刘金霞 高 杨 刘立新 李建团 王 福

(承德医学院，河北 承德 067000)

干扰素α致慢性丙型肝炎患者抑郁症后Th1/Th2细胞因子与血清犬尿酸水平的相关性

刘金霞 高 杨 刘立新 李建团1王 福

(承德医学院，河北 承德 067000)

目的 探讨干扰素(IFN)-α治疗慢性丙型肝炎(CHC)患者抑郁症后Th1/Th2细胞因子与血清犬尿酸通路(KP)中犬尿酸(KYN)和色氨酸(TRP)水平的作用机制。方法 利用抑郁症自测量表(SDS)和焦虑症自测量表(SAS)对79例IFN-α治疗CHC患者进行心理测评，发生抑郁症患者34例，根据量化积分情况，分为轻度、中度和重度抑郁症组，以正常人群30例为健康组，以治疗过程中未发生抑郁的CHC患者45例为无抑郁症组，各组均采集外周血，用酶联免疫吸附法(ELISA)检测患者外周血中Th1类细胞因子IFN-γ和肿瘤坏死因子(TNF)-α及Th2类细胞因子白细胞介素(IL)-4和IL-10的浓度。应用高效液相色技术检测患者血浆中KYN和TRP水平，并计算二者的比值。结果 各组血清IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-10水平均显著升高(均P<0.05)；各组TRP水平降低，KYN水平升高，KYN/TRP变化也差异显著，且伴随抑郁症状程度不同，中度和重度组与轻度组比较差异显著(P<0.05)。结论 IFN-α在治疗CHC过程中，出现Th1/Th2因子表达式失衡导致CHC患者KP通路中吲哚胺2,3双加氧酶(IDO)的活性增强，引起KYN/TRP发生改变，可能是抑郁症发生的机制之一。

干扰素-α;慢性丙型肝炎;抑郁;Th1/Th2;大尿酸通路

慢性丙型肝炎(CHC)在抗病治疗过程中，长效干扰素(IFN)联合利巴韦林取得了比较理想的疗效，但是副作用较大，特别是IFN导致的抑郁症，临床发生比例较高〔1〕。有学者提出炎症反应将成为研究抑郁症发生机制的方向之一，特别是Th1/Th2细胞因子失衡，IFN-γ、肿瘤坏死因子(TNF)-α高表达，对色氨酸(TRP)代谢途径发挥重要作用，强化犬尿酸通路(KP)途径，弱化神经递质5-羟色氨(5-HT)的形成，诱发抑郁症〔2〕。KP通路是人体必需氨基酸TRP的两条代谢通路之一。饮食来源的TRP只有约1%作为前体合成神经递质5-HT，其余99%经KP通路被代谢〔3〕。吲哚胺2,3双加氧酶(IDO)是KP通路的重要限速酶，属于炎症诱导型酶，能够将底物色氨酸催化生成犬尿酸(KYN)，减低神经递质5-HT合成，KYN容易透过脑屏障，其本身也对机体的情绪、情感发辉负相作用〔4〕。本文通过分析IFN诱发抑郁症患者的Th1/Th2细胞因子表达水平、KP通路中TRP底物、KYN产物及其关键的限速酶IDO，研究抑郁症的发生机制。

1 资料与方法

1.1 临床资料 2006年1～12月在承德医学院门诊和住院接受IFN-α治疗的CHC患者79例，男45例，女34例；年龄18～66岁，均为丙肝抗体阳性和HCV-RNA 阳性，符合《传染病学》诊断标准〔5〕。排除有IFN-α使用禁忌证及精神病史、精神病家族史者。

1.2 治疗方法 应用长效IFN-α 180 μg皮下注射，1次/w，治疗过程中严密监测患者用药后不良反应，如出现自身免疫异常、骨髓抑制等严重不良反应需被迫停药者，排除在病例统计范围内。

1.3 心理测试 治疗前和治疗12 w时分别应用抑郁症自测量表(SDS)和焦虑症自测量表(SAS)对入选病例进行心理测试〔6〕。根据抑郁量化积分，分为非抑郁组、轻度抑郁组、中度抑郁组和重度抑郁组，另外选择30例健康人群作为健康组。判定是否有抑郁症及其严重程度的方法：SDS和SAS积分值<40为正常，40～47为轻度，48～55为中度，≥56为重度。

1.4 Th1/Th2细胞因子检测 分别于清晨空腹采集所有研究对象的外周静脉非抗凝血4 ml，分离血清，-20℃保存备用。标本收集完毕后采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清细胞因子IFN-γ、TNF-α、白细胞介素(IL)-4、IL-10 的表达水平。以上4种细胞因子ELISA试剂盒购自北京万域美澜试剂公司。操作严格按试剂盒说明书进行。

1.5 KP中TRP、KYN及其比值的变化 取200 μl血浆于1.5 ml离心管中，加入100 μl 5.0%的高氯酸溶液，涡旋混合1 min，室温放置10～15 min，10 000 r/min离心10 min后取上清分析，-80℃保存备用。应用PC800型高效液相色谱仪，紫外检测波长：225 nm，进样量为20 μl，注入色谱柱(Symmetry Shield RP-C18 柱)，流动相为磷酸二氢钾-甲醇溶液(浓度为2 mmol/L，体积比为9∶1)，流速为1.0 ml/min，检测时间为25 min。设置TRP、KYN 标准曲线。取标准品TRP(0.01、0.1、1、10、50 ng/L，Sigma公司)、KYN(0.05、0.5、5、50、200 ng/L Sigma公司)，分别配置标准储备液，标准品浓度为X轴，对应峰面积为Y轴，绘制标准曲线，计算待血浆样品浓度〔7〕。

1.6 统计学方法 应用SAS8.0软件进行t检验。

2 结 果

2.1 IFN-α治疗前后的抑郁症及焦虑自测情况 79例CHC患者接受长效IFN-α治疗前和治疗12 w后，抑郁症及焦虑自测量表评分结果，45例在正常范围内，34例患者发生抑郁症，其中轻度14例，中度16例，重度4例，无抑郁症组IFN治疗前后SDS、SAS量化积分无统计学差异，发生抑郁症各组在治疗前后均存在显著差异(P<0.05)，见表1。

2.2 CHC 患者治疗前后各组Th1/Th2细胞因子表达水平的变化 各抑郁组治疗后Th1类细胞因子IFN-γ和TNF-α水平与健康组、治疗前均存在显著增高(P<0.05)，Th2类细胞因子IL-4和IL-10水平低于健康组、治疗前(P<0.05)；与无抑郁症组和轻度抑郁组比较，中度和重度抑郁患者IFN-γ和TNF-α的表达水平升高显著(P<0.05)，IL-10有显著下降(P<0.05)，但由于重症抑郁组患者病例数较少，需要增加样本量，以便更好地说明抑郁与炎症因子的相关性，见表2。

表1 长效IFN治疗CHC患者前后SDS、SAS量化积分

表2 各组血清Th1/Th2细胞因子及TRP、KYN浓度比较

与健康组比较：1)P<0.05；与治疗前比较：2)P<0.05；与无抑郁组比较：3)P<0.05；与轻度抑郁症组比较：4)P<0.05

2.3 KP中TRP、KYN及KYN/TRP比值 外周血TRP浓度显著降低，TRP/KYN升高，与IDO活性增强有关。治疗前与健康组比较，血浆中TRP浓度及KYN/TRP有减少，KYN增多，但没有统计学意义；治疗后无抑郁组和轻度抑郁组TRP、KYN的浓度及其KYN/TRP与治疗前和健康组比较均有显著差异(P<0.05)；中度和重度抑郁组与治疗前和健康组比较存在极显著性差异(P<0.01)；中度和重度抑郁组比较，由于重度病例数较少，有统计学差异，需要进一步增加病例数，能够更进一步的说明抑郁程度与IDO的活性有关，见表2。

3 讨 论

抑郁症是遗传因素、环境因素以及躯体疾病等多个因素相互作用的结果。关于抑郁症发病机制的学说很多，包括单胺类递质学说、神经递质退行性变学说、细胞因子学说、下丘脑-垂体-肾上腺皮质(HPA)轴功能障碍假说等〔7，8〕。中枢神经内分泌与免疫系统间是一个双向调节的网络，其中包括细胞因子、神经递质、激素。细胞因子可能通过调节神经递质代谢、影响神经内分泌功能等参与抑郁症发病过程。本人前期应用长效IFN治疗CHC过程中也发现有情绪低落、焦虑、睡眠不好、厌食、记忆力减退等抑郁样症状，并且上述症状在治疗停止后即可消失〔9〕。检测血清TH1/Th2细胞因子水平和甲状腺激素水平，发现抑郁症患者甲状腺素水平偏低，给予小剂量甲状腺素，能够改善抑郁症状，同时IL-4、IL-10表达降低，TNFα和IFN-γ表达水平升高，因此，初步证实了炎症因子、神经递质、激素三者之间在抑郁症发生过程中相互促进、互为因果。

人体必需氨基酸TRP的两条代谢途径：(1)作为前体合成神经递质5-HT，后者是抑郁症的发生、发展过程中的重要物质；(2)通过KP通路被代谢为KYN，而这步骤的限速酶为IDO，属于炎症诱导酶，可被多种炎症因子所诱导，且细胞因子间具有协同效应。其中IFN-γ和TNF-α是其强诱导剂，且IFN-γ和TNF-α联合作用对IDO的激活效应强于二者单独作用〔10〕。IDO激活后，将TRP分解成KYN，分解增多使体内TRP的生物利用度下降，进而影响中枢内5-HT的合成，降低5-HT能神经传递，导致抑郁症发生〔11〕。本研究间接反映IDO的活性变化，初步证实炎症因子在抑郁症发生机制中的作用。

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3 Raison CL,Dantzer R,Kelley KW,etal.CSF concentrations of brain tryptophan and kynurenines during immune stimulation with IFN-alpha:relationship to CNS immune responses and depression〔J〕.J Mol Psychiatry,2010;15(4):393-403.

4 O'Connor JC,Lawson MA,Andre C,etal.Induction of IDO by bacille Calmette-Guerin is responsible for development of murine depressive-like behavior〔J〕.J Immunol,2009;182(5):3202-12.

5 彭文伟.传染病学〔M〕.第5版.北京:人民卫生出版社,2001:15-51.

6 Zung WW.The depression status inventory:an adjunct to the Self-Rat-ing Depression Scale〔J〕.J Clin Psychol,1972;28(4):539-43.

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〔2017-02-21修回〕

(编辑 李相军)

河北省科技厅指令性项目(No.14277730D;11276103D-62)；河北省病原生物学省级重点学科资助

李建团(1970-)，女，副主任医师，主要从事病毒性肝炎的治疗研究。 王 福(1966-)，男，教授，主要从事神经生物学研究。

刘金霞(1969-)，女，医学博士，教授,主要从事病毒性肝炎的治疗研究。

R473.5

A

1005-9202(2017)10-2506-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.10.071

1 承德医学院附属医院