孟 伟，余洲海

（上海中医药大学附属曙光医院检验科，上海200021）

H型高血压患者血管紧张素转化酶基因多态性对其活性及血脂水平影响的探究

孟 伟，余洲海

（上海中医药大学附属曙光医院检验科，上海200021）

目的 探究H型高血压患者和普通高血压患者中不同基因型的血管紧张素转化酶的活性差异以及其对血脂水平的影响。方法 实验采用了聚合酶链式反应的方法，分别鉴定68例H型高血压患者和64例普通型高血压患者血管紧张素转化酶的基因型，并且对不同基因型的血管紧张素转化酶的活性和对应的血脂水平进行了检测。结果 利用SPSS19.0对数据进行分析，H型高血压和普通高血压患者的不同基因型的血管紧张素转化酶活性的差异均具有统计学意义（P＜0.01），但血管紧张素水平的差异无统计学意义。血管紧张素转化酶基因多态性对血脂水平影响的研究表明，H型高血压组中缺失型纯合子（DD型）与插入型杂合子（ID型）和插入型纯合子（II型）相比较，DD型血脂水平明显偏高，其中胆固醇（TC）（P＜0.01），高密度脂蛋白（HDLD），低密度脂蛋白（LDLC）和载脂B的水平的差异均具有统计学意义（P＜0.05）。普通高血压组仅HDLC，LDLC和载脂B的差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论 在H型高血压和普通型高血压患者中，血管紧张素转化酶的基因多态性与血管紧张素转化酶的活性及血脂含量有关。H型高血压患者的DD型的血管紧张素转化酶的活性最高，并且血脂水平偏高，其中胆固醇含量增高最为明显，更加容易患高血脂症。

H型高血压； 血管紧张素转化酶； 基因多态性； 血脂

H型高血压是伴有同型半光氨酸（homocysteine，Hcy）水平增高的的原发性高血压。美国疾病预防控制中心（CDC）疾控标准认为当Hcy水平≥10μmol/L者属于高Hcy［1］。现有研究表明，伴有Hcy水平增加的高血压患者与心血管疾病的发生具有一定的联系，较正常人高出25～30倍［2］。血管紧张素转化酶（angiotensin converting enzyme，ACE）是1954年由Leonard TS［3］博士首次在马血浆中发现，其基因位于染色体17q23，包括26个外显子和23个内含子，总长为21kb，编码区长4.3kb，根据第16内含子中287bp片段的存与否可分为缺失型纯合子（DD），插入型纯合子（II）和插入型杂合子（ID）［4］。血管紧张素转化酶对机体的血压和心血管功能起着重要的调节作用，主要是通过肾素血管紧张素系统（rein-angiotensin system，RAS）和激肽释放酶-激肽系统（kallikrein-kinin system，KKS）发挥作用［5］。近年来不少研究证明了血管紧张素转化酶对血脂具有一定影响［6］。本研究主要探究了H型高血压患者和普通高血压患者不同基因型的血管紧张素转化酶的活性及其对血脂水平的影响。

对象与方法

1 研究对象

H型高血压组68例，男性32例，女36例，平均年龄59.1±4.2岁；普通高血压组64例，男性30例，女性34例，平均年龄60.0±3.2岁，均为曙光医院的患者。两组在年龄和性别上的差异无统计学意义。高血压诊断均按照JNCⅦ标准，Hcy的检测按照美国疾病预防控制中心（CDC）的标准，所有服药者均停药2周以后进行检测。

2 实验方法

2.1 血清Hcy水平的检测 血清Hcy水平检测应用酶法使用BECKMAN AU5800全自动生化分析仪测定。Hcy试剂盒购于由北京九强生物技术有限公司，产品标准编号YZB/京0575-2008。空腹血清Hcy水平校正标准值为4.17～13.18μmol/L。

2.2 血管紧张素转化酶基因型的鉴定 抽取高血压组和正常人组的血液样本5mL，利用基因组NDA提取试剂盒（购于北京天根生化科技公司）对血液DNA进行提取。采用聚合酶链式反应的方法进行检测。正向引物为：5-’-CTG GAG ACC AAC TCC CAT CCT TTC ATT-3’反向引物为：5’-GAT GTG GCC ATC ACA TTC GTC AGA TTC-3’，引物由南京金斯瑞生物科技公司合成。PCR扩增反应完成后，产物经1.5%的琼脂糖凝胶进行电泳，基因条带为190pb的为缺失性纯合子，490pb的为插入型纯合子，190pb和490pb都有的为插入型杂合子。

2.3 不同基因型血管紧张素转化酶水平的检测 采用放射免疫分析法，利用试剂盒对ACE的水平进行检测，检测方法完全按照试剂盒说明进行操作，试剂盒购于上海生物工程有限公司。

2.4 不同基因型血管紧张素转化酶活性的检测 使用 BECKMAN AU5800全自动生化分析仪对血清中ACE的活性进行检测。血清中的ACE作用于ACE底物N-［3-（2-呋喃基）丙烯酰］-L-苯丙氨酰-甘氨酰-甘氨酸（FAPGG），FAPGG被水解成苯丙氟酞基（FAP）和双甘氨肤（GG），在波长340nm下。吸光度呈卜降反应均在一定范围内，吸光度下降的速率与标本中ACE酶活性成正比。速率法严格按试剂盒说明操作，试剂盒购自北京九强生物技术股份有限公司。

2.5 血脂水平的测定 空腹采血4mL，2h内分离血清。各指标检测仪器使用BECKMAN AU5800全自动生化分析仪。载脂蛋白AI、载脂蛋白B、脂蛋白（a）采用免疫透射比色法，购自上海申峰生物有限公司；血清甘油三酯（triglycerides，TG）为 GPO-PAP法，购自上海执诚生物有限公司；总胆固醇（total cholesterol，TC）为胆固醇氧化酶法，购自上海世诺生物有限公司；高密度脂蛋白，低密度脂蛋白为表面活性剂消除法，购自日本积水生物有限公司。

4 统计学方法

全部数据应用SPSS19.0软件进行统计分析，所有计数资料均以±s表示，两样本均数比较采用t检验，三样本（不同基因型血管紧张素转化酶的表达水平，酶活性以及各血脂指标）均数比较采用方差分析，以P＜0.05为差异具有统计学意义。

结 果

1 血清Hcy水平的检测

利用酶法检测了132例高血压患者血清Hcy的水平，其中68例 Hcy的水平偏高，64例 Hcy的水平正常，依据美国疾病预防控制中心（CDC）疾控标准即血清Hcy水平≥10μmol/L进行划分。

2 血管紧张素转化酶基因型的鉴定

利用聚合酶链式反应鉴定了高血压患者和正常人的基因型，三种基因型分布频率在高血压患者和正常人中的分布差异无统计学意义。见表1和图1。

表1 H高血压组和普通高血压组血管紧张素转化酶基因型的分布频率

3 血管紧张素转化酶水平的检测

利用试剂盒检测H型高血压患者和一般原发性高血压患者不同基因型血管紧张素转化酶的表达水平。结果显示两组患者不同基因型的血管紧张素转化酶表达水平差异没有统计学意义（P＞0.05）。见表2和图2。

表2 H型高血压患者和普通型高血压患者中三种基因型血管紧张素转化酶活性的比较

4 血管紧张素转化酶活性检测以及活性对比

利用血清酶试剂盒检测高血压和正常人中不同基因型的血管紧张素转化酶的活性，并利用SPSS 19.0对数据三种基因型血管紧张素转化酶的活性进行对比分析。结果显示，高血压组和正常人组中 DD型的血管紧张素转化酶的活性明显高于ID型和11型，差异具有统计学意义（P＜0.01）。ID型和II型的血管紧张素转化酶活性差异也具有统计学意义（P＜0.05）。见表3和图3。

表3 H型高血压患者和普通型高血压患者中三种基因型血管紧张素转化酶活性的比较

5 不同基因型血管紧张素转化酶血脂水平的比较

采用免疫比色法和双试剂酶法检测了高血压组和正常人组中不同基因型血管紧张素转化酶对应的血脂中各个组分的含量，并且采用SPSS19.0分别对普通高血压组和H型高血压组3种不同基因型的血脂水平进行q检验。结果显示，高血压患者中DDTC，HDLC和载脂B的含量较ID型和II型偏高，差异具有统计学意义（P＜0.05）。正常人中DD型HDLC和载脂B较ID型和DD型偏高，差异具有统计学意义（P＜0.05）。见表4。

表4 H型高血压患者和普通型高血压患者中不同基因型血管紧张素转化酶对应血脂水平的比较

讨 论

近年来，研究者们对血管紧张素转化酶的基因多态性对某些疾病的影响进行了一系列的研究［7］。Tiret等［8］的研究表明，ACE基因等位基因D与较高血清ACE活性相关，等位基因I与较低血清ACE活性相关。张赛丹等［6］在高血压患者中也发现了这一现象。本研究主要探究了ACE基因对H型高血压患者ACE活性，水平以及血脂的影响。H型高血压属于原发性高血压，相对于普通原发性高血压而言具有更多的危害［2］。Liu等［9］研究发现Hcy水平的增高是AS等心血管疾病的独立危险因素，同时脑卒的发生风险较一般人群高12倍。临床医学者有发现，血浆中Hcy的水平降低3μmol/L时，可使高血脂，心脏病等心血管疾病的风向明显降低［10］。本研究证明，不同基因型ACE在H型高血压患者和普通型高血压患者中具有不同的活性，DD型＞DI型＞II型，这基本与Gu等［11］的研究结果相似。同时对血脂水平影响的研究表明，H型高血压中DD型ACE对应的血脂各指标中，胆固醇的含量明显偏高，具有更高的患高血脂症的风险。

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［8］Tiret L，Rigat B，Visvikis S，et al.Evidence，from combined segregation and linkage analysis，that a variant of the angiotensin I-converting enzyme（ACE）gene controls plasma ACE levels.Am J Hun Genet，1992，51（1）：197-205.

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［10］Holmes M V，Newcombe P，Hubacek JA，et al.Effectmodification by population dietary folate on the association between MTHFR genotype，homocysteine，and stroke risk：ameta-analysis of genetic studies and randomized trials.Lancet，2011，378（9791）：584-594.

［11］Gu X X，Specpen M，Guo C，et al.Lack of association between the I/D polymorphism of the angiotensin-converting enzyme gene and essential hypertension in Belgian population.J Hum Hypertens，1994，8（9）：683-685.

（檀叶青编辑）

A Study the Effect of Angiotensin Converting Enzyme Gene Polymorphism on Activity of Angiotenisin Converting Enzyme and Blood Lipid Among the H-hypertension Patients

MENGWei，YU Zhou-hai
（Clinical Laboratory，Shuguang Hospital Affiliated to Shanghai University of Traditional Chinese Medicine，Shanghai200021，China）

Objective To explore the effect of Angiotensin Concerting Enzyme gene polymorphism on the activity of Angiotensin Concerting Enzyme and blood lipid levels in H-hypertension patients and common hypertension patients.M ethods Genotypes of angiotensin converting enzyme，using the polymerase chain reaction method，were identified in 68 cases of H-hypertensive patients and 64 cases common hypertension patients，and the activities of different genotypes of angiotensin-converting enzyme and corresponding lipid levels were detected.Results Data analysis with SPSS19.0 showed that the activity of different genotypes angiotensin in between H-hypertension patients and common hypertension patients were statistically different（P＜0.01），but there were no statistical differences in the levels of angiotensin.H-hypertension group with homozygous DD（deletion）genotype had a higher blood lipid level，w ich was statistically different than that with heterozygous ID genotype and insertion homozygotes（genotype II）.The lipids included cholesterol（TC）（P＜0.01），high-density lipoprotein（HDLD）（P＜0.05），low-density lipoprotein（LDLC）（P＜0.05）and apolipoprotein B（P＜0.05）.In common hypertension group，only HDLC，LDLC and apolipoprotein B showed statistical differences（P＜0.05）.Conclusion H-hypertension patients with DD genotype of the angiotensin converting enzyme showed higher enzyme activity，higher blood lipid levels and increased cholesterol levels.The study indicatedthis grouppatients might be more susceptible to hyperlipidemia.

H type hypertension； Angiotensin converting enzyme； Gene polymorphism； Serum lipid

10.11748/bjm y.issn.1006-1703.2016.06.003

2015-10-14；

2016-03-07