谭　霖，杨　鑫，龙　滢，徐秋萍

(黔东南州食品药品检验检测中心，贵州　凯里　556000)



黔东南州产绞股蓝芦丁含量的研究

谭霖，杨鑫，龙滢，徐秋萍

(黔东南州食品药品检验检测中心，贵州凯里556000)

摘要：采用高效液相色谱法测定黔东南州不同产地绞股蓝中芦丁的含量。色谱柱(Diamonsil C18，5 μl，150×4.6 mm迪马公司生产)，流动相：甲醇-1 %冰醋酸(40∶60)，检测波长：257 nm，柱温：30 ℃，流速：1.0 ml / min；以芦丁为含测指标测定绞股蓝中芦丁含量。绞股蓝中芦丁在0.204 892 μg～1.229 352 μg范围内呈良好的线性关系，回归方程y=2 205.5x+25.711，R2=0.999 5 ，平均加样回收率为103.07 %，RSD %为1.7 %。不同产地绞股蓝中芦丁含量在1.152 8～1.433 2 mg / g之间。黔东南州不同产地绞股蓝中芦丁含量的差异不大。

关键词：黔东南州产绞股蓝，芦丁，高效液相色谱法

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绞股蓝Gynostemma pentaphyllum(Thumb.)Makino 为葫芦科绞股蓝属植物，又名七叶胆、五叶参、七叶参等。多年生草质藤本，蔓生，茎细弱、分枝，具纵棱及沟，被短柔毛；叶互生，膜质，鸟足状，具3-9枚小叶，通常5-7叶；卷须纤细，2岐，稀单一；根系分布浅，一般集中于表土150 mm以内；花雌雄异株，圆锥花序，雌花圆锥花序远较雄花短小；子房球形，2-3室，花柱3枚；浆果，种子卵状心形，深褐色，2-3粒[1]。全草入药味苦、寒、归肺、肝、脾经。绞股蓝性寒，味甘苦，无毒，入肺、脾、心、肾经，长于补气养阴，清肺化痰，养心安神。绞股蓝含有多种药用成分：皂苷、黄酮、多糖、氨基酸、植物蛋白、甾体、色素、有机酸、纤维素、叶绿素、木质素、微量元素等[2]。研究表明，绞股蓝活性成分具有降血脂、降血糖、调血压、延缓衰老、预防冠心病、抑制癌细胞、调节人体生理机能、增强机体免疫力等功能，被誉为“人间仙草”[3]。绞股蓝对生长条件要求低，周期短，易于人工栽培，产量大。目前，以绞股蓝为主要原料开发出的各种保健饮料、医用制剂等不断增多，品种繁多，深受人们喜爱。本实验通过建立HPLC法测定黔东南州不同产地绞股蓝芦丁的含量，研究得出黔东南州地区产地绞股蓝芦丁的含量范围，为绞股蓝的进一步研究提供了一定的参考依据。

1材料与方法

1.1试验材料

仪器：安捷伦1260高效液相色谱仪、G1311C输液泵、G1316A柱温箱、G1329B自动进样器、DAD检测器(G1315D)、工作站(Chem Station foy LC systems)；色谱柱Waters Symmetry C-18(5 μm 4.6×150 mm)；KQ-500DA型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；SHZ-DⅢ型循环水式真空泵(常州普天仪器制造有限公司)； 二两装高速中药粉碎机(瑞安市永历制造有限公司)；电子天平(梅特勒AE240)。

试剂：甲醇(色谱纯)；醋酸(色谱纯)；水为超纯水；甲醇(分析纯)。

供试品：绞股蓝6各批次分别产于贵州省施秉县、雷山县、台江县为各两批。

对照品：芦丁(中国药品生物制品检定所提供，批号为：100080-200707、含量90.5 %)

1.2试验方法

1.2.1溶剂考察

精密称取绞股蓝粉末(过4号筛)约1.0 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别精密加入25 ml甲醇、乙醇、50 %甲醇、50 %乙醇，称定重量，密塞，再分别超声处理(功率250 W，频率25 kHz)30 min、20 min、15 min，放冷，再称定重量，分别补足减失的重量，摇匀，滤过，续滤液用0.45 μm微孔滤膜滤过，精密吸取10 μL注入高效液相色谱仪中分析20 min，结果甲醇超声提取30 min的溶液成分较多效果好。

1.2.2流动相的考察

本实验经过对不同甲醇-1 %冰醋酸比例流动相进行考查，流动相甲醇-1 %冰醋酸(30∶70)进行测定时，其保留时间为26 min左右，对流动相甲醇-1 %冰醋酸(50∶50)进行测定时，其保留时间为4 min左右，对流动相甲醇-1 %冰醋酸(40∶60)进行测定时，其保留时间为12 min左右，峰型较好，样品图谱的分离也较好，结果流动相甲醇-1 %冰醋酸(40∶60)时效果最好见图1。

图1　流动相甲醇-1 %冰醋酸(40∶60)

1.2.3检测波长的确定

取芦丁对照品和供试液于紫外光区扫描，结果得在检测波长为257 nm试对照品有最大吸收，供试液在257 nm波长处也有最大吸收且效果好，故选择257 nm为检测波长。

1.2.4色谱柱的考查

本实验对Dikma C-18(5 μm 4.6×250 mm)，Dikma C-18(5 μm 4.6×150 mm)，Waters Symmetry C-18(5 μm 4.6×150 mm)，Thermo C-18(5 μm 4.6×250 mm)色谱柱进行了考查，结果Waters Symmetry C-18(5 μm 4.6×150 mm)效果较好，出峰时间理想。

2方法建立

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-1 %冰醋酸(40∶60)为流动相；流速1.0 ml / min；进样量为10 μL；检测波长为257 nm；柱温为30 ℃；理论塔板数按芦丁峰计应不低于2 000。

2.1对照品溶液的制备

精密称取芦丁对照品0.011 32 g于100 ml容量瓶中用甲醇定容至刻度，得0.102 446 mg / ml芦丁标准品溶液。

2.2绞股蓝供试品溶液的制备

精密称取绞股蓝粉末(过4号筛)约1.0 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 ml，称定重量，密塞，超声处理(功率250 W，频率25 kHz)30 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，续滤液用0.45 μm微孔滤膜滤过，即得供试品溶液。

测定法分别精密吸取上述供试品溶液10 μL，注入液相色谱仪，测定峰面积，计算芦丁的含量。

2.3标准曲线的制备及线性范围的考察

精密吸取2.1.3芦丁对照品溶液2、4、6、8、10、12 μL，按上述2.1.1色谱条件项测定峰面积，以芦丁进样质量为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程y=2 205.5x+25.711，相关系数r=0.999 5，线性考察见图2。

图2　芦丁标准曲线图

2.4稳定性考察

精密称取绞股蓝粉末(过4号筛)约1.0 g，精密称定，按色谱条件项下条件，按2.2供试品溶液的制备项下方法制备，分别于0 h、2 h、4 h、8 h、12 h、24 h对芦丁进行测定。测定结果见表1。

表1　稳定性考察表

由上述测定结果表明，供试品溶液在24 h内比较稳定。

2.5精密度考察

精密称取绞股蓝粉末(过4号筛)约1.0 g，精密称定，按色谱条件项下条件，按2.2供试品溶液的制备项下方法制备，连续进样6次对供试品进行测定。测定结果见表2。

表2　精密度考察表

由上述测定结果表明，仪器精密度良好。

2.6重现性考察

精密称取绞股蓝粉末(过4号筛)约1.0 g，精密称定，按色谱条件项下条件，按2.2供试品溶液的制备项下方法，制备6个样品，每个样品进3针，对芦丁进行测定。测定结果见表3。

表3　重现性考察表

由上述结果表明，此测定方法的重现性良好。

3黔东南州不同产地样品的测定

不同批次绞股蓝供试样品的含量测定精密称取绞股蓝药材粉末(过4号筛)2份，按照色谱条件及2.2供试品溶液制备方法对芦丁进行测定。测定结果见图3、表4。

图3　黔东南州不同产地样品的测定图谱

样品名称平均峰面积芦丁含量/mg/gRSD/%施秉11064.71.18140.29施秉21038.81.15280.21雷山11165.51.29290.32雷山21178.71.30770.16台江11285.21.42620.02台江21291.91.43320.08

由上述测定结果表明，黔东南州3个不同产地6个不同批次绞股蓝药材中芦丁的含量有一定差异，但相差不大范围在1.152 8～1.433 2 mg / g之间。

4结果与讨论

通过研究建立了一可靠稳定的高效液相色谱含量检测方法，对黔东南州3个不同产地6个不同批次绞股蓝药材中的芦丁进行含量测定，得出各产地各批次药材中芦丁含量不同，其中台江产绞股蓝中芦丁含量最高，雷山产绞股蓝其次，施秉产绞股蓝芦丁含量最少。结果表明黔东南州地区产绞股蓝药材中芦丁的含量有一定差异，但相差不大范围在1.152 8～1.433 2 mg / g之间。其中同一产地不同批次绞股蓝药材中芦丁的含量差异较小。采收时间与加工处理对药材的含量都有一定的影响，总的来说本次实验为黔东南州产绞股蓝的含量与绞股蓝中芦丁成分的检测方法提供一定的依据。

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收稿日期：2016-04-13；修回日期：2016-04-16

作者简介：谭霖，男，苗族，贵州省天柱县人，本科，就职于黔东南州食品药品检验检测中心。研究领域：中药学。研究方向：中药材质量。

中图分类号：R284.1

文献标识码：A

文章编号：1003-6563(2016)03-0066-04

Research of rutin content from gynostemma in Qiandongnan

TAN Lin，YANG Xin，LONG Ying，XU Qiuping

(Qiandongnanfoodanddruginspectiontestingcenter，Carey556000，China)

Abstract：By using high performance liquid chromatography(HPLC)method，the content of rutin from different origin gynostemma is determined in qiandongnan，chromatographic column(Diamonsil C18，5 mu l，150×4.6 mm made in di company)，mobile phase：methanol -1 % glacial acetic acid(40∶60)，detection wavelength：257 nm，column temperature：30 ℃，the flow rate：1.0 ml / min.As the rutin index，the content of rutin in gynostemm is determined.The rutin in gynostemma in the range of 0.204 892 μg ～ 1.229 352 μg has a good linear relationship，and the regression equation is y= 2 205.5+25.711x，R2 = 0.999 5.The average sample recovery rate is 103.07 %，and the RSD % is 1.7 %.The Rutin content in gynostemma in different regions is 1.1530 mg / g ～ 1.433 7 mg / g.The difference of the rutin content in different origin gynostemma of Qiandongnan prefecture is not big.

Keywords：Qiandongnan gynostemma production，Rutin，high performance liquid chromatography