张改文，郝卫芳，史新涛，李　赟

（太原市动物疫病预防控制中心，山西 太原 030027）

猪场口蹄疫抗体血清学调查与分析

张改文，郝卫芳，史新涛，李赟

（太原市动物疫病预防控制中心，山西 太原 030027）

口蹄疫是偶蹄动物感染口蹄疫病毒（FMDV）引起的一种急性、热性、接触性传染病，黄牛、水牛、猪、骆驼、羊、鹿等动物最易感。口蹄疫病毒分为O、A、C、SAT1、SAT2、SAT3（即南非口蹄疫病毒1、2、3型）和Asia I（亚洲I型）7个血清型，各型之间几乎没有免疫保护力，感染了口蹄疫病毒某一血清型的动物仍可感染其他血清型病毒而发病。近两年，周围规模化猪场O型口蹄疫免疫抗体合格，仍有口蹄疫疫情发生，为进一步研究猪场口蹄疫疫病的发生原因，对28个规模化猪场进行了口蹄疫病毒O型、A型和非结构蛋白抗体水平血清学调查，分析当前猪场是否存在感染口蹄疫病毒野毒株，以及感染A型口蹄疫病毒的可能。FMDV的免疫是依赖T细胞和B细胞应答，疫苗接种后主要诱导机体产生中和抗体，但FMDV中非结构蛋白NSP相对保守，NSP是除了衣壳蛋白1A、1B、1C、1D和它们的前体蛋白之外的所有由病毒编码但不参与病毒衣壳组成的蛋白，包括成熟蛋白L、2A、2B、2C、3A、3B、3C、3D以及它们的前体，它参与病毒的复制、多聚蛋白的裂解和病毒颗粒的组装过程。

1　样品与试剂

本市10个县随机选取了不同规模的猪场28个，其中500头以下7个场，500～1 000头之间7个场，1 000～3 000头之间7个场，3 000头以上7个场，随机采集以上猪场血清样品340份，进行了口蹄疫O型、A型和非结构蛋白（3ABC）抗体血清学检测。

检测试剂为市场上成熟的试剂盒，其中猪O型口蹄疫病毒抗体ELISA检测试剂盒，购自郑州中道生物技术有限公司；口蹄疫A型液相阻断ELISA抗体检测试剂盒，购自中国农业科学院兰州兽医研究所、口蹄疫病毒非结构蛋白抗体单抗阻断ELISA试剂盒，购自北京世纪元亨动物防疫技术有限公司；检测仪器有：酶标仪（Thermo MK3），自动洗板机（Thermo MK2）等。

2　结果

2.1检测结果3项检测结果如表1、图1。4种不同规模猪场O型口蹄疫抗体阳性率均达85%以上，A型口蹄疫抗体阳性率分别为10.8%、16.25%、30.8%、49%，非结构蛋白抗体检测阳性率分别为9.2%，13.75%、30%、24%。A型口蹄疫抗体阳性场18个，占调查场的64.2%，非结构蛋白阳性场数20个，占调查场的71.4%。

28个猪场中O型口蹄疫免疫抗体合格的场25个；A型口蹄疫抗体阳性场18个；非结构蛋白抗体阳性场20个。A型口蹄疫抗体阳性率高于非结构蛋白抗体阳性率的场8个，非结构蛋白抗体阳性率高于A型口蹄疫抗体阳性率的场4个，二者阳性率相同的场2个；只A型抗体阳性场4个；只非结构蛋白抗体阳性场6个；A型口蹄疫抗体和非结构蛋白抗体均为阴性场4个。

通过对免疫情况与检测结果的综合分析，免疫猪O型口蹄疫合成肽疫苗的13个猪场中，A型和非结构蛋白抗体均为阳性场6个，只A型抗体阳性场1个，只非结构蛋白抗体阳性场3个，二者抗体均为阴性场3个。免疫O型口蹄疫灭活疫苗的15个猪场中，A型和非结构蛋白抗体均为阳性场9个，只A型抗体阳性场2个，只非结构蛋白抗体阳性场2个，二者抗体均为阴性场2个。

2.2结果分析

2.2.1Rodriguez等［1］、Mackey等［2］、Brochi［3］、Bergerman等［4］、朱咏梅［5］通过对非结构蛋白（3ABC）抗体的产生机理，野毒感染3ABC抗体检测技术的建立，3ABC抗体检测技术与其他抗体检测技术的比较和临床检测试验应用的研究，证明了非结构蛋白（3ABC）抗体检测技术仍是比较有效的区别口蹄疫免疫抗体和感染抗体的方法。因此，试验检测结果显示，28个规模化猪场中口蹄疫病毒大面积、大范围存在，其中A型口蹄疫病毒潜伏感染和隐性感染的现象也较严重。

2.2.2猪O型口蹄疫属于国家强制猪免疫的惟一口蹄疫疫苗。28个猪场O型口蹄疫免疫抗体整体合格率达91.5%，除3个场合格率为55%、65%、70%外，其余25个猪场合格率均在80%以上，说明猪场O型口蹄疫免疫抗体水平很高，仍是防控猪口蹄疫疫病的重要措施。检测结果显示，O型口蹄疫免疫抗体不合格的3个猪场，口蹄疫非结构蛋白抗体检测全为阳性，其中2个场A型口蹄疫抗体检测也为阳性，表明3个猪场可能感染过或正感染口蹄疫病毒，影响了O型口蹄疫免疫抗体的产生；其中2个A型抗体阳性场也不能排除其他口蹄疫亚型病毒感染的可能。

表1　4种规模猪场3种口蹄疫血清学抗体检测结果

图1　4种不同规模猪场3种口蹄疫抗体检测阳性率

2.2.3口蹄疫A型和非结构蛋白抗体均为阴性的5个场，占调查场的17.8%，其中免疫猪O型口蹄疫合成肽疫苗的场3个，免疫O型口蹄疫灭活疫苗的场2个，未发现不同疫苗免疫的差异。检测结果表明，这5个场未发生口蹄疫病毒的感染。

2.2.4口蹄疫A型和非结构蛋白抗体均为阳性的14个场，猪场规模越大，A型口蹄疫阳性率越高；非结构蛋白抗体检测阳性率随着养殖规模的增大呈抛物线，1 000～3 000头规模猪场阳性率最高。14个场中A型口蹄疫抗体阳性率高于非结构蛋白抗体阳性率的场8个，说明A型口蹄疫病毒在猪场大范围存在，其感染的概率大于其他口蹄疫亚型感染的概率。A型口蹄疫抗体阳性率低于非结构蛋白抗体阳性率的场4个，说明猪场存在口蹄疫病毒感染的可能，但不能说明全是A型口蹄疫感染。

2.2.528个调查猪场中，非结构蛋白抗体阳性场有20个，占调查场的71.4%，A型抗体阳性场有18个，占调查场的64.3%，调查警示规模化猪场口蹄疫病毒大范围存在，其中A型口蹄疫病毒存在和感染的可能性较大，需要引起猪场的高度重视，做好相应的预防措施。

3　讨论

该项调查中采集的猪群主要为育肥猪，年龄均2岁以下，而且只有个别猪场进行过A型口蹄疫免疫，其余猪场均未进行A型口蹄疫免疫，因此，整体调查分析，A型口蹄疫病毒在部分猪场潜伏存在，虽未引起口蹄疫疫情的暴发，但需要引起猪场的高度重视，应尽早制定相应的应对措施来应对A型口蹄疫疫情暴发和蔓延。

对未免疫A型猪口蹄疫的种猪场和规模化猪场，开展一次猪A型口蹄疫血清学抗体筛查，对阳性样品进一步进行A型口蹄疫病原学确诊，来净化和防控A型口蹄疫病毒的潜在威胁。对免疫A型口蹄疫疫苗的猪场进行免疫抗体水平的跟踪监测，同时进行非结构蛋白（3ABC）抗体的检测，排除口蹄疫其他血清型病毒的感染。

经过调查分析，基层动物疫病检测机构日常检测需加大检测力度。猪口蹄疫免疫抗体检测，不能单一地检测口蹄疫O型免疫抗体，要结合口蹄疫血清学其他检测技术进行综合检测，辨别抗体是免疫抗体还是感染抗体。此外，A型抗体阳性率随着猪场规模扩大阳性率升高，预示A型口蹄疫病毒在猪群中大面积存在，需加以重视；而A型口蹄疫在猪场是否纳入强制免疫计划，仍需进一步研究论证。

［1］Rodriguez A，Dopazo J，Saiz J C，et al.Immunogenicity of nonstructural proteins of foot-and-mouth disease virus：differences between infected and vaccinated swine［J］.Arch Virol，1994，136（1/2）：123-131.

［2］Mackey D K J，Forsyth M A，Davies P R，et al.Differentiating infection from vaccination in foot-and-mouth disease by the detection of antibodies to the non-structural protein 3D，3AB and 3ABC in ELISA using antigens expressed in baculovirus［J］.Arch-Virol，1998，143：1461-1476.

［3］Brocchi E，de Diego M I，Berlinzani A，et al.Diagnostic potential of Mab based ELISA for antibodies to non-structural roteins of foot-and-mouth disease virus to differentiate nfection from vaccination［J］.Vet Q，1998，20（S）：20-24.

［4］Bergmann I E，de Mello P A，Nneitzet E，et al.Diagnosis of persistent a phthovirus infection and its differentiation from vaccination response in cattle by use of enzyme linked immunoelectrotransfer blot assay［J］.Arch Virol，2000，145：473-489.

［5］朱咏梅，朱来华，郑小龙，等.口蹄疫非结构蛋白研究进展［J］.中国动物检疫，2011，28（5）：83-86.

S852.65+1

B

0529-6005（2016）04-0068-02

2015-08-28

张改文（1958-），男，高级畜牧师，本科，主要从事动物疫病预防及疫情控制，E-mail：haowflijia@163.com