王春亮，熊 前，叶俊华，李川武

(1.公安部南昌警犬基地， 江西 南昌 330100；2.江西省警犬良种繁育与行为科学研究重点实验室， 江西 南昌 330100)

专论综述

犬发情鉴定技术研究及应用现状

王春亮，熊 前，叶俊华，李川武

(1.公安部南昌警犬基地，江西南昌330100；2.江西省警犬良种繁育与行为科学研究重点实验室，江西南昌330100)

由于母犬相对独特的生殖生理特点，造成很难准确确定母犬的配种时间，进而致使犬的受孕率和繁殖力低下。人们对犬的发情鉴定等相关领域进行了大量研究，但迄今为止，在临床实践中，仍未找到一种准确判定犬排卵时间的方法。本文着重对犬发情周期中阴道细胞学、激素和B型超声诊断技术及其他一些新的指示物等相关的研究进行了简要论述和探讨，旨在提高母犬的生产力，并以期为相关领域的研究和应用提供理论参考。

犬；发情；雌二醇；孕酮；促黄体素；阴道上皮细胞

母犬开始排出的卵子尚未成熟，处于初级卵母细胞阶段，必须在输卵管中经过减数分裂，放出第一极体而变为次级卵母细胞，才能获得受精能力。这种不同于其他绝大多数哺乳动物独特的生殖生理特点，造成犬繁育工作者很难准确确定配种时间。如何正确地掌握母犬的排卵时间，确定最佳受孕期，对提高母犬受孕率和繁殖力具有重要意义。因品种和成年体重的不同，犬的第一个发情期从6～20个月不等，犬发情期包括发情前期、发情期、间情期、乏情期[1]。正常犬的发情周期可以用几种不同的方式描述，包括行为方面、临床症状、激素值、阴道细胞学的变化。而其中阴道细胞学变化和激素值相关方面的研究，已成为鉴定母犬发情排卵领域研究的热点。本文综述了犬发情周期阴道细胞学和激素方面的研究，并探讨了其他一些新的发情鉴定指示物及方法，以期为相关领域的研究提供借鉴。

1 犬发情周期阴道细胞学变化的特征及研究

引起犬发情的生殖激素，主要包括雌二醇(E2)、孕酮(P4)和促黄体素(LH)。雌二醇(E2)是发情周期中第一重要的激素，E2的变化导致母犬发情的临床症状，阴道壁、外阴的肿胀及血性分泌物的发生。Olson等研究表明，在雌激素的作用下阴道上皮细胞发生角质化成为“角质化细胞”，表面细胞变得大而扁平，核小或没有核。阴道上皮能响应的血液雌激素变化，阴道上皮周期性的变化可预测卵巢激素的血液浓度。

细胞学的变化反映机体潜在的内分泌活动周期。Bouchard等研究发现，角质化上皮细胞比例达到80%，LH达到峰值。母犬发情周期中阴道上皮细胞的动态变化与激素变化是一致的。追踪阴道上皮细胞的形态变化，提供了一种分析激素水平变化的简便方法。阴道上皮细胞涂片法总是比行为学方法更能准确预测最佳受孕时间。

阴道上皮细胞在母犬发情各个时期呈一定规律性的变化。在乏情期，阴道上皮细胞以中间型和副基底细胞占主导，无或仅见少量表层上皮细胞，几乎没有中性粒细胞。在发情前期，阴道上皮细胞从发情前期的早期到后期将揭示一个从中间型和副基底细胞到角质化细胞渐进的转变过程。通常，有血红细胞大量出现，中性粒细胞一般也可见。在发情期，角质化细胞占绝大多数，母犬进行完全角质化，阴道上皮细胞几乎完全是无核表层上皮细胞。间情期开始是以角质化细胞的数量急剧下降，中间型和副基底细胞的再现为特征，一天内细胞轮廓变化从100%角质化细胞到不足20%角质化细胞。Newberry等研究发现，当角质化上皮细胞占主导，无嗜中性白细胞，有核上皮细胞和红细胞也很少时，母犬进入发情期，开始排卵。此阶段母犬接受公犬爬跨，表明母犬已真正进入发情盛期，此时配种受孕率较高。徐永志等研究发现，绝大多数自然发情的母犬，在阴道第1次滴血后第9～13天，角质化上皮细胞比率高于80%。因此，表明阴道细胞学检测结果，能辅助确定母犬发情的排卵时间。贺星亮等研究发现，在角化程度较低时进行配种，受胎率和窝产仔数均降低，角化细胞率达到90%～100%时为最佳受孕时间。 研究发现，阴道上皮细胞检查法主要用于辅助对母犬进行发情鉴定，尤其对于发情异常犬或阴部观察判断难以准确的犬，采取上皮细胞检查法进行发情鉴定具有很好的效果[2]。

2 犬发情周期生殖激素变化的特征及研究

王新蕾等研究发现，母犬血液中雌、孕激素变化较复杂，但仍有一定的规律性，可为犬的繁殖计划提供理论参考。Concannon等研究发现，E2在发情前期的早期持续升高，在大多数母犬体内由5～10 pg/mL升高到最高值45～120 pg/mL，其峰值一般出现在LH峰值前的1～3 d，即在LH脉冲式波动出现前的0.5～2 d。然而，不同母犬的雌激素水平变化很大，与排卵相关性不是很准确。 LH峰值的出现比E2峰值出现晚24 h，P4在E2达到峰值的时候浓度开始升高[3]。李旭等研究发现，LH的检测值不稳定，其规律不容易把握。P4的含量变化是相对有规律和稳定的，曲线变化具有临床特征性指征。最近研究发现孕酮可以准确预测排卵时间[4]。

促黄体素LH是排卵的生物学触发器，LH峰值是母犬发情周期的关键定时器，母犬雌激素水平的升高激发LH激增，排卵发生在LH峰值后的2 d。母犬卵巢刚排出的卵母细胞是不成熟的，不具有受精能力，2～3 d后在输卵管里完成减数分裂，成熟的卵子能存活1～3 d。LH峰值算作第0天，母犬的排卵高峰期在LH峰值后的4、5或6 d。但，确定准确的LH峰值需要每天进行血液LH测试，而LH峰值可以使卵母细胞从分泌雌激素到分泌孕酮的转变，LH峰值可以通过测定血液孕酮水平进行预测。Gier等研究发现，在发情前期，LH峰值一般在E2峰值出现后1～3 d出现，LH浓度在达到最高值前的12～24 h剧烈升高，在达到峰值后12～36 h下降到基础浓度，LH在发情前期的脉冲式波动平均持续1.5 d(跨度大约为24～60 h)。LH的检测方法，由于密集的血液检测不仅浪费时间而且昂贵，当阴道上皮细胞角质化大于60%时，需要每天检测血液LH才能准确确定LH峰值。其虽然可以提高冻精和冷藏精液人工授精时的受孕率，但定量检测LH在实际应用不广泛。

孕激素对维持妊娠等生殖活动各方面具有至关重要的作用。孕激素开始时候很低，在LH峰出现前，孕酮浓度小于0.5 ng /mL。 研究发现，德国牧羊犬发情第9～14天，血清孕酮值基本都超过10 ng /mL，此时为母犬最佳受孕时间[5]。初始的的孕激素上升与LH峰值密切相关，可以作为预测最佳受孕时间的依据。血液孕酮检测是一种确定最佳受孕时间的准确方法，也是快速确定母犬所处发情周期阶段的最好工具。有许多兽医以及实验室提供及时、有偿的孕激素定量分析。全世界没有一个快速的检测方法，但有一些商业性的半定量孕酮试剂盒。这些试剂盒能够快速检测孕酮，在一些不是很复杂的配种上很实用，但对冷藏和冷冻精液进行的人工授精或母犬输精时，精子质量低，采用定量方法测定孕酮，才能提供一个更准确的结果。

3 B超及犬发情周期其他一些新的指示物及方法

B型超声诊断技术亦可用于母犬的排卵鉴定[6]。在国外此方法已经作为一种排卵时间确定的重要辅助手段，但国内尚未见有成功的报道。但人们正尝试研究使用一些新的方法来对犬的排卵时间进行鉴定，如Pardo等研究发现，唾液结晶随母犬发情周期的变化而呈现明显的规律性变化，可以作为确定母犬最佳配种时间的一种新指示物。龚剑锋等研究发现，发情期唾液结晶的形状为典型羊齿状或松针状，主梗直而粗硬，分枝密而长。范泉水等研究发现，阴道分泌物中的葡萄糖含量是发情期的重要指示物。当葡萄糖含量出现阴性时，角化细胞与嗜酸性细胞出现峰值，为母犬最佳受孕期。但这两种方法目前未见推广应用，准确程度也需要进一步验证。刘贺等研究发现，血液中NO的峰值与犬的排卵时间存在很大的关联性，可作为预测排卵时间的一种新方法。NO的检测方法相对简便易行，但该方法尚需要进一步研究。研究发现,发情周期阴道黏液电阻值测定方法，可以为母犬配种提供参考[7]。该方法快速、准确率高，具有一定的推广价值。有研究发现,采用气质联用方法检测母犬阴道分泌物中某些化合物的相对含量，发现在母犬发情前后有显著差异[8]，预示其在犬发情鉴定方面具有潜在的研究价值。但上述这些指示物及方法能否准确确定母犬的排卵时间，尚需要进一步研究验证。

4 小结及展望

国外确定母犬的排卵时间更多的是把阴道细胞学检查、B超检查和孕酮检测方法结合起来，以便较准确地确定母犬的排卵时间。目前，国内临床实践中通常根据母犬阴道出血时间、接受交配情况、阴道细胞学检查、阴唇的肿胀程度来进行发情鉴定。一些新的指示物与母犬排卵的关联性，尚需要进一步研究。

综上所述，迄今为止在临床实践中也尚未找到一种非常可靠的确定母犬排卵时间的方法。但，B超检查和孕酮检测在母犬发情鉴定的研究中是一种非常有潜力的研究方向。相信随着B超检查和孕酮检测技术的深入研究及发展，不久的将来B超检查和孕酮检测，可能会成为临床上准确可靠的确定母犬排卵时间实用技术手段。

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S829.2

： B

： 1005-2739(2017)05-0003-03

2017-07-03

“十三五”国家重点研发计划项目(2016YFD0501008)；江西省重点研发计划项目(201201ZDYJ008)

王春亮(1987-)，男，硕士，研究方向为动物遗传育种与繁殖。 E-mail:1486161197@qq.com

叶俊华(1957-)，男，研究员，主要研究方向为警犬繁殖与育种。 E-mail:yjh575757@163.com 李川武(1964-)，男，研究员，研究方向为警犬繁殖与育种。 E-mail:lchuanw@163.com