夏伟光　王胜林　陈　伟　阮　栋　王　爽FOUAD A M,2　林映才*　郑春田*

(1.广东省农业科学院动物科学研究所，畜禽育种国家重点实验室，农业部华南动物营养与饲料重点实验室，广东省动物育种与营养公共实验室，广东省畜禽育种与营养研究重点实验室，广州510640，中国；2.开罗大学农学院，动物生产系，吉萨12613，埃及)



饲粮叶酸添加水平对山麻鸭产蛋性能、蛋品质、生殖器官及血浆生殖激素指标的影响

夏伟光1王胜林1陈伟1阮栋1王爽1FOUAD A M1,2林映才1*郑春田1*

(1.广东省农业科学院动物科学研究所，畜禽育种国家重点实验室，农业部华南动物营养与饲料重点实验室，广东省动物育种与营养公共实验室，广东省畜禽育种与营养研究重点实验室，广州510640，中国；2.开罗大学农学院，动物生产系，吉萨12613，埃及)

摘要：本试验旨在研究饲粮叶酸(FA)添加水平对山麻鸭产蛋性能、蛋品质、生殖器官及血浆生殖激素指标的影响，以确定产蛋期(18～32周龄)山麻鸭FA的需要量。试验选用16周龄的山麻鸭360只，随机分成6个组，每个组5个重复，每个重复12只，单笼饲养。试验蛋鸭饲喂不添加FA的基础饲粮2周后，分别饲喂在基础饲粮中添加0、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0 mg/kg FA的试验饲粮，试验期15周。结果表明：1)饲粮FA添加水平对产蛋初期、产蛋高峰期和试验全期的蛋鸭产蛋性能指标无显著影响(P>0.05)。2)随着饲粮FA添加水平的提高，蛋壳相对重和蛋壳厚度先升高后下降，1.0 mg/kg FA添加组的蛋壳相对重显著高于其他组(P<0.05)。3)随着饲粮FA添加水平的提高，优势卵泡重、优势卵泡重/卵巢重先升高后降低，饲粮FA添加水平对优势卵泡重和优势卵泡重/卵巢重有显著影响(P<0.05)，以4.0mg/kg FA添加组最高。4)随着饲粮FA添加水平的提高，血浆孕酮浓度先升高后下降，其中2.0 mg/kg FA添加组血浆孕酮浓度最高；8.0 mg/kg FA添加组血浆促黄体生成素浓度显著高于其他各组(P<0.05)。由此可见，在玉米-豆粕型饲粮中添加FA在一定程度上有利于促进优势卵泡的发育，但未能显著影响山麻鸭的产蛋性能。仅考虑产蛋性能，玉米-豆粕型饲粮中不需添加FA；以蛋壳相对重和蛋壳厚度为评价指标，建议玉米-豆粕型饲粮FA适宜添加水平为1.0 mg/kg。

关键词：叶酸；山麻鸭；产蛋性能；蛋品质；生殖器官

叶酸(folic acid, FA)又名蝶酰谷氨酸，是动物生长过程中较为重要的一种水溶性维生素。FA以还原态的二氢叶酸和四氢叶酸的形式广泛存在于自然界中，而在动物肝脏和肾脏中表现出多种结构形式，包括5-甲基四氢叶酸、10-甲酰四氢叶酸、5-甲酰四氢叶酸、5,10-次甲酰基四氢叶酸、5,10-亚甲基四氢叶酸及亚胺甲基四氢叶酸。四氢叶酸的N5或N10，或者N5与N10一起可连接一碳基团，进而在动物机体新陈代谢过程中发挥其携带或提供一碳基团的生理作用，如合成嘌呤、脱氧胸苷酸和蛋氨酸，参与DNA的甲基化等。在饲养标准中FA的推荐使用量是动物在临床上不出现缺乏症的最低需要量，但是在生产中往往追求最大的动物生产成绩，因此使动物获得最佳生产成绩的FA适宜添加量一直是人们关注的焦点。葛文霞[1]在玉米-豆粕型饲粮中分别添加0、0.75、1.50、3.00 mg/kg FA，结果表明随着FA添加水平的提高，21日龄肉仔鸡血清免疫球蛋白G(IgG)含量也逐步提高，但0.75、1.50、3.00 mg/kg组间差异不显著。Abas等[2]的研究发现，在玉米-豆粕型饲粮中连续8周分别添加0、5、10 mg/kg FA能显著提高产蛋早期母鸡的蛋重，但5和10 mg/kg组未发现显著差异。Bunchasak等[3]的研究报道，在玉米-豆粕型饲粮中连续8周(64～72周龄)分别添加0、0.5、4.0、10.0 mg/kg FA对蛋鸡日产蛋重、产蛋率、蛋重及采食量均没有显著影响，但可不同程度地提高其血清和蛋的FA含量，其中4.0和10.0 mg/kg添加水平对血清FA含量的提高达显著水平，当FA添加水平大于或等于4.0 mg/kg时，血清和蛋中的FA含量差异不显著。孟苓凤等[4]根据鹅的生长性能回归分析获得鹅饲粮中育雏期FA添加水平为2.45 mg/kg，育成期添加水平为2.08 mg/kg。到目前为止，添加FA对家禽生产性能的研究在肉鸡、蛋鸡、鹅上已有相关报道，在蛋鸭方面尚未见报道。因此，本试验旨在通过研究玉米-豆粕型饲粮不同FA添加水平对产蛋期山麻鸭产蛋性能、蛋品质、生殖器官发育及血浆生殖激素指标的影响，并探讨产蛋期山麻鸭饲粮FA适宜的需要量，为生产实践中合理使用FA提供科学依据。

1材料与方法

1.1试验动物与饲养管理

选择健康、采食正常、起始体重无显著差异(P>0.05)的16周龄山麻鸭360只，随机分成6个组，每个组5个重复，每个重复12只试验鸭。试验蛋鸭全程采用2层不锈钢镀锌笼子(27.8 cm×40 cm×55 cm)进行单笼饲养，所有试验蛋鸭饲喂不添加FA的基础饲粮2周，随后按照分组分别饲喂在基础饲粮中添加0、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0 mg/kg FA的试验饲粮，试验期15周。在育雏期和育成期按常规免疫程序免疫接种鸭病毒性肝炎弱毒苗、传染性浆膜炎和禽流感疫苗。试验期间自由采食饮水，每日光照16 h(强度不少于15 lx/m2)，准确记录每天06：00、12：00和18：00的温度、湿度和天气情况。

1.2试验设计与饲粮组成

采用单因子随机试验设计，试验饲粮采用玉米-豆粕型基础饲粮，其营养水平参照本课题组前期的研究结果确定[5-10]，基础饲粮组成及营养水平见表1，其FA含量理论计算值为0.04 mg/kg。

表1　基础饲粮组成及营养水平(风干基础)Table 1　Composition and nutrient levels of the basal diet (air-dry basis)　%

1)预混料为每千克饲粮提供The premix provides the following per kg of diets: VA 8 000 IU，VD32 400 IU，VE 20 mg，VK32.5 mg，VB12 mg，VB26 mg，VB64 mg，VB120.02 mg，胆碱 choline 500 mg，烟酸 niacin 15 mg，D-泛酸钙D-calcium pantothenate 20 mg，生物素 biotin 0.2 mg，Cu 8 mg，Fe 50 mg，Mn 100 mg，Zn 90 mg，I 0.4 mg，Se 0.36 mg，Co 0.26 mg。

2)粗蛋白质为实测值，其余为计算值。CP is a measured value, while the others are calculated values.

1.3指标检测与方法

1.3.1产蛋性能

试验前期，根据前1 d采食情况调整饲粮添加量，每天每重复的投料量保持一致，在饲粮全部采食完的条件下尽量多喂，准确记录给料量和剩料量。当产蛋率达50%后，按145 g/(只/d)饲喂。以重复为单位，准确记录试验鸭产蛋数量、每日蛋重，统计产蛋期平均产蛋率、平均蛋重、日产蛋重和料蛋比。

1.3.2蛋组成和蛋品质

试验期间，每隔4周从各组每重复中采集3枚蛋，各批次蛋样在产蛋后48 h内分别完成其蛋壳重、蛋黄重、蛋清重以及蛋形指数、蛋壳厚度、蛋壳强度、蛋黄色泽和哈夫单位的测定。最后取各批次的蛋品质指标平均值进行统计分析。其中，蛋形指数采用游标卡尺(沪制01120028)量出其纵径和横径后计算其比值表示(蛋形指数=纵径/横径)；蛋壳厚度采用数显千分尺(MODEL-1061)测定其蛋壳钝端、中部和锐端蛋壳厚度，取其平均值表示；蛋壳强度、蛋黄颜色和哈夫单位分别采用ORKA蛋壳强度仪(EFR-01，以色列)和全自动蛋品分析仪(EMT-5200，以色列)进行测定。

1.3.3生殖器官

试验第15周，从每重复中随机选取2只试验鸭屠宰，取出卵巢后称重，计算卵巢指数(卵巢重量/试验鸭体重)，观察卵泡发育和卵巢形态，记录优势卵泡(成熟卵泡，充满卵黄，直径大于8 mm)数量和重量，直径为3～8 mm小黄卵泡数量，分别计算优势卵泡、小黄卵泡与卵巢重量的比值。测量输卵管长度和重量，计算输卵管长度指数(输卵管长度/试验鸭重量)和重量指数(输卵管重量/试验重量)。

1.3.4血浆生殖激素

在屠宰前1 d 18:00用抗凝真空采血管从试验鸭翅静脉采血5 mL，3 000 r/min离心15 min，制备血浆，分装于Ep管中，于-80 ℃冻存，采用放射免疫的方法测其促黄体生成素(luteinizing hormone, LH)和孕酮(progesterone，PG)浓度。

1.4数据处理与统计分析

试验数据采用SAS 9.0软件的GLM程序进行单因素方差分析，方差分析有显著效应时再进行Student-Newman-Keuls平均值多重比较分析，P<0.05为差异显著。

2结果

2.1饲粮FA添加水平对蛋鸭产蛋性能的影响

由表2可知，饲粮FA添加水平对产蛋初期、产蛋高峰期和试验全期的蛋鸭产蛋率、平均蛋重、日产蛋重和料蛋比均无显著影响(P>0.05)。

表2　饲粮FA添加水平对蛋鸭产蛋期产蛋性能的影响Table 2　Effects of dietary FA supplemental level on laying performance of laying ducks during laying period

续表2项目Items叶酸添加水平FAsupplementallevel/(mg/kg)00.51.02.04.08.0SEMP值P-value试验全期(20～32周龄)Thewholeexperimentalperiod(20to32weeksofage)平均日采食量ADFI/(g/d)145145145145145145产蛋率Eggproduction/%81.879.480.285.084.178.52.490.40平均蛋重Averageeggweight/g58.057.858.658.957.758.30.440.36日产蛋重Eggmass/(g/d)47.646.147.250.448.746.01.470.32料蛋比Feed/egg3.063.173.082.882.983.190.100.31

同行数据肩标相邻字母表示差异显著(P<0.05)，相同字母或无字母表示差异不显著(P>0.05)。下表同。

In the same row, values with the adjacent letter superscripts mean significant difference (P<0.05), while with the same or no letter superscripts mean no significant difference (P>0.05). The same as below.

2.2饲粮FA添加水平对鸭蛋组成和蛋品质的影响

由表3可知，随着饲粮FA添加水平的提高，蛋壳相对重和蛋壳厚度先升高后下降，1.0 mg/kg FA添加组的蛋壳相对重显著高于其他组(P<0.05)，蛋壳厚度著高于0.5 mg/kg FA添加组(P<0.05)。饲粮FA添加水平对鸭蛋的蛋黄相对重、蛋白相对重、蛋形指数、蛋壳强度、蛋黄颜色和哈氏单位均没有显著影响(P>0.05)。

表3　饲粮FA添加水平对鸭蛋组成和蛋品质的影响Table 3　Effects of dietary FA supplemental level on egg composition and egg quality of laying ducks

2.3饲粮FA添加水平对蛋鸭生殖器官的影响

由表4可知，随着饲粮FA添加水平的提高，优势卵泡重、优势卵泡重/卵巢重相呈先升高后降低规律，饲粮FA添加水平对优势卵泡重和优势卵泡重/卵巢重有显著影响(P<0.05)，以4.0 mg/kg FA添加组最高。

2.4饲粮FA添加水平对蛋鸭血浆LH和PG浓度的影响

由表5可知，随着饲粮FA添加水平的提高，血浆PG浓度先升高后下降，其中2.0 mg/kg FA添加组PG浓度最高。8.0 mg/kg FA添加组LH浓度显著高于其他各组(P<0.05)。

3讨论

3.1饲粮FA添加水平对蛋鸭产蛋性能的影响

自然界中，FA以还原态的二氢叶酸和四氢叶酸的形式广泛存在于深绿色牧草、蔬菜、草籽、苜蓿草粉等青绿饲料中。作为一种重要的水溶性维生素，越来越多的研究证实FA对蛋禽的产蛋性能具有一定的调控作用，但其作用效果因动物、饲粮、处理时间等因素的不同而有所差异。Jing等[11]研究发现，在小麦-豆粕型饲粮中添加4 mg/kg FA饲喂蛋鸡8周显著提高了其蛋重和日产蛋重。Hebert等[12]研究表明，在大麦-豆粕型饲粮中添加不同水平(0、2、4、8、16、32、64、128 mg/kg)的FA饲喂蛋鸡21 d对其产蛋率、采食量、蛋重以及料蛋比均没有显著影响。Tactacan等[13]在小麦-豆粕型饲粮中分别添加10和100 mg/kg FA饲喂蛋鸡21 d，结果发现添加10和100 mg/kg FA对蛋鸡的平均日采食量、产蛋率、蛋重、产蛋量均没有显著的影响，但可显著提高血清和蛋中的FA含量。这与本试验研究发现类似，在玉米-豆粕型饲粮中分别添加0、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0 mg/kg FA对蛋鸭产蛋率、平均蛋重、日产蛋重和料蛋比均无显著影响。

表4　饲粮FA添加水平对蛋鸭生殖器官指标的影响Table 4　Effects of dietary FA supplemental level on reproductive organ indices of laying ducks

表5　饲粮FA添加水平对蛋鸭血浆LH和PG浓度的影响Table 5　Effects of dietary FA supplemental level on plasma LH and progesterone concentration of laying ducks

3.2饲粮FA添加水平对鸭蛋组成和蛋品质的影响

一般情况下，蛋质量的衡量包括蛋组成和蛋品质指标。蛋组成指标主要包括蛋白、蛋黄和蛋壳的重量及其相对重量，蛋品质指标主要有蛋形指数、蛋壳厚度、蛋壳强度、哈氏单位、蛋黄色泽。其中哈氏单位主要受浓蛋白含量及黏度的影响，是衡量蛋新鲜度的重要指标之一。蛋存放的时间越长，气孔越大，蛋内的水分增发越多，其比重越小。因此蛋的新鲜度也可以利用比重范围为1.058～1.112的盐溶液(以0.004的梯度递增)，通过盐水漂浮法检测蛋比重来进行评定[14]，其中蛋比重1.080以上为新鲜蛋，1.060以上为次鲜蛋，1.050以上为陈次蛋，1.050以下为变质蛋[15]。根据前期试验发现，产蛋后48 h内蛋的比重为1.083～1.092，因此本试验蛋组成及蛋品质指标检测均在产蛋后48 h内完成。本试验研究发现，饲粮中添加不同水平的FA对鸭蛋的哈氏单位无显著影响。Stern等[16]研究发现，缺乏FA会使得血浆同型半胱氨酸的浓度上升，而同型半胱氨酸通过影响激素如皮质醇、生长激素以及胰岛素样生长因子的水平或磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白信号转导途径对蛋白质降解起着重要作用。反之，补充FA可降低血浆同型半胱氨酸的浓度[12]，有利于促进蛋白的合成。本研究发现，在饲粮中添加不同水平的FA对鸭蛋蛋白相对重没有显著影响，但1.0 mg/kg FA添加水平显著提高了其蛋壳相对重，且获得较高的蛋壳厚度。在蛋壳形成的过程中碳酸钙晶体和蛋壳基质蛋白相互作用，嵌合形成具有一定厚度和强度的蛋壳。这提示，在饲粮中添加1.0 mg/kg FA可能有利于蛋壳基质蛋白的合成，其调控机制还需进行深入的探讨。此外，本试验研究发现，在玉米-豆粕型饲粮中添加不同水平的FA对鸭蛋蛋黄色泽未见显著差异。石天虹等[17]在蛋鸭玉米-豆粕型饲粮中添加5 mg/kg FA也未发现其对鸭蛋蛋黄色泽有显著的改善作用。蛋禽本身不能合成色素，蛋黄的色泽主要受从饲粮中摄取的脂溶性色素种类和数量的影响[18]。这表明，在玉米-豆粕型饲粮中添加FA并不影响脂溶性色素在蛋黄的沉积。

3.3饲粮FA添加水平对蛋鸭生殖器官及内分泌的影响

研究表明，生殖轴的内分泌激素可以影响卵巢和输卵管的发育[19-20]，并且饲粮营养水平和饲养时间均可通过影响生殖激素的分泌来调控生殖器官的发育[21-22]。早期研究表明缺乏FA会降低性激素的分泌来抑制输卵管氨基酸的组成及其发育[23]。本试验研究发现，饲粮中添加4.0 mg/kg FA可获得较高的优势卵泡重和优势卵泡重/卵巢重，但与2.0、4.0和8.0 mg/kg FA添加组相比差异不显著。Yang等[24]研究表明，血浆的生殖激素水平是一个连续的动态变化过程，LH和PG是促进蛋鸭排卵较为关键的2种激素。血浆PG由排卵前最大的优势卵泡分泌，其浓度峰值出现在排卵前4～6 h，而血浆LH浓度在PG浓度峰值出现后达到最高[25]。因此，我们通过检测蛋鸭血浆LH和PG的浓度，发现2.0 mg/kg FA添加组与未添加FA组相比显著提高了蛋鸭血浆PG浓度，与其他FA添加水平组相比差异不显著；8.0 mg/kg FA添加组的血浆LH浓度显著高于其他各组。卵泡的发育和成熟是一个复杂的多因素调控过程，除内分泌因子以外，生长因子和细胞因子等均起着关键性作用。因此，饲粮FA添加水平显著提高了优势卵泡重和优势卵泡重/卵巢重可能是通过除内分泌激素PG和LH以外的其他生长因子或细胞因子介导的途径所致，FA对卵泡成熟的作用机制还有待深入研究。

4结论

在玉米-豆粕型饲粮中添加FA在一定程度上有利于促进优势卵泡的发育，但未能显著影响山麻鸭的产蛋性能。以蛋壳相对重和蛋壳厚度为评价指标，建议玉米-豆粕型饲粮FA适宜添加水平为1.0 mg/kg。

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(责任编辑武海龙)

doi：10.3969/j.issn.1006-267x.2016.07.007

收稿日期：2016-01-11

基金项目：国家水禽产业技术体系(CARS-43-13)；广东省科技计划项目(2011A020102009)；广东省自然科学基金博士启动项目(2014A030310054)；广东省农业科学院院长基金项目(201521)

作者简介：夏伟光(1985—)，男，广东清远人，博士，从事水禽营养与饲料资源利用技术的研究。E-mail: harry_xch@sina.com *通信作者：林映才，研究员，E-mail： lyc0123@viptom.com；郑春田，研究员，硕士生导师，E-mail: zhengcht@163.com

中图分类号：S834

文献标识码：A

文章编号：1006-267X(2016)07-2024-08

*Corresponding authors: LIN Yingcai, professor, E-mail: lyc0123@viptom.com; ZHENG Chuntian, professor, zhengcht@163.com

Effects of Dietary Folic Acid Supplemental Level on Laying Performance, Egg Quality, Reproductive Organ and Plasma Reproductive Hormone Indices ofShanmaLaying Ducks

XIA Weiguang1WANG Shenglin1CHEN Wei1RUAN Dong1WANG Shuang1FOUAD A M1, 2LIN Yingcai1*ZHENG Chuntian1*

(1.Institute of Animal Science, Guangdong Academy of Agricultural Sciences, State Key Laboratory of Livestock and Poultry Breeding, Key Laboratory of Animal Nutrition and Feed Science in South China, Ministry of Agriculture, Guangdong Public Laboratory of Animal Breeding and Nutrition,Guangdong Key Laboratory of Animal Breeding and Nutrition, Guangzhou 510640, China;2. Department of Animal Production, Faculty of Agriculture,Cairo University, Giza 12613, Egypt)

Abstract:This experiment was conducted to study the effects of dietary folic acid (FA) supplemental level on laying performance, egg quality, reproductive organ and plasma reproductive hormone indices of shanma laying ducks, and to estimate dietary FA requirement for Shanma laying ducks in laying period from 18 to 32 weeks of age. A total of 360 Shanma laying ducks at 16 weeks of age were randomly allotted to 5 groups, each with 5 replicates of 12 birds. All birds were offered a basal diet without FA supplementation for 2 weeks. Then birds were fed the experimental diets supplemented with 0, 0.5, 1.0, 2.0, 4.0 and 8.0 mg/kg FA, respectively. The experiment lasted for 15 weeks. The results showed as follows: 1) in the early laying period, peak laying period and the whole experimental period, dietary FA supplemental level had no significant effect on laying performance indices of laying ducks (P>0.05). 2) Eggshell relative weight and thickness were firstly increased and then decreased with dietary FA supplemental level increasing, and the eggshell relative weight of 1.0 mg/kg FA group was significantly higher than that of other groups (P<0.05). 3) Large yellow follicle (LYF) weight and LYF weight/ovarian weight were firstly increased and then decreased with dietary FA supplemental level increasing, and the maximal value was at the level of 4.0 mg/kg (P<0.05). 4) Plasma concentration of progesterone was firstly increased and then decreased with dietary FA supplemental level increasing, and the maximal value was at the level of 2.0 mg/kg (P<0.05). Luteinizing hormone concentration of 8.0 mg/kg FA group was significantly higher than that of other groups (P<0.05). In conclusion, FA supplementation in corn-soybean meal basal diet is beneficial to improving the development of LYF, but do not affect laying performance of Shanma laying ducks. Only considering laying performance of Shanma laying ducks, it is not necessary to supplement with FA in corn-soybean meal basal diet, but based on eggshell relative weight and thickness, the optimal FA supplementation for Shanma laying ducks in laying period from 18 to 32 weeks of age is 1.0 mg/kg.[Chinese Journal of Animal Nutrition, 2016, 28(7)：2024-2031]

Key words:folic acid; Shanma ducks; laying performance; egg quality; reproductive organ