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猪病诊断和防治过程中PCR技术的应用

2016-03-10杨显荣吉林省德惠市肉品管理办公室130300

当代畜禽养殖业 2016年11期
关键词:猪病圆环病症

杨显荣 吉林省德惠市肉品管理办公室 130300

猪病诊断和防治过程中PCR技术的应用

杨显荣 吉林省德惠市肉品管理办公室 130300

近些年,猪病发生的几率越来越高,且病症也越来越严重,这使得养猪业的发展也受到极大的影响。在猪病的诊断与防治中,最重要的就是精确快速地找到导致猪病发生的病原菌,这样才能根据病原菌的种类,采取有针对性的措施来加以应对。故开发一种能够迅速对猪病进行诊断的技术就变得十分重要,而应用PCR技术则能很好地满足这一要求。

1 PCR技术概况

在猪病诊断与防治中,PCR技术主要有三个优点:一是操作简便,二是具有高速度的扩增效果,三是具有较高的特异性。目的基因在PCR技术下,能够在非常短的时间内被快速扩增,从而达到检测微量基因的目的。同时在PCR技术中,特异性会受到靶序列两头的引物—寡核苷酸所影响。由于PCR技术的不断发展,目前PCR技术在传统基础上又不断衍生出了几类新型的技术,例如PCR多重技术、PCR荧光定量技术,以及RT-PCR技术,这些技术在检测动物疫病方面具有非常重要的意义和作用。

2 猪病诊断和防治过程中PCR技术的应用

(1)检测单一病毒—猪圆环病毒。实验人员按照基因储存库中猪圆环病毒的基因序列ORF2来对扩增引物进行设计,并利用该病毒的临床分离基因来作为模板基因,然后对反应条件进行适当的筛选,从而形成一种能够对猪圆环病度2型进行检测的PCR方法。结果表明,用这一方法对猪圆环病毒2型扩增基因以后,得到目的基因的片段长度为559bp,而在相等条件下,对其他能够引起类似猪病的感染病毒进行检测发现,其实验的结果均呈阴性,说明此种检测方法具有非常好的特异性。同时通过实验发现,经检测的30个临床病料,总共81份,其结果具有非常高的准确率,这说明PCR检测方法具有较好的可行性,因此能够为猪场养殖提供准确的防疫依据。

(2)检测单一病毒—猪瘟病毒。在众多猪病中,猪瘟具有非常严重的危害,而且会给养猪业的经济效益造成非常大的损失。目前,尽管国内相关部门已经采取了多种措施来对猪瘟进行预防和控制,但是结果都很不理想。而随着PCR技术的应用,人们根据设计引物的不同,建立了RT-PCR技术来对猪瘟进行检测,结果表明,其能够对猪瘟病毒的核酸序列进行扩增,而且这一扩增具有明显的特异性,同时检测结果的可靠性也非常高,因此能够对猪瘟进行快速诊断和防治。

(3)检测单一病毒—呼吸与繁殖综合症。此类猪病主要发生于母猪,进而传染给仔猪。这种病症不仅会对母猪的繁殖造成影响,同时还会对仔猪的存活率及免疫功能造成较大的影响。因此可以运用快速诊断的结果来对该病进行有效的防治。实验人员利用聚合酶中的链式反应来对这一病症进行了检测,而且经过不断研究和试验,最终建立了该病症的检测方法PCR法。使用该种检测方法的注意事项为:首先,若RNA是从陈旧的样品中进行提取的,则容易发生降解反应,而在电泳实验中,新鲜的样品则会有三条明显的RNA,而且外形也相对完整。其次是在RNA在提取以后,进行cDNA反转录后,在-20℃时经历1周,就会出现降解反应。

(4)检测混合病毒。多重PCR技术主要指的是将两种以上的引物加到一个反应系统里面,与一般的PCR技术进行对比发现,这一技术能够对两种或者两种以上的猪病病菌进行同时检测,并且还能获得非常准确的检测结果,同时反应的速度非常快,而且非常灵敏,因此具有非常好的应用效果。在对猪病进行检测和防治的过程中,经常会遇到两种或者两种以上病毒混合感染的情况,而且长期以来大量的兽医都只是利用以往的经验来进行诊断和治疗,因此极易错过最佳的治疗时机。而应用PCR技术进行猪病的诊断和防治就变得非常有价值。

3 总结

综上所述,目前针对猪病中容易引起病症的病毒及病原体等,实验人员设计了5种PCR技术检测方法,主要是应对猪瘟、呼吸与繁殖综合症及脑炎等,因为这几种病症常常混合在一起对猪体进行感染。采用多重PCR能够产生的扩增产物主要有三种,即263bp、380bp和508bp,而且检测的灵敏性比传统的检测技术要高出数倍,这说明多重PCR技术在进行猪病诊断和防治过程中具有非常高的灵敏性和特异性。

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