强会萍 童江滨 江苏省扬州市江都区仙女镇畜牧兽医站 225200

鸡沙门氏菌的分离鉴定及药敏试验

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为了了解江苏省扬州地区鸡沙门氏菌的感染和耐药情况，采取对该地区5个鸡场98份病鸡组织进行细菌分离，并进行了药敏试验、血凝试验和致病性试验。经过分离，得到24株沙门氏菌，血凝鉴定表明，有18株呈阳性，其中5株均能使雏鸡致死。药敏试验结果表明，这5株沙门氏菌对甲硝唑、青霉素、替米考星和氨苄西林有高耐药性；对庆大霉素比较敏感。沙门氏菌不仅耐药性特别严重，而且是危害该地禽类养殖场的主要病原菌。

沙门氏菌；分离鉴定；药敏试验

沙门氏菌病是一种由沙门氏菌属细菌引起的一种人畜共患病。而沙门氏菌对于食品安全构成严重威胁，我国规模化养鸡产业不断发展，在带来巨大经济效益的同时，也产生了难以避免的危害。抗生素的使用，使得部分细菌产生极强的耐药性，如沙门氏菌。针对这一要点，有关部门对江苏省扬州地区鸡沙门氏菌病原进行了分离鉴定和药敏试验，希望对今后防治该病提供扎实的理论依据。

1 材料

（1）病料来源。收集的98份来自江苏省扬州地区5个鸡场，从2016年3月至2016年5月疑患沙门氏菌病的病料组织。

（2）培养基。三糖铁琼脂（TSI）、SS 营养琼脂培养基和HE营养琼脂培养基，南京某技术有限公司。

（3）沙门氏菌属诊断血清。沙门氏菌A～F群“O”多价诊断血清,中国生物技术集团公司江苏生物制品研究所。

（4）试验药物。痢菌净、替米考星、青霉素、甲硝唑、氨苄西林，江苏南京动物药业有限公司，批号：20150114；庆大霉素、头孢拉定、头孢唑啉，苏州微生物试剂有限公司，批号：20151335[2]。

（5）试验动物。1日龄健康雏鸡,扬州某鸡场。

2 方法

（1）病料采集。于发病地区采集病鸡，临床症状表现为怕冷，减食或废食，排乳白色稀薄黏腻粪便，肛门周围污秽，闭目呆立。致死，剖检取其心、肝、脾、肺和肠于-20℃保存备用。

（2）沙门氏菌的分离鉴定。实验室无菌，将病料组织划线接种于HE营养琼脂培养基和SS营养琼脂培养基，37℃培养18h后观察，挑取直径约0.5mm的菌落进行革兰氏染色，将革兰氏阴性短杆菌接种于TSI中。

（3）血清型鉴定。挑取TSI中呈阳性的菌落进行沙门氏菌A～F群“O”多价诊断血清玻片凝集试验，设生理盐水为对照组。在平板上将琼脂培养的细菌与少量生理盐水混匀，再加入1滴沙门氏菌多价“O”抗血清，摇晃，观察是否凝集。

（4）致病性试验。取5株沙门氏菌接种于培养液中，37℃恒温培养24h，取0.5mL菌液滴口于10只雏鸡；设对照鸡10只，滴口营养培养液。将雏鸡隔离饲养，观察发病和死亡情况。对死亡鸡进行剖检，观察其病理变化。

（5）药敏试验。用Kirby-Bauer纸片法挑取单个菌落，分别接种在营养培养液中，37℃培养24h。用无菌生理盐水制成0.5麦氏标准的菌悬液，吸取适量菌液在营养琼脂平板内，表面均匀涂抹，盖上平板，室温放置几分钟，用小镊子夹取药敏纸片，贴于琼脂表面，倒置，37℃培养16～18h。最后，观察药敏纸片周围有无抑菌圈，并测量直径（d）大小。结果判定标准d＞15mm为高度敏感；10.1＜d≤15mm为中度敏感；d≤10mm为耐药。

3 结果

（1）病理变化。剖检病鸡的病理变化主要表现为肝脏土黄色、肾脏肿大、纤维素性心包炎和肝周炎。

（2）分离结果。在SS琼脂平板上有透明或有黑色中心的菌落，HE琼脂平板上有灰绿色、圆形、黑色中心的菌落；取单个菌落涂片，革兰氏染色，在油镜下观察，发现大量单个存在小短、两端钝圆的革兰阴性杆菌；接种于TSI表现为斜面变红，底层反应呈阳性，产硫化氢和产酸，结果表明此分离菌疑似为沙门氏菌。玻片凝集试验结果：共有18个菌株呈阳性，其中5株呈强阳性，命名为 SH-1、SH-2、SL-3、SL-4 和 SI-5。

（3）致病性试验结果。雏鸡接种强阳性的5株沙门氏菌，雏鸡接种5h后开始死亡。病鸡临床表现为精神萎顿、呆立不动、怕冷、食欲废绝，最后死亡。剖检结果显示，病鸡肠出血，肾肿大，肝呈土黄色。

（4）药敏试验结果。5株沙门氏菌敏试验的结果，沙门氏菌菌株对庆大霉素比较敏感；对甲硝唑、青霉素、替米考星和氨苄西林等有较高的耐药性；而对痢菌净、头孢唑啉、头孢拉定等有不同程度的耐药性。

4 小结与讨论

（1）此次试验结果显示，经过分离鉴定得到的5株沙门氏菌，对大部分抗生素都具有不同程度的耐药性。而且当地鸡沙门氏菌的耐药性比较严重[3]。

（2）产生耐药性的原因是长期盲目用药和喂以抗生素含量高的饲料。鉴于病原菌容易产生耐药性的这一特点，建议各地养殖场在治疗该病时，尽量先进行药敏试验。临床治疗沙门氏菌病时应根据本地区药敏结果合理选用抗生素。为了防止盲目用药造成的损失，应当先选出敏感药物再进行适当、有效的治疗措施。此外，在使用抗菌药物来预防治疗的基础上，也要考虑用一些合适的生物制剂。

（3）检疫并淘汰带菌鸡，建立好无菌鸡群，从源头上阻断传染源，断开其传播途径，这些场是彻底净化该病的科学选择。

[1]杨晓辉，杨增岐．陕西关中地区鸡白痢现状调查［J］．动物医学进展，2008,29（9）：103-108．

[2]赵兴绪，王雯慧，伏小平等．畜禽疾病诊断指南［M］．北京：中国农业出版社，2010．

[3]中国兽药典委员会.中华人民共和国兽药典二部(M).农业出版社，2000：256.