何琼 杨笑鹤 浙江省医疗器械审评中心 （浙江 杭州 310012）

C反应蛋白测定试剂盒注册申报资料相关问题探讨

何琼 杨笑鹤 浙江省医疗器械审评中心 （浙江 杭州 310012）

本文对C反应蛋白测定试剂盒注册申报资料中部分常见问题进行了汇总分析，提示注册申请人应注意的关键点。并简要比对了2014年版和2016年修订版C反应蛋白测定试剂盒技术审查指导原则的差异点。希望为注册申请人在注册申报资料编写时提供一定的指导意义。

C反应蛋白（CRP） 注册申报 常见问题

C反应蛋白（C-reactive protein，CRP）基因位于1号染色体q23，序列上高度保守。CRP属于穿透素家族成员之一，相对分子质量为115×103，由5个相同的亚单位以非共价键形式结合，形成对称的环状五球体，中间环绕一孔型结构，其凹面含有配体结合位点，每个亚单位有206个氨基酸残基，相对分子质量为23×103[1]。CRP一般主要用于感染，组织损伤和炎症性疾病的评价，为炎症性疾病的诊断、治疗和监控提供参考信息。超敏C反应蛋白常见的用途可作为心血管疾病风险识别的辅助手段。配合传统的急性冠状动脉综合征临床诊断使用，可作为冠状动脉疾病或急性冠状动脉综合征复发的预警指示物[2]。

按照检测方法的定量下限不同，国内已批准上市的CRP测定试剂盒可分为常规CRP测定试剂盒、超敏CRP测定试剂盒和全量程CRP测定试剂盒；按照检测的方法学不同，国内已批准上市的CRP测定试剂盒可分为免疫层析法（例如胶体金免疫层析法、荧光免疫层析法、量子点免疫层析法、化学发光免疫层析法）、免疫比浊法（免疫比浊法、胶乳增强免疫比浊法）、酶联免疫法等；按照被测底物的个数不同，国内已批准上市的CRP测定试剂盒可分为单独测定试剂盒、二合一联合测定试剂盒和三合一联合测定试剂盒。

注册申请人应参照《国家食品药品监督管理总局关于公布体外诊断试剂注册申报资料要求和批准证明文件格式的公告》（2014年第44号）及《C反应蛋白测定试剂盒注册技术审查指导原则（2016年修订版）》进行C反应蛋白测定试剂盒注册申报资料的编写。下文，笔者基于平时的技术审评工作，将CRP测定试剂盒注册申报资料中的常见问题总结如下。

1.综述资料

综述资料主要包括CRP的代谢、产品预期用途、产品描述、参考品的详细溯源性、有关生物安全性的说明、研究结果的总结评价以及同类产品上市情况介绍等内容。应符合《体外诊断试剂注册管理办法》（国家食品药品监督管理总局令第5号）和《关于公布体外诊断试剂注册申报资料要求和批准证明文件格式的公告》（国家食品药品监督管理总局公告2014年第44号）的相关要求[2]。

在实际的注册申报材料中，主要存在申请人对相关资料一带而过的通病。在产品预期用途、相关临床适应症背景描述、同类产品比较等部分，往往缺乏详细描述，没有数据或文献的支撑，这一点也恰恰反映了目前生化类体外诊断试剂同质化相对严重，企业在项目立项或者设计输入时可能存在跟风、简化的现象；在校准品溯源方面，申请人通常缺乏对溯源意义和目的的理解，存在溯源链不正确、不完整的情况，例如溯源至其他厂商试剂盒的校准品、未建立工作校准品等；在质控品赋值方面，主要存在采用其他厂商试剂盒直接定值，没有充分考虑系统匹配性的问题；在生物安全性说明方面，申请人存在笼统描述的现象，并没有针对每个可能存在生物安全性问题的物料展开评价。

2.分析性能评估资料与产品技术要求

注册申请人应提交原厂在产品研制阶段对试剂盒进行的所有性能验证的研究资料，包括具体研究方法、实验数据、质控标准、统计分析等详细资料。对于C反应蛋白定量检测试剂盒建议多批产品对以下分析性能进行研究：分析灵敏度、准确度、特异性、线性范围、精密度（批间、批内）等指标，具体研究方法建议参考相关指导原则[2,3]。

在注册申报资料中，偶尔会出现分析性能评估试验分析的性能指标与产品技术要求不一致或不能完整覆盖产品技术要求的情况，从而导致分析性能评估试验结果不能支持产品技术要求指标的确立；还会出现未按要求对多批成品进行性能评估的情况。另外需要提到的一点是，若注册单元中含有多种包装规格，应说明不同包装规格有无差异，若有差异，应对所有包装规格进行分析性能评估研究。

3.阳性判断值或参考区间确定资料

对于常规的CRP测定，参考值通常被认为是临床上含量高于10mg/L。在健康人群血液中CRP水平低于5mg/L，而在各种条件下，急性炎症4～8h，CRP值达到约20～500mg/L。常规CRP作为急性炎症评估指标比红细胞沉降率（ESR）和白细胞计数更敏感、更可靠。对于超敏CRP的检测，参考值通常被认为是临床上含量高于1mg/L[2]。

这部分应明确所采用的样本来源、确定方法及详细的试验资料。注册申请人在选择样本时，有时会忽略性别、年龄、肥胖、妊娠、地域等变量对结果的影响，导致纳入样本结构不合理；统计分析时，通常会忽略数据可用性分析、数据类型分析。最后确定定量参考区间时，主要存在没有结合CRP的实际临床意义，并根据数据分布类型，来选择统计方法。还有一个普遍问题是该部分得出的分析结论应与企业自己分析的结果呼应，而不仅仅是转而去证明某个参考文献的结果。建议申请人提交原始试验数据、统计学分析图等完整的研究数据。

4.临床评价资料

体外诊断试剂的临床试验（包括与已上市产品进行的比较研究试验）是指在相应的临床环境中，对体外诊断试剂的临床性能进行的系统性研究[4]。2016年09月30日，国家食品药品监督管理总局发布《总局关于发布第二批免于进行临床试验医疗器械目录的通告》（2016年第133号），目录包含15个生化类体外诊断试剂，都属于化学显色类。截至目前，C反应蛋白测定试剂盒仍需要进行临床试验研究。临床试验的设计、开展、报告应当符合《体外诊断试剂临床试验技术指导原则》、《C反应蛋白测定试剂盒注册技术审查指导原则（2016年修订版）》等相关要求。

申请人在进行临床试验时，一般采用比对试验的方法，与已批准上市产品进行等效性研究。在比对试剂的选择方面，主要的问题是缺乏数据或资料表明比对试剂是临床普遍认为质量较好的同类产品。另外，申请人在进行比对试剂的筛选时，往往没有充分考虑两者方法学是否相同、性能指标是否相近，没有充分了解比对产品的校准品的溯源情况、阳性判断值或参考区间等情况。个别注册申报中还会出现不同临床机构采用不同试验方案、不同比对试剂和不同试验机型的情况，导致后续合并统计失去客观性和合理性。

临床试验是一个严肃严谨的科学研究过程，因此试验过程应严格按照方案的相关规定进行。整个试验过程应在临床研究机构的实验室内并由本实验室的技术人员操作完成，申报单位的技术人员除进行必要的技术指导外，不得随意干涉实验进程，尤其是数据收集过程[2]。方案不可随意更改，所有的方案偏离都应记录在案并给予合理说明，必要时更改后的方案还应重新提交伦理委员会审查。临床试验过程有时会出现入选的病例再被排除、测试结果不佳等情况，任何意外情况都应该被记录、解释并报告，不可随意涂抹或掩盖。样本浓度应覆盖考核试剂检测范围，尽可能均匀分布。尽可能使40%样本的测定值处于参考区间以外，但在测量范围内[2]。另外，样本的选择还应考虑与产品预期用途中临床适应症的匹配性，例如年龄因素、疾病背景等，应提交符合伦理要求的原始病例表。全量程CRP测定试剂盒涉及到多个临床适应症，因此需要特别注意的是用来验证每个临床适应症的临床试验样本量都应该各自符合统计学意义，一般来说这种情况下，需要的样本量会大于200例。涉及到多个样本类型的，若不同样本的检测结果具有可比性，例如血清血浆的测量结果具有可比性，则可以在符合统计学要求的前提下测试200例（或以上）的血清样本，再测试100例（或以上）的血浆样本；若不同样本的检测结果不具有可比性，例如血清血浆的测量结果不具有可比性，则需要在符合统计学要求的前提下测试200例（或以上）的血清样本，在此基础上，再测试100例以上的血浆样本，血浆样本数应符合统计学要求。

除此之外，任何采用人体或者人体样本的临床试验都应符合伦理学要求，需要提交伦理委员会同意临床试验开展的书面意见。

统计学分析时，应根据试验设计、数据类型等合理科学的选择统计学方案[5]。

5.总结

国家食品药品监督管理总局2014年5月20日发布《C反应蛋白定量检测试剂盒产品注册技术审查指导原则》，并于2016年3月7日发布《C反应蛋白测定试剂盒注册技术审查指导原则（2016年修订版）》。2016年修订版对部分内容进行了修订和更新，例如明确了样本类型为血清、血浆或全血，删除了“其他体液样本”的表述；明确了超敏C反应蛋白的推荐线性范围为“0.5 mg/L到≤10.0mg/L”，而不是2014版中描述的“＜1.0 mg/L到≤10.0mg/L”；提高了部分性能指标的要求，并限定了检验方法，例如分析灵敏度、准确度等；提出了应对抗凝剂进行研究并在说明书中予以说明。另外，因这两年法规、指导原则、规范性文件等变化、更新，2016年修订版指导原则也对临床试验研究、说明书编写等做了相应的修订。

综上所述，申请人应在熟悉体外诊断试剂法律法规等要求的基础上，根据《国家食品药品监督管理总局关于公布体外诊断试剂注册申报资料要求和批准证明文件格式的公告》（2014年第44号），参考《C反应蛋白测定试剂盒注册技术审查指导原则（2016年修订版）》，特别是相较于2014年版指导原则修订的部分，遵守实事求是的原则，进行注册申报资料的编写，以提高审评审批效率。

[1] 张晓慧, 李光韬, 张卓莉. C反应蛋白与超敏C反应蛋白的检测及其临床意义[J]. 中华临床免疫和变态反应杂志, 2011,5(1):74–79.

[2] 国家食品药品监督管理总局. C反应蛋白测定试剂盒注册技术审查指导原则(2016年修订版)[S]. 2016-03-07.

[3] 孙莉, 李正, 赵阳. C-反应蛋白测定试剂(盒)技术审评规范要点概述[J]. 首都食品与医药, 2015,18(4):4-5.

[4] 国家食品药品监督管理总局. 体外诊断试剂临床试验技术指导原则[S]. 2014-09-11.

[5] 杨笑鹤, 季聪华, 何琼, 等. 医疗器械临床试验数据的统计分析方法建议[J]. 中国医疗器械杂志, 2017,41(1):63-65.

Discussion on Application Materials for Registration of C-reactive Protein Detection Kit

HE Qiong YANG Xiao-he Zhejiang Center for Medical Device Evaluation (Zhejiang Hangzhou 310012)

This paper summarizes and analyzes some common problems occurred in application materials for registration of C-reactive protein(CRP) detection kit , and tells manufacturers some key points that they should pay attention to. It makes a brief comparison between the CRP guidance of 2014 and the guidance of 2016, and spots some differentiations. It is hoped to provide some suggestion for manufacturers on application material compilation.

C-reactive protein(CRP), registration application, common problems

1006-6586(2017)11-0055-03

R197

A

2017-04-09

浙江省科技厅重点软科学研究项目《体外诊断试剂的分析性能评估与其安全有效性研究》（项目编号：2016C25045）。