李前勇,，张德志，曹立亭，熊仲良，吴柏青，左福元

（1.西南大学荣昌校区动医系，重庆 荣昌 402460；2.重庆市动物疫病防控中心，重庆 渝北 401120；3.西南大学荣昌校区动科系，重庆 荣昌 402460）

重庆三峡库区肉牛结核病布鲁菌病的调查

李前勇1,，张德志1，曹立亭1，熊仲良2，吴柏青1，左福元3

（1.西南大学荣昌校区动医系，重庆 荣昌 402460；2.重庆市动物疫病防控中心，重庆 渝北 401120；3.西南大学荣昌校区动科系，重庆 荣昌 402460）

采用牛提纯结核菌素皮内变态反应结合γ-干扰素试验、虎红平板凝集试验、试管凝结试验及ELISA法分别对重庆三峡库区肉牛结核病、布鲁菌病进行了抽样检测。结果显示，该区域肉牛结核病阳性检出率为1.2%，布鲁菌病阳性检出率为1.04%。其中，库区东北部区县肉牛结核病、布鲁菌病的阳性检出率均为最高，分别为1.83%、1.14%；3种肉牛养殖规模条件下，个体散养农户牛群结核病、布鲁菌病的阳性检出率均为最高，分别为2.21%、2.94%；所调查的3个年龄段牛群中，19月龄以上牛群结核病、布鲁菌病的阳性检出率最高，分别为2.91%、4.85%。

重庆三峡库区；肉牛；结核病；布鲁菌病

牛结核病和布鲁菌病是由牛结核分枝杆菌（Mycobacterium bovis）、布鲁菌属细菌（Genus Brucella）所引起的两种重要人畜共患传染病，流行较广，在世界各地均有分布，对养牛业生产和人类健康均构成了严重威胁，是世界卫生组织（OIE）列为强制通报的疾病，我国列为B类动物疫病［1-3］。牛结核病、布鲁菌病在我国养牛业生产中较易发生，每年都有相关报道，但多偏向于奶牛，而对于肉牛结核病、布鲁菌病的报道却很少。我国是世界第4大养牛国，牛肉年产量达679.5万吨，近年来肉牛养殖发展势头较好［1］；重庆三峡库区位于我国西南肉牛主要产区，可利用草资源丰富，2001年市政府实施了草食牲畜百万工程项目，促进了该市肉牛养殖业的快速发展，据报道，2010年重庆市肉牛存栏量已达140余万头［2］，但尚未见我市肉牛结核病、布鲁菌病的调查报道。为此，我们于2012-2013年对重庆三峡库区肉牛结核、布鲁菌的感染情况进行了调查，以期为该区域肉牛结核病、布鲁菌病制定科学的防制对策提供依据。

1　材料与方法

1.1调查牛只以重庆三峡库区巫山、奉节、云阳、开县、万州、梁平、忠县、石柱、垫江、丰都、长寿、涪陵、渝北、巴南、江津等15区县肉牛为调查对象，按规模化牛场（存栏牛＞500头）、肉牛养殖专业户及个体散养农户3种养殖方式，丰都、云阳、石柱3个肉牛养殖优势区县各选择规模场2个、养殖专业户5个、散养农户5个，其余区县各选择养殖专业户5个、散养农户5个，按抽样比例5%确定调查牛只，共得1 249头牛只作为调查试验对象。

1.2试验试剂牛提纯结核菌素（哈药集团生物疫苗有限公司，批号：201007）；牛结核分枝杆菌γ-干扰素检测试剂盒（瑞士进口分装，北京测迪科技有限公司）；牛布鲁菌病阳性、阴性血清（中国兽医药品监察所，批号：201104）；虎红平板凝集诊断抗原、试管凝集诊断抗原（中国兽医药品监察所，批号：201110）；牛布鲁菌病ELISA检测试剂盒（美国IDEXX公司产品，P04130-2）。

1.3试验方法

1.3.1结核病的检测按照《动物结核病诊断技术（GB/T18645-2002）》，采用提纯结核菌素皮内变态反应对参试肉牛进行检测，依据国标规定进行阳性判断。对阳性病牛再用γ-干扰素试验［3］进行复检。

1.3.2布鲁菌病的检测依据《动物布鲁氏菌病诊断技术（GB/T 18646-2002）》，对参试肉牛先采用虎红平板凝集试验进行初筛，再用试管凝结试验对初筛阳性样本进行复检；对凝集试验呈现阳性、可疑样本运用酶联免疫吸附试验［4］进行最终检测。

2　结果

2.1重庆三峡库区肉牛结核病、布鲁菌病检出情况1 249头参试肉牛结核病分别采用提纯结核菌素皮内变态反应（PPD皮内注射试验）、γ-干扰素试验的检出情况，见表1。PPD皮内注射试验与γ-干扰素试验检出牛只的阳性符合率为78.95%。

表1　重庆三峡库区肉牛结核病调查结果

参试肉牛布鲁菌病分别采用血清虎红平板试验、试管凝集试验及酶联免疫吸附试验的检出情况，见表2。比较3种检测方法，试管凝集试验与虎红平板试验的阳性符合率为81.25%，酶联免疫吸附试验法与试管凝集试验法的阳性符合率为100%。

2.2不同饲养规模下，肉牛结核病、布鲁菌病阳性情况结果表明，不同饲养规模下，重庆三峡库区肉牛结核病、布鲁菌病的阳性检出率表现为散养农户牛群＞专业养殖户牛群＞规模化养殖场，见表3。

表2　重庆三峡库区肉牛布鲁菌病调查结果

表3　重庆三峡库区三种饲养规模下牛结核病、布鲁菌病调查结果

2.3不同年龄肉牛群结核病、布鲁菌病阳性情况结果表明，重庆三峡库区19月龄以上牛群结核病、布鲁菌病的阳性检出率均为最高，6月龄以下犊牛群所检两种病的阳性率最低，其中布鲁菌病阳性率为0。见表4。

表4　重庆三峡库区不同年龄肉牛结核病、布鲁菌病调查结果

2.4不同地理区域牛群结核病、布鲁菌病阳性情况对重庆三峡库区东北部（包括巫山、奉节、云阳、开县、万州、梁平）、库区中部（垫江、忠县、石柱、丰都、涪陵）及库区西南部（有江津、渝北、巴南、长寿）肉牛结核病、布鲁菌病调查结果进行比较，结果表明，库区东北部区县肉牛群结核病、布鲁菌病的阳性率为最高，库区西南部肉牛结核病未检出，但该区域布鲁菌病阳性却高于库区中部。见表5。

表5　重庆三峡库区不同区域牛群结核病、布鲁菌病调查结果

3　讨论

据记载，牛结核病于1955年在我国牛群中的检出率高达36.4%［5］，1952-1982年间，我国牛羊布鲁菌病的血清阳性率高约41.27%［6］。以后，我国兽医科技人员对上述两种疾病均有较多报道。重庆三峡库区是我国牛业生产的主要区域之一，进入21世纪以来，在市政府实施“草食牲畜百万工程”项目的带动下，库区肉牛养殖业进入了快速发展时期，截止目前，该区域年存栏肉牛已达到180万头，但尚未见肉牛结核病、布鲁菌病流行病学的报道。本试验对重庆三峡库区15区县肉牛群进行了牛结核病、布鲁菌病的随机抽样调查，结果表明，结核病的阳性检测率为1.2%，布鲁菌病的阳性检出率为1.04%。本调查结果比新疆［7］、青海湟中地区［8］、陕西［9］等我国养牛业优势省区奶牛结核病感染率的报道略高，但却显著低于郭开彬［5］对四川某县奶牛场结核病的阳性检出率（25.57%）、程振涛等［10］对贵州省某种牛场牛结核病感染率（9.32%）和布鲁菌病感染率（2.48%）的报道。我国《动物布鲁菌病控制技术规范》（NY/T907-2004）及《牛结核菌病防治技术规范》（2009）规定，牛鲁杆菌病省级控制标准为牛群布鲁菌病的阳性率应低于1.0%（试管凝结法）；牛结核病省级控制、净化标准为牛群的阳性率应低于0.05%（PPD法），由此说明，重庆三峡库区肉牛结核病、布鲁菌病的防控未达到国家规定的控制或净化标准。

我国动物结核菌病诊断技术（GB/T 18645-2002）规定，牛结核病的检测应使用牛结核分支杆菌PPD皮内变态反应试验进行。然而，采用牛结核分支杆菌PPD皮内变态反应试验检查牛结核病存在检出假阳性［12］，γ-干扰素试验法是一种新型的牛结核病诊断方法，已被OIE认定为惟一的辅助诊断试验，该法检测牛结核病具有特异性好、灵敏度高等优点［11］。本试验过程中，采用了γ-干扰素试验法对PPD法检出阳性牛进行再次检测，共剔除假阳性牛4头，PPD皮内注射试验与γ-干扰素试验检出牛只的阳性符合率为78.95%。这一结果与陈祥等［3］的报道基本一致。动物布鲁菌病诊断技术（GB/T 18646-2002）规定，牛布鲁菌病应使用虎红平板凝集结合试管凝集试验进行检测；但是，目前研究认为，这种方法存在特异性、敏感性不高的缺点［12］，牛布鲁菌病酶联免疫吸附试验检测法是OIE2002年列为用于牛布鲁菌病检测的一种新方法，该法具有快速、方便、特异、敏感等特点［4］，并有逐渐代替传统经典的虎红平板凝集试验和试管凝集试验的趋势。本研究在试验过程中，对试管凝集试验检测出的阳性牛血清样本，采用美国IDEXX公司出品的牛布鲁菌病ELISA检测试剂盒进行了再次检测，结果该法与试管凝集试验检查的阳性符合率为100%，这一结果与宫晓炜等［4］的报道一致。

对重庆三峡库区不同饲养规模、不同年龄、不同区域肉牛群牛结核病、布鲁菌病的检出情况进行分析，发现库区肉牛结核病、布鲁菌病阳性检出率均表现为散养农户牛群＞专业养殖户牛群＞规模化养殖场；19月龄以上牛群结核病、布鲁菌病的阳性检出率均为最高，6月龄以下犊牛群所检两种病的阳性率最低；库区东北部区县肉牛群结核病、布鲁菌病的阳性率均为最高，库区西南部肉牛结核病却未检出。造成这种现象的原因可能是库区属于高山地区，肉牛饲养个体农户分散，牛疫病防控知识传递不畅，开展结核病、布鲁菌病检测工作有实际困难；19月龄以上肉牛多为种牛和繁殖母牛，这些牛群经济价值高，即使过去表现检疫阳性，也因经济上的原因实行淘汰有困难，同时该牛群饲喂时间长，易与羊、猪等结核病、布鲁菌病易感动物接触，致使感染几率升高；库区东北部是重庆市的偏远山区，信息到达不畅，养牛户牛疫病防控意识淡薄，因而造成了该区域内牛群结核病、布鲁菌病的阳性检出率最高的局面。

本结果表明，重庆三峡库区肉牛群结核病、布鲁菌病的防控均未达到国家规定的控制或净化标准，并存在一定的疫病流行风险。建议当地应切实开展肉牛结核病、布鲁菌病的检疫，加大宣传力度，搞好活畜的市场监管，有效控制肉牛结核病、布鲁菌病的蔓延。

［1］曹宾海.我国的肉牛产业及其发展展望［J］.饲料与畜牧，2012，5：6-7.

［2］陈红跃，熊廷奎，左福元.重庆市肉牛产业发展现状分析与对策建议［J］.中国牛业科学，2010，3：31-33.

［3］陈祥，徐正中，时振华，等.γ—干扰素试验与皮试变态反应对检测奶牛结核病的比较［J］.中国人兽共患病学报，2011，27（2）：97-100.

［4］宫晓炜，邱昌庆，蔺国珍，等.牛布氏杆菌间接ELISA检测方法的建立［J］.中国兽医科学，2010，40（6）：598-602.

［5］郭开彬.奶牛结核病流行病学的调查研究［J］.草业与畜牧，2008，12：39-44.

［6］胡森，步志高.布氏杆菌病概括及其研究进展［J］.畜牧兽医科技信息，2003，12：9-11.

［7］李爱巧，赵建国，胡德江，等.乌鲁木齐市奶牛结核病流行病学调查与防治［J］.中国动物检疫，2012，29（10）：52-54.

［8］李海基，梅以赛，田生花，等.青海省湟中地区奶牛布病结核病感染情况调查［J］.养殖与饲料，2008，8：25-26.

［9］段旭基，张鹏，王波，等.陕西关中地区奶牛结核病调查［J］.中国动物检疫，2009，26（7）：50-52.

［10］程振涛，王开功，冯杰，等.4种牛主要传染病的血清学调查［J］.山地农业生物学报，2004，23（3）：220-223.

［11］蒋柏茂，李文平，刘从松，等.奶牛结核病实验诊断技术研究进展［J］.中国奶牛，2009，4：38-39.

［12］Nelsen K，Smith P，Yu W L，et al.Second generation competition enzyme immunoassay for detection of bovine antibody to Brucella abortus［J］.Vet.Microbiol，2007，24（12）：173-177.

Investigation of Tuberculosis and Brucellosis in Beef Cattlefrom ThreeGorges Reservoir of Chongqing

LI Qian-yong1，ZHANG De-zhi1，CAO Li-ting1，XIONG Zhong-liang2，WU Bai-qing1，ZUO Fu-yuan3
（1.The Department of Veterinary Medicine，Southwest University Rongchang Campus，Chongqing 402460，China；2.Center for Animal Disease Control and Prevent of Chongqing，Chongqing 401120，China；3.The Department of Animal Science，Southwest University Rong-chang Campus，Chongqing 402460，China）

Detection of tuberculosis and brucellosis in beef cattle from three gorges reservoir of Chongqing was performed by methods including bovine purified tuberculin intradermal allergic combine gamma-interferon test，rose bengal precipitation test，standard tube agglutination test，and ELISA.Our results showed that the positive rate of tuberculosis was 1.2%，and brucellosis was 1.04%.The positive rates of tuberculosis and brucellosis in beef cattle from northeastern counties in the reservoir area were higher than that of libraries in Central and Southwest，which were 1.83%and 1.14%，respectively.The tuberculosis and brucellosis positive rates in individual backyard farm-raised cattles were the highest，which were 2.21%and 2.94%，respectively.The positive rate in cattle older than 19 months was also the highest，which were 2.91%and 4.85%，respectively.

Three Gorges Reservoir of Chongqing；Beef Cattle；Tuberculosis；Brucellosis

S858.23

A

0529-6005（2016）04-0003-03

2015-03-02

国家科技支撑计划（2011BAD36B01）；重庆市科技支撑示范工程项目（jcsf121-2012-01-1）

李前勇（1966-），男，副教授，博士，研究方向为肉牛疾病防控，E-mail：qianyong_l@126.com