魏园园，顾贵波，申冠男，赵　培，李井春，王　冰，杨本勇

（辽宁省动物疫病预防控制中心 辽宁省动物医学研究院，辽宁 沈阳 110164）

高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗（J XA1-R株）免疫后病毒血症和抗体消长规律

魏园园，顾贵波，申冠男，赵培，李井春，王冰，杨本勇

（辽宁省动物疫病预防控制中心 辽宁省动物医学研究院，辽宁 沈阳 110164）

应用高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗（JXA1-R株）对28-30日龄的仔猪进行免疫，前8周每周采血，8周后每2周采血进行疫苗毒核酸检测和抗体水平检测，直至免疫后第16周。结果表明，高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗（JXA1-R株）在血清中存在的最长时间大约为6周；抗体从免疫后第2周开始转阳，至第3周时全部为阳性，并且抗体水平不断上升，至免疫后第10周时平均抗体水平达到最高。

仔猪；高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗（JXA1-R株）；免疫；存在时间

高致病性猪繁殖与呼吸综合征（High pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome，HP-PRRS）是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV）变异株引起的一种急性高致死性疫病。发病主要特征为怀孕母猪流产、早产、木乃伊胎等，母猪流产率可达30%以上；仔猪出现严重的呼吸道症状，感染率可达100%，死亡率在50%以上。目前我国使用的高致病性猪繁殖与呼吸综合征疫苗均为活疫苗，据报道活疫苗免疫后可在动物体内复制并持续存在。为摸清高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗免疫后在猪体内的存在时间，我们进行了本试验，报告如下。

1　材料与方法

1.1试验猪在某猪场选择28～30日龄、未进行高致病性猪繁殖与呼吸综合征免疫的健康仔猪20头，编号为A1～A20。

1.2疫苗高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗（JXA1-R株），中牧实业股份有限公司成都药械厂生产，批号：1302027-1。

1.3高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗（JXA1-R株）实时荧光RT-PCR检测试剂盒，购自北京世纪元亨动物防疫技术有限公司［1］，批号：JR20131106P。

1.4猪繁殖与呼吸综合征抗体检测试剂盒，购自北京天之泰生物科技有限公司，法国LSI公司生产。

1.5核酸提取试剂核酸提取试剂盒（磁珠法），购自西安天隆生物科技有限公司。

1.6试验器材eppendorf微量移液器，ABI 7500Fast荧光PCR仪，西安天隆生物科技有限公司，NP968核酸提取仪，伯乐iMark酶标仪。

1.7免疫注射按疫苗说明书提供的免疫剂量和注射部位对实验猪进行免疫注射。

1.8采血免疫后每隔1周采血1次，连续采8周；以后每隔2周采血1次，一直采到免疫后第16周。无菌分离血清，进行高致病性猪繁殖与呼吸综合征疫苗毒（JXA1-R株）核酸检测。

1.9高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗（JXA1-R株）核酸检测用荧光RT-PCR方法进行检测。

1.9.1核酸提取在96孔核酸提取板的第1及第7列孔中分别加入200 μL血清，10 μL Proteinase K，4 μL Acryl Carrier，然后将板放入核酸提取仪中，按说明书程序进行自动化提取。

1.9.2荧光PCR检测取2.5 μL模板RNA、6.6 μL DEPC水、13.9 μL RT-PCR反应液、1.0 μL酶混合液、1.0 μL荧光探针放入荧光PCR反应管中，总体积25 μL。在荧光PCR仪上按以下程序进行反应：42℃ 5 min，95℃ 10 s；95℃ 5 s，60℃35 s，45个循环，在每次循环第二步（60℃35 s）收集荧光信号。判定标准：Ct值≤38.0为阳性，Ct值＞38.0或无Ct值为阴性。

1.10猪繁殖与呼吸综合征抗体检测按试剂说明书的步骤和要求操作。阻断率（IRPC）大于20%为抗体阳性，阻断率越大，抗体水平越高。

2　结果与分析

2.1JXA1-R株疫苗核酸检测结果见表1。由表1可以看出，在免疫后1周时所有试验猪疫苗毒核酸均为阳性，阳性率100%，从免疫后第2周开始有1头猪疫苗毒核酸已经转阴，此后阳性率开始下降，至免疫后第6周时降为40%，至第7周时降为0%，并一直持续到试验结束时的免疫后第16周。表明，JXA1-R株高致病性猪繁殖与呼吸综合征疫苗毒的病毒血症时间最短为1周，最长为6周。

表1　血清中J XA1-R株疫苗毒核酸检测

试验中发现，有4头猪（A11、A12、A13、A19）疫苗毒核酸转阴后间隔1～3周又出现阳性情况，表现为间歇性带毒。

2.2猪繁殖与呼吸综合征抗体检测结果见表2。从表2可以看出，免疫前抗体均为阴性，免疫后1周时阳性率为25%（5/20），免疫后2周时阳性率70%（14/20），免疫后第3周时阳性率达到100%（20/20），一直持续至第5周，第6周时阳性率下降为80%（16/20），从第7周开始阳性率又上升为100%（10/10），并一直持续至第16周。从中插彩版图1中可以看出试验猪的抗体消长变化规律。试验猪的平均抗体阻断率也在不断上升，一直上升至免疫后第10周达到最高值91.4%后，开始慢慢下降。

表2　猪繁殖与呼吸综合征抗体检测

3　讨论

3.1从试验猪血清中高致病性猪繁殖与呼吸综合征疫苗毒（JXA1-R株）存在时间的变化规律可以看出，疫苗毒在不同猪群、不同猪个体中存在时间差异较大，最短的只存在1周，最长的可以达到免疫后第6周。即高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗（JXA1-R株）免疫后病毒血症持续时间为6周。

3.2本试验的抗体检测结果表明，高致病性猪繁殖与呼吸综合征疫苗毒（JXA1-R株）免疫后第2周抗体开始转阳，至第3周时全部为阳性，并且抗体水平不断上升，至免疫后第10周时平均抗体水平达到最高。但从图1中可以发现，不同猪群和不同猪只的抗体水平存在较大差异，并且抗体水平上升的过程并非是连续的，有的猪在上升过程中会有短暂的下降，这可能与疫病状况、生物安全水平、饲养管理水平等因素有关。

3.3试验猪中A11、A12、A13、A19号猪疫苗毒转阴后间隔1～3周又出现了转阳的情况，表现为间歇性携带疫苗毒，而从图1抗体变化曲线中可以看出，这4头猪的抗体在8周之前一直处于比较低的水平。因此笔者分析认为，间歇性携带疫苗毒现象的出现可能与个别猪只免疫抗体水平低有关。活疫苗免疫后刺激动物机体产生抗体，产生的抗体又不断的将活疫苗毒中和，所以在动物体内疫苗毒与抗体处于一种相互斗争的状态［1-2］。随着免疫时间的延长，抗体水平进一步提高，疫苗毒不断的被中和，以致无法被检测到，表现为病毒核酸检测结果为阴性。但是如果动物感染了某些疫病或饲养管理方面出现问题，将会直接影响机体的免疫系统功能，导致抗体水平较低，在与病毒的斗争中处于一种此消彼长和此长彼消的状态，表现为间歇性带毒［3］。

［1］魏津，蒋卉，戴志红，等.高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗（JXA1-R株）病毒含量荧光定量PCR方法的建立［J］.中国兽药杂志，2013，47（10）：39-42.

［2］黄名英，傅安静，刘平，等.高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒感染早期体内增殖规律调查［J］.畜牧与兽医，2013，45（2）：50-54.

［3］李明义，白志娟，王莉娟，等.猪瘟灭活疫苗抗体消长规律动态研究［J］.中国预防兽医学报，2005，27（5）：385-388.

S858.28

A

0529-6005（2016）04-0044-02

2014-10-27

辽宁省重大科技攻关项目（2011214001）

魏园园（1983-），女，助理兽医师，本科，主要从事动物疫病防控、检测、研究等工作，E-mail：21802661@qq.com

杨本勇，E-mail：benyong@tom.com