丹参川芎嗪注射液对糖尿病肾病大鼠微循环障碍及肾功能的影响

2017-06-15宋春宇王中京

中国老年学杂志 2017年10期

关键词：川芎嗪丹参肾功能

宋春宇王中京毛红赵湜

(华中科技大学同济医学院附属武汉中心医院内分泌科，湖北武汉 430014)

丹参川芎嗪注射液对糖尿病肾病大鼠微循环障碍及肾功能的影响

宋春宇王中京毛红赵湜

(华中科技大学同济医学院附属武汉中心医院内分泌科，湖北武汉 430014)

目的探讨丹参川芎嗪注射液对糖尿病肾病(DN)大鼠肾脏微循环障碍及肾功能的影响。方法雄性Wistar大鼠48只，随机分为正常组、模型组、丹参川芎嗪注射液低剂量组(1 ml·kg-1·d-1)和高剂量组(2 ml·kg-1·d-1)，每组12只。采用一次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ)50 mg/kg建立DN大鼠模型，同时各组给予相应药物，连续给药14 d，末次给药后检测空腹血糖(FBG)、肾小球滤过率(GFR)和24 h尿微量白蛋白(24 h mAlb)水平；测定血中血栓素(TX)B2的含量。结果丹参川芎嗪注射液在剂量1～2 ml/kg范围内均可明显抑制DN大鼠的FBG水平；还可降低GFR水平、24 h mAlb及血液TXB2的含量，改善肾血流动力学异常，改善肾脏微循环。结论丹参川芎嗪注射液可有效改善DN大鼠微循环障碍，减轻DN肾小球高滤过、高灌注状态，保护肾功能。

丹参川芎嗪注射液；糖尿病肾病；微循环；肾功能

糖尿病肾病(DN)是糖尿病(DM)微血管并发症之一，亦是肾病终末期的首要原因〔1〕。该病的发病机制为DM致肾小球高滤过，引起肾脏持续的血流动力学异常及微血管结构损伤，进而诱发蛋白尿及肾小球硬化。因此，微循环障碍对DN早期发病起关键作用〔2〕。临床研究表明，丹参川芎嗪注射液对DN具有显著的临床疗效，既可降低空腹血糖(FBG)、糖化血红蛋白(HbA1c)和尿蛋白的排除率，也可显著改善机体抗炎指标，促进肾功能恢复〔3〕。此外，现代药理研究表明，丹参川芎嗪注射液具有抗血小板聚集、降低血液黏度、改善微循环的作用〔4〕，提示其可能对DN的早期微循环障碍有一定的改善作用。然而，目前关于丹参川芎嗪注射液对DN早期发病中微循环障碍和肾功能的改善作用还未见报道。本实验从血糖、肾血流动力学、肾功能等方面对其进行系统研究。

1 材料与方法

1.1 动物无特定病原体(SPF)级雄性Wistar大鼠，体质量180～220 g，平均(200±20)g，购自华中科技大学实验动物中心，动物合格证号：SCXK(鄂)2010-0009。自由摄食，动物房室温20℃～25℃，相对湿度50%～70%，12 h光照维持，昼夜循环。

1.2 试剂链脲佐菌素(STZ，美国sigma，批号：20151042)，临用前溶于无菌枸橼酸缓冲液(0.1 mol/L，pH4.2)配成1%的溶液。生理盐水(购于江西科伦药业有限公司，批号：D120825G)，水合氯醛(购于上海恒远生化试剂有限公司，批号：2015-041)。丹参川芎嗪注射液，贵州拜特药业公司，规格：5 ml，批号：20140625。

1.3 仪器电热恒温水浴箱(上海一恒科技有限公司，型号：CU600)；代谢笼(苏州市艾可林实验动物器材厂)；电子天平(常熟市双杰测试仪器厂，型号：T1000)；电子分析天平〔梅特勒-托利多仪器(上海) 有限公司，型号：EL204〕；全自动生化分析仪(日立，型号：7180)；全波长酶标仪(美国赛默飞，型号：Multiskan GO 1510)；低温高速离心机(德国HERMLE公司，型号：MEGAFUGE2.0R)；全景激光灌注成像仪(英国Moor仪器有限公司，型号：Moor FLPI-2)；血糖仪及血糖试纸(德国拜耳拜安康系列)。

1.4 实验方法 Wistar大鼠48只，适应性喂养1 w后随机分为正常组、模型组、丹参川芎嗪注射液低、高剂量组，每组12只。除正常组外，其余各组均一次性腹腔注射STZ 50 mg/kg诱导实验性DN大鼠模型〔5〕。由于实验周期长、大鼠长期高血糖状态会导致实验动物死亡。本研究中，模型组和丹参川芎嗪注射液低剂量组大鼠各死亡2只，丹参川芎嗪注射液高剂量组死亡1只。各组动物数仍然具有足够的样本重复数，不影响实验结果的统计分析。72 h后大鼠眼眶采血测定FBG，FBG>16.7 mmol/L为造模成功。造模开始即给药，丹参川芎嗪注射液给药组按临床人体-大鼠体表面积比值换算出大鼠的等效剂量。低剂量组每日给予1 ml/kg，高剂量组给予2 ml/kg，给药时均利用5%葡萄糖注射液稀释至0.5 ml后尾静脉注射给药。正常组及模型组给予等体积生理盐水。1次/d，连续3 w，每日记录24 h饮水量和体重。末次给药后，用代谢笼收集24 h尿液。随后腹腔注射水合氯醛(10%，3 ml/kg)麻醉大鼠，完全暴露左右肾脏。Moor FLPI-2散斑血流实时成像系统分析各组大鼠肾脏皮层表面血流值。腹主动脉取血，全自动生化测定仪测定FBG、血清肌酐、尿素氮、肾小球率过滤(GFR)和24 h尿微量白蛋白(24 h mAlb)水平，评价大鼠血糖和肾功能情况。酶联免疫吸附法(ELISA)测定血栓素(TX)B2的含量。

1.5 统计学方法应用SPSS18.0软件行t检验。

2 结果

2.1 丹参川芎嗪注射液对大鼠体重及饮水量的影响与正常组相比，模型组大鼠3 d后饮水量有增加的趋势，第8天开始饮水量增加明显；6 d后体重开始不断出现减轻；与模型组比较，丹参川芎嗪注射液给药组大鼠饮水量和体重的减少均有所缓解。见图1。

图1 各组不同时间饮水量、体重

2.2 丹参川芎嗪注射液对大鼠FBG和24 h mAlb的影响与正常组比较，模型组FBG和24 h mAlb水平均显著升高(P<0.01)；与模型组比较，丹参川芎嗪注射液高、低剂量组FBG和高剂量组24 h mAlb水平均有明显降低(P<0.05)，见表1。

2.3 丹参川芎嗪注射液对大鼠肾脏皮层血流值的影响正常组大鼠肾脏皮层的散斑血流图浅绿色和黄色区域分布较多，红色区域较少，表明散斑血流灌注量较低，皮层血流值也较低。与正常组比较，模型组红色分布区域明显增多，肾脏皮层红色分布均匀，肾脏皮层血流值(399.76±34.65)明显升高(P<0.05)，与模型组比较，丹参川芎嗪注射液高剂量给药组红色区域分布减少，说明肾脏皮层血流量(334.22±21.44)较模型组少(P<0.05)。低剂量组的肾脏皮层血流值为(356.84±29.31)。

2.4 丹参川芎嗪注射液对大鼠肾功能的影响相比于正常组，模型组大鼠GFR显著升高(P<0.01)；血清肌酐和尿素氮含量也有一定程度地升高，但差异无统计学意义(P>0.05)。与模型组相比，经丹参川芎嗪注射液高剂量治疗后，大鼠GFR明显降低(P<0.05)；低剂量丹参川芎嗪注射液也能一定程度的降低GFR，但差异无统计学意义(P>0.05)；血清血肌酐、尿素氮含量有一定程度的降低，但变化不明显(P>0.05)。见表2。

表1 各组大鼠FBG、24 h mAlb水平比较

与正常组比较：1)P<0.01；与模型组比较：2)P<0.05，3)P<0.01；下表同

表2 各组大鼠血清肌酐、尿素氮和GFR的比较±s)

2.5 丹参川芎嗪注射液对大鼠TXB2的影响给予STZ诱导后，模型组大鼠的TXB2含量〔(287.39±12.98)pg/ml〕明显高于正常组〔(98.11±5.32)pg/ml〕(P<0.01)。与模型组相比，丹参川芎嗪注射液低、高剂量干预后大鼠TXB2含量有所降低〔(203.88±11.23)、(167.65±12.90)pg/ml，P<0.05〕。

3 讨论

中医学将DN归属于属于 “尿浊”“肾劳”“关格”等范畴，亦有学者将DN命名为“消渴病肾病”。中医认为，DN病位以肾脏为中心，兼及肝、脾、肺、心等诸多脏腑。以虚、瘀、浊为核心病机，本虚标实，虚实互见，因此，需以虚实同治，标本兼顾为治则，以补虚、活血通络、温阳泻浊为基本治法〔6〕。丹参川芎嗪注射液的主要成分为丹参素、盐酸川芎嗪，具有活血化瘀功效，契合DN淤阻之病机。临床研究表明，丹参川芎嗪注射液治疗早期DN有很好的疗效，总有效率可达73.3%，可降低24 h mAlb含量，促进肾功能恢复；降低DN患者血清的C反应蛋白(CRP)、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平，改善抗炎指标活性〔3〕。本实验结果表明，丹参川芎嗪注射液可显著降低STZ诱导的血糖水平，对改善微循环障碍及肾功能具有积极的意义。

在DM过程中，高血糖常可引起肾内血管阻力下降，肾血浆流量增加，出现肾脏GFR、高内压和血流动力学的改变〔7〕。这种高灌注、高滤过的状态可使肾小球内毛细血管切流压增加，引起血管内皮和上皮细胞损害，破坏正常滤过屏障，是导致DN发生及形态学改变的基础。因此，有效减轻DN早期的高灌注、高滤过状态，可减少尿微量白蛋白排出，是减轻DM肾损伤的有效方法。本实验结果表明，丹参川芎嗪注射液可以明显降低SZT诱导的DN模型大鼠肾小球高滤过状态，减缓高血流灌注对肾脏的损伤，对肾功能有一定的保护作用，且疗效具有剂量依赖性。DM患者体内普遍存在高凝状态。高凝导致血小板黏附聚集活性增强并形成微血栓，进一步促使血小板大量活化，从而出现亚临床症状，即微血管病变〔8〕。DN的发病过程中，由血流动力学改变等因素引起的微循环障碍，常可造成肾小球硬化性改变，出现肾脏不可逆的损害、血管内皮细胞形态和功能改变，最终出现尿蛋白，导致肾功能损害〔9〕。本实验研究表明，给予STZ诱导DN后，模型组大鼠肾脏损害早期会表现肾脏皮层微循环血流动力学异常；丹参川芎嗪注射液可改变肾脏皮层微循环血流，剂量在1～2 ml/kg之间疗效具有剂量依赖性。血中TXA2含量增加会导致血小板聚集和血管收缩增强，TXB2是TXA2的无活性代谢物，可间接反映TXA2含量。本实验结果显示，DN模型大鼠血小板功能增强，TXA2释放增多，易引起血管并发症；而丹参川芎嗪注射液具有明显的降低血小板活性作用，符合活血化瘀的药理作用。

综上所述，丹参川芎嗪注射液可明显降低DN大鼠的血糖水平，减少24 h mAlb的排出；有效降低DN大鼠的高滤过状态，还可以减少大鼠肾脏皮层血流值和血液中TXB2含量，改善DN大鼠的肾脏微循环障碍，保护肾功能，且疗效具有剂量依赖性。

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7 张庆平，胡国华，朱卫平，等.丹参川芎嗪注射液对2型糖尿病肾病的临床疗效及CRP，TNF-α水平的影响〔J〕.中国中药杂志，2009；34(7)：911-2.

8 杨芳，李敬林，依秋霞，等.益气解毒活络方对早期糖尿病肾病大鼠的防治作用〔J〕.中国实验方剂学杂志，2014；20(11)：165-9.

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〔2016-09-15修回〕

(编辑袁左鸣)