋白质处于天然的浓度和状态，最好不用生理盐水或其他缓冲液稀释。在分析全程的诸环节中，室内质控是比较重要的环节，对提高检测质量起了一定的作用，因此建立室内质控非常重要[12]。

本研究采用“即刻法”质控方法对自制室内质控血清进行检测。该方法通过Grubbs异常值取舍法，先以首批3个检测结果确定SI上限值和下限值，之后可对每批次结果是否异常进行判断并取舍，达到20次检测结果后，再按照常规Levey-Jennings质控图和Westgard多规则法确定质控界限和范围进行常规室内质量控制[13]。变异系数（CV）是反应各次OD值相对于均值的离散程度的一个指标，可以用于衡量被检标本检测的重复性或精密度，进一步监控操作的一致性及试剂盒的批内差异和批间差异[14]。结果表明，各批次SI上限和SI下限均在控，CV值符合质控物要求，控制在20%以内[15-17]，说明质控效果和稳定性好。

由此可见，自制HCMV-IgM质控血清有很好的稳定性、精密度，方便临床进行室内质量控制和质量评价，且成本低廉，制备简单，方便易行。可作为实验室检测HCMV-IgM抗体的室内质控血清。

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The application and evaluation of the self-made anti-HCMV quality control serums

DAI Wei，LI Shiyu，LIU Cong，XIAO Dejun，YU Luhu.
Department of Clinical Laboratory；Ganzhou People's Hospital，Ganzhou Jiangxi 341000，China.

Objective To investigate the clinical feasibility of the anti-HCMV weakly positive serum as correlated external quality control(QC).Methods The anti-HCMV positive serums from the HCMV-infected patients in our hospital were collected and mixed with serums from healthy controls.Then the mixtures were serially diluted and detected for their S/CO value.Under the dilution ratio，corresponding to the S/CO value between 1.5 and 3.0，the diluted serum was selected as the standard for extracting the internal QC serums.The prepared QC serums were used to detect 20 batches of samples and the results were analyzed by using the instant method.Finally，the Levey-Jennings quality control chart was drawn to monitor the dynamic of the internal quality control.Results The CV(coefficient of variation)values of the self-made anti-HCMV QC serums were compared with the QC serums supplied by Beijing Bell Company.There was no significant difference between them(P＞0.05).All the CV values of the self-made anti-HCMV QC serums were less than 20%and the stability was in accordance with the request of national quality content.Conclusion The self-made anti-HCMV QC serums have good stability and high degree of precision.It may be used as the internal QC serums for the laboratory examination HCMV-IgM antibody.

∶CMV-IgM antibody；Self-made quality control serum；ELISA

R446.62，R373.9

A

1674-1129(2017)03-0344-03

10.3969/j.issn.1674-1129.2017.03.015

江西省赣州市科技计划项目（GZ2015ZSF105）

戴薇，女，1982年生，学士，主管技师，医学检验，研究方向免疫学，邮箱：13576692530@163.com