陕西省人民医院心血管内三科(西安 710061)

杨禹娟△　张伟靖　邢　坤　田　刚△▲



外周血microRNA-155-5p的表达与急性冠脉综合征相关性研究*

陕西省人民医院心血管内三科(西安 710061)

杨禹娟△张伟靖邢坤田刚△▲

摘要目的：探讨ACS患者外周血中miRNA-155-5p的水平及其与冠脉病变严重程度的关系。方法：收集ACS患者45例，其中不稳定性心绞痛(UAP)、非ST段抬高型心肌梗死(NSTEMI)和ST段抬高型心肌梗死(STEMI)各15例，收集同期行选择性冠脉造影术示正常者15例作为对照组；根据美国心脏病协会规定的冠脉血管图像分段评价标准和Gensini 积分系统对冠状动脉病变严重程度进行定量分析；用Real-time PCR法检测miRNA-155-5p的水平。结果：与健康对照组比较，UAP组、STEMI组、NSTEMI组血液中miR-155-5p 的相对表达量显著下降(P<0.05)。采用Spearman 秩相关检验，miRNA-155-5p的表达与Gensini 评分成负相关(r=-0.678，P=0.000)。 结论：ACS患者外周血中miRNA-155-5p的水平明显低于正常对照组，miRNA-155-5p的表达与冠脉病变严重程度呈负相关。

主题词心绞痛，不稳定性/诊断心绞痛，不稳定性/血液@microRNA-155-5p

最新研究证实：急性炎症反应可以导致粥样斑块不稳定，致使其破裂，从而导致血栓形成，是诱发急性冠脉综合征(Acute coronary syndrome，ACS)的重要原因[1～3]。MicroRNA-155(miRNA-155)是一个典型的多功能microRNA，其参与调控B 、T 淋巴细胞和树突状细胞的分化，从而对机体的免疫功能造成影响。MiRNA-155包括miRNA-155-5p和miRNA-155-3p两个亚型。近年来的研究已证实：miRNA-155-5p在免疫反应、炎症、肿瘤发生等过程中发挥了重要的作用[4]，但尚缺乏在冠心病尤其是ACS方面的研究结果。本研究通过观察ACS患者外周血中miRNA-155-5p水平，以探讨与冠状动脉病变程度的关系。

对象与方法

1研究对象选择2014 年7月至2015 年7 月在陕西省人民医院心血管内三科住院并经冠脉造影检查证实的ACS患者45例，同期冠脉造影正常的人群15 例作为对照组。诊断参照美国心脏病学会/美国心脏协会ACS 诊断标准，同时行冠状动脉造影术检查提示至少有1 支冠状动脉狭窄程度≥70%。按照临床症状及心电图改变，将45例ACS患者分为不稳定型心绞痛组(UAP)、非ST段抬高型心肌梗死组(NSTEMI)、ST段抬高型心肌梗死组(STEMI)各15例。所有研究对象均排除严重肾脏疾病、严重肝脏疾病、自身免疫性疾病、恶性肿瘤、感染性疾病、外周动脉粥样硬化性疾病、脑血管意外、器官移植术后及其他炎性疾病，并在半年内未发生过心梗者。

2研究方法入选患者于入院次日清晨空腹采静脉血，酶法检测空腹血糖(FPG)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C )、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)。将采取的血液加入含有EDTA抗凝剂的抗凝管中混合摇匀、保存备用。采用TaKaRa公司RNAiso Blood试剂盒提取总RNA。采用TaKaRa公司反转录试剂盒进行反转录，引物序列为：CTTAATGCTAATCGTGATAGGGGT。按照TaKaRa公司SYBR Premix Ex Taq试剂盒要求，在美国Applied Biosystems公司的7500 Real Time PCR仪器进行实时相对定量PCR 检测，结果采用 Life Tech v20.6软件分析。以U6作为参照基因，采用2-ΔΔCT方法进行相对定量分析，比较各组基因的表达量。依据1984年美国心脏病协会规定的冠脉血管图像分段评价标准和Gensini冠脉评分系统将入选病例的冠脉造影结果进行评分[5]。病变部位的系数与狭窄程度的计分相乘，各个乘积相加的总和即为每位患者的Gensini评分。

结果

1四组患者一般资料比较见附表。健康对照组年龄、性别、收缩压、舒张压与UAP组、STEMI组、NSTEMI组之间比较无显著性差异(P>0.05)； UAP组、STEMI组、NSTEMI组的TC、TG、LDL-C水平明显高于对照组(P<0.05)；而HDL-C明显低于对照组(P<0.05)。

附表　 四组患者一般资料比较±s)

注：*与健康对照组相比，P<0.05

2miR-155-5p 在ACS各组和健康对照组血液中的表达差异情况见图1。通过Real-time PCR法检测miR-155-5p 在UAP组、STEMI组、NSTEMI组和健康对照组血液中的相对表达水平，结果显示：UAP组、STEMI组、NSTEMI组血液中miR-155-5p的相对表达量显著低于健康对照组(P<0.05)。

3冠脉病变严重程度Gensini评分与血液中miR-155-5p表达水平的关系见图2。评估冠脉病变的严重程度根据冠状动脉造影结果采用 Gensini 评分方法，以 Gensini评分+1的自然对数(LN)为自变量，以血液中miR-155-5p 的相对表达水平为因变量，对冠脉病变严重程度及血液中 miR-155-5p的表达水平进行相关性分析。结果显示：Gensini 评分+1的自然对数与血液中 miR-155-5p 的表达水平呈负相关(r=-0.678，P=0.000)。

图1 miR-155-5p 在UAP、STEMI、NSTEMI和健康对照组血液中的表达差异

(注：*与对照相比，P<0.05)

图2Gensini评分与血液中miR-155-5p 的表达水平的相关性关系

讨论

冠心病(Coronary Heart Disease，CHD)是严重威胁人类健康的重大疾病，而ACS是其中生活质量最低、临床症状最重、预后最差的类型，给社会带来了沉重的疾病负担, 因此对它的预防和治疗始终是医学界关注的重点。急性炎症反应可以导致粥样斑块不稳定，致使其破裂，从而导致血栓形成，是诱发ACS发生的重要原因。

MiRNAs 被确定在心血管领域中是潜在的特异性标志物。最近的研究显示炎症与miRNAs具有相关性[6]。miRNA-155属于miRNAs家族中的一员,是一种多功能的miRNA。已有资料表明：miRNA-155 在自身免疫性疾病、肿瘤发生等过程中发挥了重要的作用[7]，尚缺乏其在CHD尤其是ACS方面的研究。目前越来越多的研究发现：miRNA-155可以影响固有免疫和获得性免疫过程，在T/B细胞的分化发育中发挥十分重要的作用，同时对免疫细胞进行监管[8]。miRNA-155可以通过抑制树突状细胞表面重要分子的表达，如T细胞活化及抗原递呈、并组成T细胞介导的免疫应答抑制性通路[9]。在单核巨噬细胞，一些促炎因子可上调miRNA-155 的表达，参与了巨噬细胞泡沫化的形成[10]。进一步研究表明：miR-155-5p 可对氧化低密度脂蛋白产生的炎症反应起到负反馈调节作用。以上研究均提示miR-155-5p可能在ACS的发生发展中扮演着重要的角色。

本研究显示：在UAP组、STEMI组、NSTEMI组血液中miR-155-5p 的相对表达量显著低于健康对照组。Gensini评分是一种评估冠脉病变严重程度的方法，其评分越高说明冠脉病变越严重。本研究显示：Gensini 评分与血液中 miR-155-5p 的表达水平呈负相关，说明冠脉病变程度越严重，miR-155-5p 的表达水平也就越低，提示miR-155-5p参与了ACS的发生与发展，并且有可能是ACS的一种保护因子。但miR-155-5p如何通过调控炎症反应参与ACS的发生发展尚需进一步研究。

参考文献

[1]Pashun RA， Frishman WH. Therapeutic role of innovative anti-inflammatory medications in the prevention of acute coronary syndrome[J]. Cardiol Rev, 2015, 23(5):252-260.

[2] Baruch A, Van Bruggen N, Kim JB,etal. Anti-inflammatory strategies for plaque stabilization after acute coronary syndromes[J]. Curr Atheroscler Rep, 2013, 15(6): 327.

[3]王学懂, 侯静波. 炎症反应在斑块稳定性中的作用[J]. 心血管康复医学杂志, 2012, 21(2): 218-220.

[4]Mashima R. Physiological roles of miR-155[J]. Immunology，2015, 145(3):323-333.

[5]He LY, Zhao JF, Han JL,etal. Correlation between serum free fatty acids levels and Gensini score in elderly patients with coronary heart disease[J]. J Geriatr Cardiol, 2014, 11(1): 57-62.

[6]Heegaard NH, Carlsen AL, Skovgaard K,etal. Circulating extracellular microRNA in systemic autoimmunity[J]. EXS，2015，106:171-195.

[7]Faraoni I, Antonetti FR, Cardone J,etal. miR-155 gene：a typical multifunctional microRNA[J]. Biochim Biophys Acta，2009，1792(6):497-505．

[8]O'Connell RM, Kahn D, Gibson WS,etal. MicroRNA-155 promotes autoimmune inflammation by enhancing inflammatory T cell development[J]. Immunity， 2010，33(4):607-619.

[9]Mao CP, He L, Tsai YC,etal. In vivo microRNA-155 expression influences antigen-specific T cell-mediated immune responses generated by DNA vaccination [J]. Cell Biosci，2011，1(1):3.

[10]Huang RS, Hu GQ, Lin B,etal. MicroRNA-155 silencing enhances inflammatory response and lipid uptake in oxidized low-density lipoprotein-stimulated human THP-1 macrophages[J]. J Investig Med, 2010, 58(8):961-967.

(收稿：2016-02-28)

通讯作者▲

【中图分类号】R541.4

【文献标识码】A

doi：10.3969/j.issn.1000-7377.2016.05.02

The correlation of peripheral blood levels of microRNA-155-5p and the severity of coronary artery disease in the patients with acute coronary syndrome

The Third Department of Cardiovascular Diseases, Shaanxi Provincial People’s Hospital(Xi’an 710061)Yang YujuanZhang WeijingXing Kunet al

ABSTRACTObjective: To explore the correlation of peripheral blood levels of microRNA-155-5p and the severity of coronary artery disease in the patients with acute coronary syndrome. Methods: A total of 45 ACS patients were divided into unstable angina groups (UAP), non ST segment elevation myocardial infarction groups (NSTEMI) and ST elevation myocardial infarction (STEMI) groups. Another 15 healthy individuals served as controls. According to results of coronary angiography, Gensini score was calculated to quantize the severity of coronary arterial stenosis. Real-time PCR assay was used to detect the concentration of microRNA-155-5p in peripheral blood of the ACS patients. Results: Compared with the control groups, the level of miRNA-155-5p in unstable angina groups, non ST segment elevation myocardial infarction groups and ST elevation myocardial infarction groups were significantly decreased (P <0.05). Spearman rank correlation test showed that the Gensini score of ACS patients was positively correlated with microRNA-155-5p (r=-0.678，P=0.000). Conclusion: The level of miRNA-155-5p in peripheral blood of patients with ACS is significantly lower than that in control group and was negatively correlated with the severity of coronary arterial stenosis in ACS groups.

KEY WORDSAngina,unstable/diagnosisAngina,unstable/blood@ miRNA-155-5p

*陕西省自然科学基础研究计划项目(2014JM4185)

△西安交通大学第一附属医院心内科