老年胃癌组织MMP-9、p53、VEGF蛋白的表达及其临床意义

2017-06-15罗华荣甘梅富

中国老年学杂志 2017年10期

关键词：阳性细胞免疫组化分化

徐铖罗华荣甘梅富

(台州恩泽医疗中心(集团)恩泽医院病理科，浙江台州 318000)

老年胃癌组织MMP-9、p53、VEGF蛋白的表达及其临床意义

徐铖罗华荣甘梅富

(台州恩泽医疗中心(集团)恩泽医院病理科，浙江台州 318000)

目的探讨老年胃癌组织基质金属蛋白酶(MMP)-9、p53及血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达及其临床意义。方法选择胃癌根治术后存档病例标本78例(观察组)，取癌旁正常组织为对照组。采用免疫组化法检测MMP-9、p53、VEGF蛋白表达情况。比较两组MMP-9、p53、VEGF阳性表达率，胃癌组织MMP-9、p53、VEGF表达与胃癌临床病理学关系，MMP-9与p53、MMP-9与VEGF、p53与VEGF在胃癌组织中表达的关系。结果观察组MMP-9、p53、VEGF阳性表达率高于对照组(P<0.05)；MMP-9、p53、VEGF表达与肿瘤直径、淋巴结转移、临床分期、分化程度明显相关(P<0.05)；而与无性别明显相关性(P>0.05)；MMP-9与p53、MMP-9与VEGF、p53与VEGF在胃癌中表达呈正相关。结论老年胃癌组织中MMP-9、p53、VEGF蛋白呈高表达，且MMP-9、p53、VEGF蛋白高表达与胃癌的发生发展密切相关。

胃癌；基质金属蛋白酶-9；p53；血管内皮生长因子

胃癌是最常见的一种消化道恶性肿瘤〔1，2〕。目前虽然胃癌的具体发病机制尚未完全阐明，但报道显示胃癌发生、发展与肿瘤细胞凋亡失衡相关〔3〕。因此探讨胃癌发生、发展中细胞凋亡的作用，成为胃癌临床研究与基础的热点和重点之一。有关胃癌细胞凋亡蛋白调控机制近年来取得了一定的进展。研究显示多种蛋白参与胃癌细胞的凋亡过程，发现其发生、发展与基质金属蛋白酶(MMP)-9、p53的突变及血管内皮生长因子(VEGF)密切相关〔4～6〕。本文探讨老年胃癌组织MMP-9、p53、VEGF蛋白的表达及临床意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料选择胃癌根治术存档病例标本78例(观察组)，取癌旁正常组织为对照组。入组标准：①术前均未接受过放疗、化疗及免疫治疗者；②年龄70～90岁；③签订知情同意思者。排除标准：①合并其他恶性肿瘤者；②合并肝肾功能严重异常者。入组的78例患者中，男45例，女33例；平均年龄(79.84±3.24)岁；分化程度：中高分化34例，低分化44例；淋巴结转移者49例。

1.2 主要试剂和仪器主要试剂：鼠抗人MMP-9、鼠抗人P53、鼠抗人VEGF单克隆抗体(上海万疆生物技术有限公司)，免疫组化SP试剂盒(福州迈新生物公司)，DAB显色试剂盒(北京中杉生物公司)。主要仪器：RM2015 病理切片机(德国Leica公司)，彩色病理图像分析系统(日本OLYMPUS公司)，EGI150C组织包埋机(德国Leica公司)。

1.3 免疫组化法检测MMP-9、p53、VEGF蛋白表达所有手术切除标本，以4%甲醛固定，常规石蜡切片，石蜡包埋，以梯度乙醇水化处理，PBS洗涤3次，于高温高压条件下修复3 min，再以3%过氧化氢溶液孵育10 min，PBS洗涤3次，滴加MMP-9、p53、VEGF一抗，室温下孵育120 min，滴加二抗，室温下孵育60 min，采用DAB显色，苏木精复染，中性树胶封片，显微镜下观察。

1.4 结果判定标准由2位病理科医师独立观察每张切片，以显微镜200倍下随机选取5个视野，计数100个细胞，阳性细胞为细胞核出现黄色或者棕黄色，以染色强度与阳性细胞率半定量积分评估。染色强度评定：无色计0分，淡黄色计1分，棕黄色计2分，棕褐色计3分；阳性细胞率：0～10%计0分，11%～25%计1分，26%～50%计2分，51%～75%计3分，76%～100%计4分。染色强度积分+阳性细胞率积分：6～7分为强阳性()，4～5分为中度阳性()，2～3分为弱阳性(+)，0～1分为阴性(-)。

1.5 统计学方法用SPSS16.0统计学软件进行t及χ2检验。

2 结果

2.1 两组胃黏膜组织MMP-9、p53、VEGF蛋白阳性表达比较观察组MMP-9〔57例(73.08%)〕、p53〔51例(65.38%)〕、VEGF〔50例(64.10%)〕阳性表达率高于对照组〔21例(26.92%)、23例(29.49%)、18例(23.08%)，χ2=33.230 8,χ2=20.155 6,χ2=26.695 2,均P<0.05〕。

2.2 观察组MMP-9、p53及VEGF阳性表达与其临床病理学特征的关系 MMP-9阳性表达与肿瘤直径、淋巴结转移、临床分期、分化程度明显相关(P<0.05)；而与性别无明显相关性(P>0.05)。p53表达与肿瘤直径、淋巴结转移、临床分期、分化程度明显相关性(P<0.05)；而与性别无相关性(P>0.05)。VEGF表达与肿瘤直径、淋巴结转移、临床分期、分化程度明显相关(P<0.05)；而与性别无明显相关性(P>0.05)。见表1。

2.3 观察组MMP-9、p53及VEGF蛋白阳性表达的相关性 MMP-9与p53在胃癌组织阳性表达呈正相关(r=0.451，P<0.05)。MMP-9与VEGF在胃癌组织阳性表达呈正相关(r=0.315，P<0.05)。p53与VEGF在胃癌组织阳性表达呈正相关(r=0.379，P<0.05)。

表1 胃癌组织MMP-9、p53及VEGF阳性表达与临床病理学特征的相关性(n,n=78)

3 讨论

胃癌的发生、发展及转移和侵袭是多基因、多因素、多阶段共同参与的一个复杂过程，涉及多种抑癌基因的失活和癌基因的激活〔7～9〕。MMPs是与侵袭和转移关系相关的一类蛋白水解酶，且为肿瘤细胞穿透基底膜所必需的一种降解酶，能够降解细胞基底膜和外基质，促进肿瘤血管生成〔10〕。MMPs在肿瘤发生转移中作用较为复杂，在以下几个环节中发挥作用：①肿瘤血管生成：在细胞外基质降解时，MMPs为生长新生血管提供空间；②肿瘤的发生过程：MMPs可分解健康组织的基质结构，从而使肿瘤增生；③肿瘤转移过程：MMPs可松解周围正常组织，有利于癌细胞的转移，且可组织自我分解促使MMPs释放，引起肿瘤增生。其中MMP-9是MMPs家族中降解细胞外基质的关键酶之一，又为Ⅳ型胶原酶。MMP-9能够上调肿瘤血管化的程度，抑制MMP-9活性可抑制肿瘤的侵袭和转移〔11〕。p53蛋白是胃癌中最常突变的一种抑癌蛋白，人类p53蛋白由11个外显子和10个内含子组成，正常的p53蛋白在细胞中易水解，且含量低，而采用免疫组化法很难检测到正常p53蛋白，由于突变型p53构象改变，稳定性增强，故而目前免疫组化法检测到的通常为突变型p53蛋白〔12〕。p53基因突变率有萎缩性胃炎病史的胃癌明显高于无萎缩性胃炎病史者〔13〕。VEGF是一种血管通透因子，可在体内诱导血管新生。VEGF在肿瘤细胞中功能分为免疫逃逸与信号通路两个方面：①VEGF可干扰抑制树突细胞活性，且能够阻断T细胞和B细胞的抗原呈递，以及妨碍机体正常的监察作用，从而致使肿瘤产生免疫逃逸〔14〕；②VEGF激增，与受体结合，从而产生一系列细胞信号级联反应，从而使得新血管生长分化，进一步促进肿瘤生长。胃癌具有高复发、高转移及高侵袭等特点，胃癌中血管生成明显增加，认为其原因可能与肿瘤恶性生物学行为关系紧密，故而认为，在胃癌生成和转移中VEGF具有重要作用〔15〕。本研究表明老年胃癌组织中MMP-9、p53、VEGF蛋白高表达与肿瘤直径、淋巴结转移、临床分期、分化程度明显相关，且MMP-9、p53、VEGF表达呈正相关。

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