王红霞，廉 博

(呼伦贝尔市农业技术推广服务中心，内蒙古海拉尔 021008)



不同营养液配方对山葡萄幼苗生长的影响

王红霞，廉 博

(呼伦贝尔市农业技术推广服务中心，内蒙古海拉尔 021008)

[目的] 研究山葡萄嫩茎段愈伤组织离体培养最佳配方。[方法]以山葡萄优良母株新生枝条嫩梢为外植体，观察山葡萄在IAA和NAA不同浓度下芽的分化、继代与生根情况。[结果]在相同条件下，不同浓度IAA和NAA对山葡萄的芽分化、继代与生根影响显著。芽分化NAA浓度为0.05 mg/L的时候效果最好，愈伤组织中等，分化出的芽较多。继代IAA浓度为 0.10 mg/L的时候效果最好，生长旺盛，繁殖倍数较高。生根NAA浓度为 0.10 mg/L的时候效果最好，根粗壮，生根率高。[结论]该研究结果可为山葡萄离体培养奠定基础。

山葡萄；IAA；NAA；芽分化

山葡萄是葡萄科葡萄属落叶藤本植物，其含有丰富的碳水化合物、蛋白质、维生素和矿物质，生食可口，味酸甜，富含浆汁，是美味的山间野果[1]。山葡萄可作为葡萄酒酿造的原料，用其所酿的葡萄酒深红艳丽，风味品质甚佳。我国自20世纪50年代开始研究山葡萄人工驯化栽培并获得成功。山葡萄苗木常规的繁殖方法有嫁接繁殖、压条繁殖和扦插繁殖，但嫁接繁殖受接穗来源限制，压条繁殖系数低，扦插繁殖不易生根[2]。笔者拟采用组织培养的手段来繁殖和培育山葡萄[3-10]，筛选出适合的培养基，以期为山葡萄进一步快繁和大规模工厂化繁殖提供有效途径。

1　材料与方法

1.1材料以野生山葡萄为材料，取其优良母株新生枝条嫩梢作为外植体材料。

1.2方法

1.2.1外植体消毒。于2014年5月18日在中国农业大学农学院组培实验室对野生山葡萄优良母株新生枝条嫩梢进行愈伤组织诱导试验，先用清水洗去外植体表面的残留，再浸泡1～2 h，装到无菌瓶中，放到无菌工作台上，用70%酒精浸泡15 s，无菌水冲洗2～3次，用0.1%HgCl2进行表面消毒8～10 min，无菌水冲洗4～5次，在无菌条件下剥去鳞片与幼叶，切取0.3～0.5 m长的茎尖，接种于培养瓶中。

1.2.2培养条件。基本培养基为MS，加20 g/L蔗糖、720 g/L琼脂，pH 5.6～5.8，培养温度24 ℃，每日光照16 h，光强2 000 lx，湿度70%～80%。

1.3试验设计

1.3.1不定芽诱导培养。 该试验设4个处理：I.1/2 MS+6-BA 1.0 mg/L +NAA 0.010 mg/L +LH 100 mg/L；II.1/2 MS+6-BA 1.0 mg/L +NAA 0.005 mg/L +LH 100 mg/L；III.1/2 MS+6-BA 1.0 mg/L +NAA 0.020 mg/L +LH 100 mg/L；IV.1/2 MS+6-BA 1.0 mg/L +NAA 0.050 mg/L +LH 100 mg/L，每个处理重复3次，每次重复20瓶，每瓶接6个外植体。

为了促进愈伤组织的形成和芽分化，可将接种于培养基I～IV上的外植体先放置于黑暗中处理48～60 h，然后置于2 000 lx光照下，经35～40 d愈伤组织诱导出芽。

1.3.2继代培养。该试验设4个处理：V.1/2 MS+6-BA 0.5 mg/L +IAA 0.10 mg/L +GA 30.2 mg/L；VI.1/2 MS+6-BA 0.5 mg/L +IAA 0.05 mg/L +GA 30.2 mg/L；VII.1/2 MS+6-BA 0.5 mg/L +IAA 0.20 mg/L +GA 30.2 mg/L；VIII.1/2 MS+6-BA 0.5 mg/L +IAA 0.50 mg/L +GA 30.2 mg/L，每个处理重复3次，每次重复20瓶。将高5 cm以上的山葡萄试管苗切段(带1～2个侧芽)接种于继代培养基V～VIII上进行继代增殖。当芽分化较多时，会影响茎的伸长，成苗率会降低，此时宜先将丛生芽切下接种于继代培养基上，使其成苗后再进行切段培养。

1.3.3生根培养。选择NAA和IAA作为诱导生根的因素，该试验设5个处理：IX.1/2 MS+NAA 0.10 mg/L；X.1/2 MS+NAA 0.20 mg/L；XI.1/2 MS+NAA 0.05 mg/L；XII.1/2 MS+IAA 0.10 mg/L；XIII.1/2 MS+IAA 0.05 mg/L，每个处理重复3次，每次重复20瓶。

在继代培养中，切下茎段可接种于生根培养基IX～XIII上进行生根培养。

1.4调查指标及方法接种后，每隔5～8 d观察并统计愈伤组织分化情况，生根数、生根率、根生长等指标。

2　结果与分析

2.1芽分化情况由表1可知，接种于培养基IV上的茎尖，愈伤组织中等，平均分化出芽5.0个；接种于培养基I上的茎尖，愈伤组织较大，平均分化出芽0.5个；接种于培养基III上的茎尖，愈伤组织过大，平均分化出芽1.5个；接种于培养基II上的外植体形成愈伤组织很小，外植体启动困难，没有分化出芽。

表1不同营养液配方对芽分化的影响

Table 1Effects of different nutrient solution formulas on the bud differentiation ofV.amurensis

培养基Medi-um芽分化情况Buddifferentiation愈伤组织情况CallusI++ 较大II- 无 III+ 过大IV++++中等

注：- 没有生长；+生长缓慢；++生长较显著；++++生长旺盛。

Note：-，+，++，and ++++ mean not growing，growing slowly，growing obviously，and growing luxuriantly respectively.

2.2茎段增殖从生长情况看，接种于培养基V上茎段或芽生长快，且同时生出粗壮根系，根与茎同时生长，苗形态正常，生长健壮，繁殖系数可达3.5～4.0；接种于培养基VII上的茎段或芽也长出较多根系，生长情况较好；接种于培养基VIII上的茎段或芽生长较差，繁殖系数较低。

表2不同营养液配方对茎段生长情况的影响

Table 2Effects of different nutrient solution formulas on the growth ofV.amurensis

培养基Medium生长情况Growthstate繁殖系数ReproductioncoefficientV++++3.5～4.0VI+ 无VII+++ 2.0～3.0VIII++ 1.0～2.0

注：- 没有生长；+生长缓慢；++生长较显著；++++生长旺盛。

Note：-，+，++，and ++++ mean not growing，growing slowly，growing obviously，and growing luxuriantly respectively.

2.3生根情况从生根情况看，以接种于培养基X上的茎段生根最多，但根细长，试管苗移栽时不易成活；接种于培养基XI、XII和XIII上的茎段生根数较少，根细弱；接种于培养基IX上的茎段生根数适中，根粗壮，生根率也高，该培养基为最佳配方，即茎段生根以1/2 MS+NAA 0.10 mg/L为宜。

表3不同营养液配方对生根情况的影响

Table 3Effects of different nutrient solution formulas on the root growth ofV.amurensis

培养基Medium生根数Numberofroots∥条生根率Rootingrate∥%生长情况GrowthstateIX3～7100粗壮X10以上85细长XI2～575细长或粗壮XII2～370细、短XIII1～245细、短

3　结论

用茎尖组织培养方法进行山葡萄快速繁殖，可保持品种优良性状，缩短推广时间。在进行茎尖诱导时，6-BA单独使用效果要好。在1/2 MS+6-BA l.0 mg/L+NAA 0.050 mg/L+LH 100 mg/L培养基中，愈伤组织中等，分化出的芽较多。为了提高茎尖成活率，可适当将茎尖切至0.5～1.0 mm，但茎尖切取过大，繁殖系数会降低。继代培养以1/2 MS+6-BA 0.5 mg/L+IAA 0.10 mg/L+GA 30.2 mg/L(肌醇用量为50 mg/L)为宜，此时生长旺盛，繁殖系数较高。生根培养以1/2 MS+NAA 0.10 mg/L为宜，此时根粗壮，生根率高。继代培养和生根培养同时进行，这样可缩短试管苗培养时间，移栽易成活，繁殖系数一般很高。

[1] 高金辉，王玲，张厚良，等.山葡萄组织培养方法[J].东北林业大学学报，2007，35(7)：37-39.

[2] 王军，宋润刚.野生果树栽培及加工技术[M].北京：中国农业技术出版社，2001：13-14.

[3] 王军，葛玉香，包怡红.东北山葡萄品种特性比较[J].东北林业大学学报，2004，32(1)：29-31.

[4] 巩振辉，申书兴.植物组织培养[M].北京：化学工业出版社，2007：68-69.

[5] 崔鹏，高秀宇，李波，等.葡萄组织培养中愈伤组织的诱导[J].湖北农业科学，2012，51(4)：827-830.

[6] 冯敏.简化葡萄组培方法的探讨[J].甘肃农业科技，1992(4)：22-23.

[7] 顾沛雯，龚玉梅，关晓庆.葡萄茎尖培养及快速繁殖技术研究[J].中外葡萄与葡萄酒，2002(4)：16-18.

[8] 张炳华，张宏，孙连玉，等.葡萄组织培养快速繁殖的研究[J].烟台果树，1995(1)：11-12.

[9] 张剑侠，王贺飞，徐炎，等.中国野生葡萄组织培养研究[J].西北植物学报，2003，23(3)：460-461.

[10] 张建华，庄天明，孙占刚，等.华佳8号葡萄离体繁殖技术的研究[J].上海交通大学学报(农业科学版)，2004，22(3)：309-312.

Influences of Different Nutrient Solution Formulas on Seedling Growth ofVitisamurensisRupr.

WANG Hong-xia, LIAN Bo

(Hulunbeir Agricultural Technology Extension and Service Center, Hailar, Inner Mongolia 021008)

[Objective] To discuss the optimum formula for the in vitro culture of tender stem callus ofVitisamurensisRupr. [Method] Newborn branch tops of good maternal plants ofV.amurensiswere used as explants, and the bud differentiation, subculture and root growth ofV.amurensiswere analyzed under different concentrations of IAA and NAA. [Result] Under the same conditions, different concentrations of IAA and NAA had obvious effects on the bud differentiation, subculture and root growth ofV.amurensis. When NAA concentration was 0.05 mg/L, callus was moderate, and there were more buds. As IAA concentration was 0.10 mg/L, it grew well, and the breeding rate was high. When NAA concentration was 0.10 mg/L, its roots were thick, and the rooting rate was high. [Conclusion] The study can lay the foundation for the in vitro culture ofV.amurensis.

VitisamurensisRupr.; IAA; NAA; Bud differentiation

王红霞(1981-)，女，内蒙古乌兰察布人，农艺师，从事农业推广工作。

2016-05-09

S 663.1

A

0517-6611(2016)19-263-02