魏焕辉

(伊春区畜牧兽医站,黑龙江伊春 153000)

兔痘的诊断方法及防控措施

魏焕辉

(伊春区畜牧兽医站,黑龙江伊春 153000)

兔痘病毒除了对兔具有致病性外,几乎与马痘、牛痘病毒没有区别。本病仅发生于穴兔繁殖群,临床表现为病兔皮肤痘疹和鼻、眼内流出多量分泌物。各年龄均可感染,但以4～12周龄兔易感。

兔痘;诊断;防控

1 病理学诊断

（1）病理剖检变化：皮肤损伤具有特征性，其严重程度可以仅有少数局部斑疹到严重的、有广泛坏死和出血的皮肤损害不等。皮下水肿及口和其他天然孔的水肿是兔痘的常见病变。胃肠道主要在腹膜和网膜上出现灶性斑疹。肺、肝、脾肿大，有肉眼可见的青白色粟粒大的结节，胆囊也有小结节。睾丸、卵巢和子宫也布满白色结节，睾丸发生明显水肿和坏死，子宫有时发生灶性脓肿。

（2）病理组织学变化：斑疹或结节的组织中央坏死，周围是单核细胞浸润，相邻组织水肿或出血，或可见由大量单核细胞、坏死组织细胞、出血和水肿构成的弥漫性病变，血管上皮明显肿胀，细小血管阻塞。兔痘引起的肺炎以血管周围单核细胞和多形核细胞浸润为特征。骨髓内有单核细胞浸润，并伴有散在的出血和坏死。脾脏严重充血，红髓内有大量单核细胞浸润，脾小体水肿，甚至出现灶性到弥漫性坏死。淋巴结，特别是小肠结合淋巴滤泡可发生广泛性坏死。胆管区单核细胞浸润，睾丸组织有水肿坏死灶，甲状腺、肾上腺、胸腺、唾液腺和子宫细胞变性、坏死及单核细胞浸润。有时在上述各受害器官内可看到特征性的胞浆内包涵体。

2 病原学诊断

（1）病料采集和处理：①样品采集：心肌、肝、脾、肺、肾，以及淋巴结、睾丸、子宫材料、呼吸道分泌物和水肿液等均可作为病毒检验材料。鸡胚绒毛尿囊膜的痘疱病灶以及细胞培养物亦可作为被检材料。皮肤材料采集时，先用棉球了占70%乙醇或乙醚，清洗病变皮肤的表面，收集痂皮及其病灶顶部的材料。②样品处理：将被检材料放入玻璃研磨器内，加10%生理盐水后研磨。每毫升加入青霉素、链霉素各1000IU，37℃孵育1h后经3000转/min离心10min，吸取上清液作为鸡胚接种、细胞培养和动物接种材料，分装保存。

（2）病原分离：①鸡胚接种：第一步：接种。将上述材料按常规方法接种10～13日龄的SPF鸡胚绒毛尿囊膜上，每胚接种0.2ml，每份材料接种4个鸡胚，39～40℃培养48～72h。第二步：收获观察。接种后第2d检卵，弃去死胚，待培养48～72h后，按常规方法收获绒毛尿囊膜。第三步，结果观察。如收获的绒毛尿囊膜出现白色的痘斑时，可以认为是兔痘病毒感染。在绒毛尿囊膜上分离病毒的方法是比较简单而又可靠的实验诊断方法，但这并不是惟一的病毒分离方法，还可以用组织培养和动物接种分离法分离病毒。动物接种时，取上述材料家兔腹部皮肤划痕接种，或同时作睾丸内接种及家兔角膜划痕接种。②细胞培养。兔痘病毒可在兔肾、睾丸和兔胚单层细胞内繁殖。取细胞2～4管，吸掉上清液。每管接种上述标本0.2ml，室温下吸附30min。加入维持液0.8时，37℃培养6～7d，每天观察细胞病变。结果观察：在有病变的细胞浆内可见包涵体形成。③动物接种：取上述接种材料，以皮肤划痕法，接种易感兔，或每兔皮下注射0.5～1.0ml，或每兔滴鼻感染0.2～0.5ml。一般在感染后5d左右开始发病，症状和病变与自然发病病例相同。

（3）病毒鉴定：①包涵体检查：将病料组织、绒毛尿囊膜、细胞培养物作涂片或触片，或将病变组织、绒毛尿囊膜、细胞培养物制成组织切片，姬姆萨染色，可见细胞浆内紫色包涵体。②血凝试验与血凝抑制试验：痘疱型毒株能凝集鸡红细胞，利用这一特性对采集的样品进行检查。方法1：玻片法。取上清液一滴，滴于玻片上，加等量1%鸡红细胞，室温下混匀后不断摇动，3min内出现凝集者判为阳性反应。方法2：试管法。取9支清洁的试管置于试管架内排成一排，每管加入0.25ml生理盐水。吸取0.05ml待检样品加入第一管中，混匀后取0.25ml加入到第二管中，如此类推直至第八管，最后从第八管吸出0.25ml，弃去。第九管不加被检样品，作为对照。每管加入0.25ml 1%鸡红细胞悬液，充分混匀后置于37℃水浴内30min。结果判定：“＋＋＋＋”鸡红细胞在管底四周呈颗粒状；“＋＋＋”少数红细胞集中于管底中央，大部分分散成颗粒状；“＋＋”半数红细胞集中于管底中央，呈圆碟状；“＋”75%红细胞集中于管底，呈圆碟状；“－”全部红细胞集中于管底，呈圆碟状。试验中以被检样品的最大稀释管显示“＋＋＋＋”凝集现象者为一个血凝单位。

对于血凝试验阳性的样品，必须用已知的标准阳性血清进行血凝抑制试验，只有被检样品的血凝性可被特异性的阳性血清所中和者，才能判为兔痘病毒阳性。

3 预防措施

对本病无特效药物治疗。一旦发病，需立即采取严格的隔离措施，消毒并扑杀病兔，尸体深埋或焚烧，做无害化处理，其余兔包括健康兔紧急接种牛痘疫苗，进行免疫预防，接种后很快能产生抵抗力，免疫期能达半年左右。注意加强饲养管护，对兔场及器具进行彻底清洁和严格消毒。引进种兔时要严格检疫，并隔离饲养，确定无病后，方可进场。

[1] 张占江.兔痘的流行和诊疗方法[J].畜牧兽医科技信息，2016，（7）：128-129.

魏焕辉（1964—），男，大专学历，助理兽医师，主要从事动物疫病防控工作。