张绮纯，刘森林，李 燕，林建华

(广东省深圳市龙岗区环境监测站，广东 深圳 518172)



水中粪大肠菌群检测方法的研究

张绮纯，刘森林，李 燕，林建华

(广东省深圳市龙岗区环境监测站，广东 深圳 518172)

运用多管发酵法和滤膜法对水库水、自来水、井水粪大肠菌群进行了检测，结果表明：多管发酵法检测水样，过程耗时费力。滤膜法检测水样，过程快速简便。两种方法所得检测结果具有可比性，准确可靠。

粪大肠菌群；多管发酵法；滤膜法；比较研究

1　引言

粪大肠菌群系指在44 ℃下能生长并发酵乳糖产酸产气的一组微生物。2001年国家卫生部在《生活饮用水卫生标准》的基础上，重新修定颁布了《生活饮用水卫生规范》，新增加了粪大肠菌群为常规必检项目。主要以该菌群的检出情况来表示检样中是否有有机物污染。粪大肠菌群数的高低也预示了其对人体健康危害性的大小。

2　材料与方法

2.1材料

乳糖蛋白胨培养基、EC肉汤培养基、M-FC培养基、MilliflexPlusPump过滤器、MILLIPORE滤膜0.45 μm、灭菌蒸馏水、超净工作台、高压蒸汽灭菌器，恒温培养箱，恒温水浴箱，移液管、酒精灯、发酵管。采集的水库水、自来水、井水放入冰箱保存，5 h内送达实验室检测。

2.2方法

2.2.1多管发酵法

多管发酵法检测粪大肠菌群是指将待测水样按照3个不同的接种量，接种于乳糖蛋白胨培养液中培养，每个接种量5支发酵管，分为初发酵和复发酵两步进行。

初发酵试验：将水样充分混匀，水库水、自来水、井水样接种量分别是10 mL，1 mL和10-1mL，再分别接种到接种体积为10 mL盛有3倍浓度的乳糖蛋白胨培养液的发酵管中，接种量体积为1 mL或少于1 mL接种到普通浓度的乳糖蛋白胨培养液中，每个接种量样品各接种5只发酵管。将上述发酵管放入37±0.5 ℃培养箱中培养 24±2 h。若培养液由原来的紫色变为黄色，则证明产酸；若小倒管产生气泡，则说明产气，对各个管产酸产气阳性情况做好记录。

复发酵试验: 将初发酵试验阳性发酵管摇匀，用 3 mm接种环将培养物转接至EC培养液内。在44.5±0.5 ℃水浴中培养24±2 h，(水浴箱的水面应高于试管中培养基液面)，接种后所有EC培养液发酵管比需在30 min内放进水浴箱中，培养后立即观察，发酵管产气证实为粪大肠菌群阳性。

粪大肠菌结果，根据不同接种量发酵管所出现阳性管数，从粪大肠菌群数测定方法中的粪大肠菌群( MPN ) 检数表中查得相应的MPN指数，按粪大肠菌群计算方法计算每升水中粪大肠菌群的MPN值。

2.2.2滤膜法

用经过火焰消毒并冷却的镊子夹取一张过滤膜放在沙滤头上，注意滤膜网格朝上，再取出无菌的漏斗安装到底座上，从漏斗的上边缘按下漏斗使之牢靠的套在底座上。分别取水库水、自来水、井水样100 mL，50 mL和10 mL，将样品溶液倒入漏斗中，水样倒入后，按下Start键，设备即开始抽滤，过滤完成后，按下Start键自动进入Dry out(抽干)模式。该步骤完成后，取下滤杯，按下拨动杆，用灭过菌的镊子夹住滤膜边缘，将滤膜小心取下来，贴放在M-FC培养基内。

将培养皿紧密盖好后，在44.5±0.5 ℃ 恒温箱中培养 2 4±2 h。粪大肠菌群菌落在M-FC培养基上呈蓝色或蓝绿色，其他非粪大肠菌群菌落呈灰色、淡黄色或无色。计数呈蓝或蓝绿色的菌落，每1 L水样中的粪大肠菌群数公式：

粪大肠菌群菌落数(L)=滤膜上生长的粪大肠菌群数×1000/ 滤过的样品量(mL) 。

3　结果与分析

3.1精密度和准确度分析

精密度和准确度是可信性的基础。多管发酵法对不同水样中粪大肠菌群测定，不同水样相对标准偏差在0.0%-5.3%之间，属正常范围之内。使用埃希氏大肠杆菌(Escherichia coli)进行加标回收测定实验，回收率在85%-115%之间，表明准确度和精确度满足分析方法的要求。多管发酵法精密度及准确度、滤膜法精密度及准确度的实验结果见表1、表2。

表1　多管发酵法精密度及准确度实验结果

表2　滤膜法精密度及准确度实验结果

4　结论

(1)多管发酵法检测不受浊度和浓度的影响适用于任何条件水样的检测，重复间稳定性好，准确度、精密度和可信度高。但操作繁琐，工作量大，发酵时间长，初发酵和复发酵至少需要72 h。

(2)滤膜法检测较清洁的水样，再现性较好，准确度、精密度较高，精确快速提高工作效率是未来环境水质监测的发展方向。

(3)新检测技术的应用普及，不仅与操作技术的简易程度和精确度有关，也与检测设备和试剂的费用高低、对环境的影响等方面有关。随着分子生物学的发展及原理的运用，酶底物法、聚合酶链式反应技术、荧光原位杂交技术、自动化检测方法等检测技术将在未来结合传统的多管发酵法、滤膜法等传统方法，以提高监测能力。

[1]国家环境保护总局.水质粪大肠菌群的测定:HJ/T347-2007[S].北京：中国环境出版社,2007.

[2] 国家环境保护总局《水和废水监测分析方法》编委会.水和废水监测分析方法[M].北京：中国环境科学出版社，2002(10):704～705

[3]中国环境监测总站《环境水质监测质量保证手册》编写组.环境水质监测质量保证手册[M].北京：化学工业出版社，1994(8).

Research on Method of Detecting Fecal Coliform in Water

Zhang Qichun, Liu Senlin, Li Yan, Lin Jianhua

(LonggangDistrictEnvironmentalMonitoringStation,Shenzhen,Guangdong518172,China)

The multiple tube fermentation and membrane filter technique were used to detect the fecal coliform in the reservoir water, tap water and well water，and the testing results showed that: when we used multiple tube fermentation method to test water samples, the process was time-consuming. When we detected water samples using the membrane method, the process was quick and easy. The test results obtained from the two methods were comparable, accurate and reliable.

fecal coliform; multi-tube fermentation method; filter method; comparative study

2016-08-07

张绮纯(1977—)，女，工程师，主要从事环境监测工作。

X832

A

1674-9944(2016)16-0109-02