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HPLC法测定“额力根一号”中羟基红花黄色素A的含量

2017-01-19赵东鲲包长龙

中国民族民间医药·下半月 2016年12期

赵东鲲+包长龙

【摘 要】 目的:测定额力根一号中羟基红花黄色素A的含量。方法:采用HPLC法,以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,流动相为甲醇-乙腈-0.7%磷酸溶液(26∶2∶72),检测波长为403nm,流速为1.0mL/min。结果:羟基红花黄色素A在0.3762~3.7620μg(r=0.99991)范围内呈良好的线性关系。羟基红花黄色素A平均加样回收率为97.3%。结论:该方法简便、灵敏,可用于制剂的质量控制。

【关键词】 额力根一号;羟基红花黄色素A;HPLC

【中图分类号】R914.4 【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517(2016)24-0018-03

Abstract:Objective HPLC determination of hydroxysafflor yellow A in eligen Ⅰ.Methods The HPLC method was used.Octadecyl silane bonded silica gel as a filler ,The mobile phase was a mixture of methanol-acetonitrile-0.7% aqueous phosphoric acid(26∶[KG-*3/5]2∶[KG-*3/5]72) at a flow rate of 1.0mL·min-1 ,and the detecting wavelength was at 403 nm.Results The linear range of hydroxysafflor yellow A was 0.3762~3.7620μg(r=0.99991) and the average recovery rate was 97.3%.Conclusion The method is simple,rapid and accurate.It could be used for the quality control of eligen Ⅰ.

Keywords:Eligen Ⅰ;Hydroxysafflor Yellow A; HPLC

额力根一号(肝一号)是由丹参、鳖甲、黄芪、党参、当归、三七、柴胡、红花、枸杞子、北豆根、赤芍、青篙、阿胶、拳参、生地十五味药组成的复方制剂,主要治疗肝肿大、肝脓肿、肝癌、肝硬化以及酒精引起的胃酸过多等。额力根一号方中的主要成分红花有活血通经、祛瘀止痛的功效。而羟基红花黄色素A为红花的水溶性成分,具有抑制血小板聚集、抗氧化、抗炎等多种药理活性[1],本文采用方法简单、准确、重现性好的HPLC法来测定额力根一号中羟基红花黄色素A的含量,实现对额力根一号的质量控制。

1 仪器与试药

1.1 仪器 LC-10AT,SPD-10Avp,SIL-HTA,CLASS-VP。

1.2 试药 羟基红花黄色素A(中国药品生物制品检定所提供,供含量测定用。批号:111637—200503);额力根一号(批号:090525、090603、090326由内蒙古通辽市库伦旗蒙医医院制剂室提供)。

2 方法和结果

2.1 色谱条件 色谱柱:Phenomenex C18柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-乙腈-0.7%磷酸溶液(26∶2∶72),柱温:30℃,检测波长为403nm,流速为1.0mL/min,进样量10μL。理论板数:按羟基红花黄色素A峰计算应不低于3000。

2.2 对照品溶液的制备 称取羟基红花黄色素A对照品13mg,精密称定,置100mL量瓶中,加25%甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,即得(制成每1mL含0.13mg的溶液)。

2.3 供试品溶液的制备 取额力根一号粉末(过三号筛)约6.5g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入25%甲醇50mL,称定重量,超声处理(功率300W,频率50kHz)40min,放冷,再称定重量,用25%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得额力根一号样品溶液。

2.4 阴性对照溶液的制备 按照额力根一号处方制成阴性对照溶液(不含红花)。

2.5 干扰实验 取三种溶液(对照品、阴性及额力根一号溶液)各10μL分别进样检测,结果可见:额力根一号配方中没有对羟基红花黄色素A产生干扰的成分,色谱图见图1~3。

2.6 线性试验 分别取2、4、8、12、15和20μL对照品溶液(羟基红花黄色素A),进样。按上述色谱条件进行测定,以对照品进样量为横坐标(X),以峰面积为纵坐标(Y),绘制标准曲线。羟基红花黄色素A在0.3762~3.7620μg范围内呈良好的线性关系,回归方程为:Y=1.0476×106X-3.7547×104 ,r=0.99991。

2.7 精密度试验 取“2.2”项下的羟基红花黄色素A对照品溶液,在上述色谱条件下连续进样6次,测定羟基红花黄色素A峰面积,结果羟基红花黄色素A峰面积的RSD(n=6)为1.10%。

2.8 重复性试验 在上述色谱条件下,分析测定由同一批额力根一号样品制备的6份供试品溶液。结果羟基红花黄色素A含量的平均值(n=6)为0.973 mg·g-1,RSD为0.20%。见表1。

2.9 稳定性试验 取同一额力根一号供试品溶液,室温放置,分别于0,2,4,6,8,12,18,30h按上述色谱条件测定。测得羟基红花黄色素A的平均峰面积为1307572,RSD(n=6)为1.30%。结果表明额力根一号供试品溶液在室温条件下放置30h依然稳定。

2.10 回收率试验 精密称取已知含量的样品额力根一号约3.0g,共9份,分别添加羟基红花黄色素A对照品溶液适量,按上述方法测定含量后计算回收率。结果如下表。羟基红花黄色素A平均回收率(n=9)为97.3%。

2.11 样品测定 取额力根一号,按“2.3”项下方法制备供试品溶液,在上述色谱条件下进样分析,记录色谱峰面积,计算含量。结果见表3。

3 讨论

3.1 测定波长的选择 配制一定浓度的羟基红花黄色素A对照品溶液,分别在210~600nm波长内进行全扫描,羟基红花黄色素A在403nm处有较强的紫外吸收。实验选择403nm进行测得。

3.2 提取溶剂的选择 据文献[2],药材红花的羟基红花黄色素A含量测定方法中,选用25%甲醇作为提取溶剂,超声提取40min,故本研究也采用25%甲醇作为提取溶剂,超声提取40min。

3.3 定量方法的建立 本研究建立了一种准确可靠、专属性强、简单快捷的定量方法,通过对羟基红花黄色素A的含量测定,达到控制额力根一号制剂质量的目的。

参考文献

[1]刘永刚,李芳君,汤芳.羟基红花黄色素A对大鼠心肌细胞缺血再灌注损伤的保护作用[M].中国药理与临床,2015,31(1):71-73.

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:中国医药科技出版社,2015:151.

(编辑:梁志庆)