郭巧技，谢耀轩，罗 婧，苏 畅，王淑红，王铁杰

(深圳市药品检验研究院，深圳岭南药材资源开发与应用工程实验室，深圳 518057)

药品质量与检验

不同采收阶段益母草的质量评价

郭巧技，谢耀轩，罗 婧，苏 畅，王淑红，王铁杰

(深圳市药品检验研究院，深圳岭南药材资源开发与应用工程实验室，深圳 518057)

目的：通过对不同产地、不同采收阶段的益母草进行测定，评价市场上益母草的质量情况。方法：通过外观性状判断益母草的采收阶段，采用薄层色谱法对益母草中黄酮类成分进行鉴别；采用HPLC法对益母草进行特征图谱鉴别；采用HPLC法测定盐酸水苏碱和盐酸益母草碱的含量。结果：益母草中总黄酮类成分、盐酸水苏碱及盐酸益母草碱随着采收时间的不同而呈现明显差异。结论：营养期的益母草质量最好，其次是童子期，花期及果期质量最差。

益母草，盐酸水苏碱，盐酸益母草碱，采收期，质量评价

益母草为唇形科植物益母草LeonurusjaponicusHoutt的新鲜或干燥地上部分。鲜品春季幼苗期至初夏花前期采割；干品夏季茎叶茂盛、花未开或初开时采割，晒干。益母草具活血调经、利尿消肿、清热解毒之功效，用于月经不调、痛经闭经、恶露不尽、水肿尿少、疮疡肿毒[1]。益母草的主要化学成分为生物碱类、二萜类、甾醇、黄酮类、有机酸、多种微量元素及脂肪等[2]。《中国药典》2015年版益母草标准中仅对生物碱类的成分进行了鉴别和含量测定，为全面、有效控制质量，在原生物碱鉴别的基础上，增加了以益母草对照药材为对照，对其黄酮类成分进行薄层色谱鉴别。为评价益母草的质量提供科学依据，也为医院合理用药提供参考依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器 岛津LC-20AD高效液相色谱仪，二极管阵列检测器；梅特勒-托利多XS205电子天平。

1.2 试药 盐酸水苏碱对照品(批号110754-200421)、盐酸益母草碱对照品(批号110704-200420)、益母草对照药材(批号110703-200424)均由中国药品生物制品检定所提供；硅胶G预制板为MACHERKEY-NAGEL生产；分别通过厂家提供、药店及药材市场购买等渠道共收集22批益母草。水为超纯水，乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 外观性状检验结果 分别从9个省通过厂家提供、药店及药材市场购买等渠道共收集了22批益母草药材。《中国药典》2015年版一部“益母草”项下规定：益母草应在茎叶茂盛、花未开或初开时采割，符合采收期的有9批，其余13批为果初期或果熟期，未在规定的采收期进行采收。见图1和图2。

图1 药材收集地统计

图2 药材采收期统计

2.2 黄酮类成分的薄层色谱鉴别

2.2.1 供试品溶液制备 取益母草粉末约1 g，加水50 ml，煮沸，保持微沸1 h，离心10 min(3 000 r/min)，取上清液通过聚酰胺柱(80～100目，3 g，湿法装柱)，用水50 ml洗脱，弃去洗脱液，再以20%乙醇溶液30 ml洗脱，弃去洗脱液，最后以70%乙醇溶液50 ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1 ml使溶解，取上清液，作为供试品溶液[3]。

2.2.2 对照药材溶液制备 取益母草对照药材1 g，加水50 ml，煮沸，保持微沸1 h，离心10 min(3 000 r/min)，取上清液，同法制备对照药材溶液。

2.2.3 测定 吸取供试品溶液及对照药材溶液各4 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(7∶3∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，2%三氯化铝乙醇溶液，105 ℃加热8～10 min，置紫外光灯(365 nm)下观察。见图3。

1～5.供试品溶液 6.益母草对照药材溶液 7～12.供试品溶液

2.3 盐酸水苏碱含量测定

2.3.1 色谱条件 以丙基酰胺键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.2%冰醋酸溶液(80∶20)为流动相，流速：1.0 ml/min；用蒸发光散射检测器[1,4]。

2.3.2 对照品溶液的制备 取盐酸水苏碱对照品适量，精密称定，加70%乙醇制成每1 ml含0.5 mg的溶液，即得。

2.3.3 供试品溶液的制备 取益母草粉末(过三号筛)约1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，收集洗脱液，蒸干，残渣加70%乙醇溶解并转移至10 ml量瓶中，加70%乙醇至刻度，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

2.3.4 测定 分别精密吸取对照品溶液5和10 μl，供试品溶液10～20 μl，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计算，即得。见图4和表1。

2.4 盐酸益母草碱含量测定

2.4.1 色谱条件 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.4%辛烷磺酸钠的0.1%磷酸溶液(24∶76)为流动相，流速：1.0 ml/min；检测波长277 nm[1,5]。

2.4.2 对照品溶液的制备 取盐酸益母草碱对照品适量，精密称定，加70%乙醇制成每1 ml含30 μg的溶液，即得。

2.4.3 供试品溶液的制备 取“2.3.3”项下供试品溶液作为供试品溶液。

2.4.4 测定 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液10 μl，注入液相色谱仪，测定，即得。见表1和图5。

1. 盐酸水苏碱

序号来源采收期总黄酮类鉴别斑点强弱盐酸水苏碱含量(%)盐酸益母草碱含量(%)1吉林童子期强0．850．3422河南童子期强0．610．0803湖北童子期强0．530．0774广西营养期弱0．510．9835安徽营养期强0．340．3656山东营养期强0．520．6137山东营养期强0．510．5218安徽营养期强0．500．3119湖北花初期弱0．100．14510北京果初期弱0．060．20311四川果初期弱0．170．02612四川果初期弱0．160．09413安徽果熟期弱0．160．01314安徽果熟期弱0．130．14515山东果熟期弱0．040．09016山东果熟期弱0．130．03417河南果熟期弱0．130．01318四川果熟期弱0．020．01419四川果熟期弱0．020．00720四川果熟期弱0．070．01021广东果熟期弱0．040．04722广东果熟期弱0．220．029

1. 盐酸益母草碱

图5 对照品(A)供试品(B)HPLC色谱图

3 讨论

《中国药典》2015年版一部“益母草”药材项下收载了盐酸水苏碱、盐酸益母草碱的含量测定方法，并给出了含量限度，即含盐酸益母草碱不得少于0.050%，含盐酸水苏碱不得少于0.50%。22批益母草药材按照上述标准进行了含量测定，其中13批的盐酸益母草碱含量合格，合格率为59.1%；7批的盐酸水苏碱含量合格，合格率为31.8%；7批的盐酸水苏碱、盐酸益母草碱两项指标同时合格，合格率为31.8%；按规定采收期进行采收的9批益母草中盐酸水苏碱、盐酸益母草碱合格率分别为100%及77.8%。

从总黄酮类成分测定结果可见，22批益母草药材均检出总黄酮类成分，其中童子期及营养期的益母草

检出的斑点均较强，说明测定成分的含量较高。

益母草营养器官叶片中含的盐酸水苏碱最高，其次是花，茎作为输导组织，其内所含的有效成分最少。童子期及营养期的益母草有大量的叶，果熟期的益母草以茎为主，因此建议以《中国药典》2015年版一部规定的采收期采收的益母草进行投料。本次研究还收集到了8批益母草伪品，经外观性状鉴别为7批夏至草，1批未知伪品。使用上述方法对该8批样品进行实验。①盐酸水苏碱、盐酸益母草碱含量测定结果：7批夏至草的盐酸益母草碱及盐酸水苏碱均不合格；未知伪品盐酸水苏碱、盐酸益母草碱均很高，但暂未确定其来源。②总黄酮类成分测定结果：7批夏至草显示的斑点均很弱，部分斑点缺失；未知伪品的总黄酮成分薄层色谱无斑点。由此可见：黄酮类成分的薄层色谱鉴别使用益母草对照药材作为对照，可有效鉴别益母草及其伪品。部分成药的益母草鉴别也可参考该方法，以保证其投料的真实性。

1 中国药典[S]．一部.2015：290-291

2 楼之芩，秦波．常用中药材品种整理和质量研究(北方协作组)[M]．福州：福建科学技术出版社，1994：527-573

3 余丹妮，徐德生，冯怡，等．柱层析-分光光度法测定益母草中总黄酮含量[J]．时珍国医国药，2007， 18(5)：46-48

4 万军，周霞，齐红艺，等． 前列泰胶囊中盐酸水苏碱含量的HPLC研究[J]．天津中医药，2005，22(5)：425-427

5 张晓萍，丁永辉，杨锡，等．前列泰丸的质量分析研究[J]．中成药，2012，34(2)：367-371

2016-02-16

深圳市医院中药制剂标准提升技术研发项目(No.JSGG20130918143735546)

R931.4

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1006-5687(2016)04-0004-03