王丽珊　何土芬　黄汉中

丙酸钙是一种新型食品添加剂，是联合国粮农组织和世界卫生组织批准使用的可靠安全的食品和饲料用防霉剂。对菌革兰氏阴性菌、黄曲霉素、细菌及霉菌等具有广泛的抗菌作用，丙酸钙可用作食品及饲料的防霉剂，用于面包及糕点的保存剂。丙酸钙易于与面粉混合均匀，在作为保鲜防腐剂的同时又能提供人体必需的钙质，起到强化食品的作用。根据GB2760-2010《食品安全国家标准食品添加剂使用标准》规定，丙酸钙允许用于生湿面制品，豆类制品，醋，酱油，面包，糕点饮料等食品中。本文意在研究面包中丙酸钙的检测方法。

食品中丙酸钙常用的检测方法有气相色谱法，高效液相色谱法。目前气相色谱法检测丙酸最为常见，由于气相色谱法前处理较繁琐，实验成本较高，而GB/T23382-2009《高效液相色谱法测定面包中的丙酸钙》前处理简便，以超纯水作为溶剂，无毒，低成本，但该方法得出的效果不佳，回收率78%～83%，本研究着重对色谱检测条件进行优化改良，提高了检测的分离度及回收率，能满足实验室中大批量样品检测。

由于丙酸钙微溶于有机试剂，易溶于水，所以选用超纯水作提取溶剂。使用超声提取能使分子运动加剧，提取效果更彻底。水作提取剂时加入磷酸溶液，可使丙酸钙酸化成丙酸而被检测。

材料及方法

设备与试剂。设备：DIONEX P680戴安高效液相色谱仪（配有紫外监测器）；超声波水浴SY-1030F；超纯水器M-illi-Q System；电子天平；离心机CT14RD；搅拌器飞利浦HR1608；具塞50ml比色管；Ph试纸；0.45μm微孔滤膜。

试剂：甲醇（色谱纯）；磷酸磷酸氢二铵（分析纯）配备1.5g/磷酸氢二铵溶液，用1mol/L磷酸溶液调ph2.7-3.5（现配现用），经0.45μm微孔滤膜过滤；丙酸钙标准品（99.0%）1.1.3标准储备液（10mg/ml）

样品选用方法

样品处理。直接浸提法：把方包捣碎搅拌均匀，准确称取5g（准确至0.01 g）至50ml具塞比色管加入20ml水，加入1mol/L磷酸溶液0.5ml，混匀，经超声浸提30min后，用1mol/L磷酸溶液调ph至3左右，用水定容至刻度，摇匀。全部转移至50ml具塞塑料离心管中，以转速4500r/min离心5min，取上清液，经0.45μm微孔滤膜过滤，待测。

色谱条件。流动相的确定：加标：往称好的试样]组（A1，A2，A3），2组（A4，A5，A6）中分别准确加入丙酸标准溶液（10mg/ml）1.00ml，即加标量为0.5mg/ml，样品空白A7，A8，按上述方法一并处理待测。

1组相色谱条件：C18柱（安捷伦AICHROMBondC18 150mm*4.6mm/5μm）；流動相1.5g/L磷酸氢二铵溶液：甲醇（90：10）等度洗脱；紫外检测波长214nm；流速1.0ml/min；柱温30℃；进样量20μl。

2组相色谱条件：C18柱；流动相1.5g/L磷酸氢二铵100%平衡1min，1-4.1min甲醇上升至10%，磷酸氢二铵降至90%，4.1-5min甲醇10%，磷酸氢二铵90%等度，5-7min磷酸氢二铵上升至1 00%，平衡4min；紫外检测波长214nm；流速1.0ml/min柱温：30℃；进样量20μl。

结果与分析

本结果表明梯度洗脱的组2丙酸回收率明显高于等度的组1，峰形坚锐，对称性好，出峰时间在9.107。

样品浸提时加入磷酸溶液使样品中丙酸钙转化成丙酸便于提取；前期实验表明流速为1.0ml/min校准曲线相关性，分离效果最为理想，故本实验选用该流速作进一步研究；相对气相色谱法，液相色谱法前处理更为简便，无毒，节约实验成本，且经实验优化色谱条件后回收率高而稳定，在工作有较强的可操作性及实用性。