钟　江，郑祥顺，周晓泉，刘玉姣，杨和明，陈　曦，邓双奇

(贵州省血液中心检验科，贵阳 332000)

贵州省血液中心病毒核酸检测应用分析

钟江，郑祥顺，周晓泉，刘玉姣，杨和明，陈曦，邓双奇

(贵州省血液中心检验科，贵阳 332000)

[摘要]目的尝试评价贵阳地区无偿献血人群中开展血液病毒核酸检测(NAT)的必要性和重要性。方法应用Grifols Procleix Tigris全自动NAT和Procleix Ulitrio Assay HBV、HCV、HIV NAT 联检试剂，对72 967例无偿献血者血液标本做HBV、HCV、HIV联检，并对联检阳性标本做鉴别试验；同时对同批标本采用ELISA双试剂平行检测。结果NAT阳性检出率为0.63%(462/72 967)，ELISA检测阴性标本的NAT阳性检出率0.16%(119/72 624)；单项核酸阳性标本的鉴别试验阳性率为24.3%(29/119)。结论贵阳地区核酸检测合格血液中存在的输血传播疾病风险主要是输血感染HBV，NAT用于血液筛查能进一步降低输血传播疾病风险。

[关键词]贵州省；病毒；核酸；血库

2013年4月，国家卫生与计划生育委员会委下发了《全面推进血站核酸检测工作实施方案(2013～2015年)》的通知，要求2013年，西部地区省会城市血站核酸检测覆盖率应达到40%以上。贵州省血液中心按照省卫生与计划生育委员会的要求，完成了实验室基础建设、设备安装、调试、试运行等前期筹备工作。于2013年10月14日起正式将病毒核酸检测用于本中心献血者血液筛查，现将1年的检测结果报道如下。

1资料与方法

1.1一般资料2013年10月14日至2014年10月13日，贵州省血液中心采集的无偿献血全血样本72 967例；标本留样方式为血液采集时旁路留样留取2支分别用于ELISA(5 mL/份)及NAT(8 mL/份)检测的样本，其中核酸检测样本采用无菌带分离胶抗凝检测专用真空试管。

1.2仪器与试剂全自动核酸检测分析系统(Procleix TIGRIS System),全自动ELISA加样仪(Microlab STAR、Freedom EVO clinical)、全自动ELISA分析仪(FAME 24/20、SIEMENS BP-Ⅲ)。MA-化学发光法 HBV、HCV、HIV联检试剂盒(Procleix ULTRO Assay)及鉴别试剂盒(Discriminatory Assay)，HBsAg ELISA试剂(北京万泰生物药业股份有限公司、上海科华生物工程股份有限公司)，抗-HCV ELISA试剂(北京万泰生物药业股份有限公司、上海科华生物工程股份有限公司)，抗-HIV ELISA试剂(北京万泰生物药业股份有限公司、法国伯乐公司)。

1.3核酸检测流程将当日采集的血液标本经过3 130×g离心15 min后放置2～10 ℃冰箱保存。24 h内，标本管经开盖处理后立即进行核酸检测(11：30 AM前交接的血小板标本当日进行NAT检测)，对NAT联检阳性的标本，不需等待鉴别结果，血液做报废处理，献血者永久屏蔽。

1.4检测策略对无偿献血者血液标本采用ELISA和NAT平行检测；对NAT联检阳性的标本作HBV、HCV、HIV鉴别试验，对ELISA检测阴性而NAT鉴别为HCV RNA、HIV RNA阳性的献血者做定期跟踪随访。

1.5检测方法对血液标本采用全自动核酸分析系统做单人份检测，检测模式为HBV/HCV/HIV NAT联检；采用2种不同厂家NAT试剂对血液标本的HBsAg、抗-HCV、抗-HIV进行平行检测。

2结果

2.12013年10月14日至2014年10月13日贵阳地区72 967例献血者标本中献血者ELISA与NAT阳性检出率比较，ELISA检测(HBsAg、抗-HCV、抗-HIV)阳性标本912例、阳性检出率1.25%，NAT检测阳性标本462例、阳性检出率0.63%。

2.22013年10月14日至2014年10月13日贵阳地区献血者72 624例 ELISA检测(HBsAg、抗-HCV、抗-HIV)阴性标本中NAT检测阳性标本119例，阳性检出率0.16%。

2.32013年10月14日至2014年10月13日贵阳地区献血者NAT阳性标本鉴别试验见表1。NAT阳性标本鉴别率为72.51%(335/462),单项NAT阳性标本的鉴别阳性率为24.3%(29/119)，29例鉴别阳性标本均为HBV-NAT。

表1　鉴别试验结果(n)

TRI:HBV、HCV、HIV联检。

3讨论

贵阳地区献血者血液标本NAT阳性检出率为0.63%，ELISA检测(HBsAg、抗-HCV、抗-HIV)的阳性检出率为1.25%；其中ELISA检测(HBsAg、抗-HCV、抗-HIV)阴性标本中NAT阳性检出率0.16%，位于已报道的国内其他地区单项NAT阳性检出率0.07%～0.22%中位[1-5]，其间差异可能与各地病毒流行率差异、检测模式、检测标本数、ELISA试剂、核酸设备与试剂等因素相关。

ELISA全项检测合格而NAT联检阳性的标本，所作的核酸鉴别试验的阳性率仅为24.3%(29/119)；鉴别阳性的标本均为HBV-NAT。对于这一结果可能有以下原因：(1)单项核酸阳性标本的病毒载量较低，病毒在样品中的不规则分布造成的取样病毒数量误差；(2)HBV是DNA病毒，对外界环境适应性较强，HCV和HIV均是RNA病毒，稳定性较差，易降解；(3)核酸联检有出现假阳性结果可能。

据报道，隐匿性HBV感染献血者是导致HBsAg血液筛查后输血传播HBV的主要原因。隐匿性HBV 病毒学检测常表现为HBsAg阴性，而NAT检测阳性。贵州省血液中心ELISA全项检测合格而NAT联检阳性的标本，鉴别试验阳性的均为HBV-NAT。从此可以看出，目前贵阳地区ELISA检测合格献血者血液中存在的输血传播疾病风险主要是感染HBV。综上所述，核酸检测能进一步缩短血液检测的“窗口期”，减少隐匿性HBV感染等原因造成的漏检，降低血液传染病风险。

参考文献

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作者简介：钟江(1974-)，副主任医师，硕士，主要从事血液检测研究。

doi:·经验交流·10.3969/j.issn.1671-8348.2016.02.031

[中图分类号]R457.1

[文献标识码]B

[文章编号]1671-8348(2016)02-0242-02

(收稿日期：2015-09-15修回日期：2015-10-08)