朱锋，彭启松，居蓉

(南京市江宁医院检验科，江苏 南京 211100)

VEGF、MMP-2和MMP-9检测在子宫内膜异位症诊断中的应用价值

朱锋，彭启松，居蓉

(南京市江宁医院检验科，江苏 南京 211100)

目的 检测子宫内膜异位症(EMs)患者血清及腹腔液中血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的浓度，并探讨其与EMs的诊断及分期的意义。方法采用酶联免疫吸附法(ELISA)定量测定2012年1月至2014年12月于我院妇科住院的64例EMs患者血清和腹腔液中VEGF、MMP-2和MMP-9浓度，并与30例子宫肌瘤患者(非EMs组)进行比较分析。结果EMs组患者血清中VEGF、MMP-2和MMP-9浓度分别为(235.7±61.2)ng/L、(196.3±51.8)μg/L和(231.6±44.0)μg/L，腹腔液中VEGF、MMP-2和MMP-9浓度分别为(856.2±260.5)ng/L、(45.1±13.6)μg/L和(53.4±19.0)μg/L。EMs组患者血清及腹腔液中VEGF、MMP-2和MMP-9浓度显著高于非EMs组，Ⅲ～Ⅳ期浓度显著高于Ⅰ～Ⅱ期和非EMs组(P＜0.01)；Ⅰ～Ⅱ期中VEGF浓度显著高于非EMs组(P＜0.01)。结论在EMs患者血清及腹腔液中高浓度的VEGF、MMP-2和MMP-9与EMs的发生和发展相关，检测VEGF、MMP-2和MMP-9浓度有助于EMs的诊断与分期评估。

子宫内膜异位症；血管内皮生长因子；基质金属蛋白酶-2；基质金属蛋白酶-9

子宫内膜异位症(Endometriosis，EMs)是指具有生长功能的子宫内膜组织出现在子宫腔被覆黏膜以外的身体其他部位而形成异位病灶，本疾病是生育年龄女性的常见病和多发病，严重影响患者的生活质量。EMs发病机制较为复杂，包括内分泌因素、免疫因素和血管生成因子等相互作用，共同参与了EMs的发生及发展[1]。血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在破坏和降解细胞外基质和血管生成中起着重要的作用。笔者采用联合检测EMs患者、子宫肌瘤患者血清和腹腔液中的VEGF、MMP-2和MMP-9的浓度，并探讨其与EMs的诊断及分期的意义，现报道如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料 EMs患者和子宫肌瘤患者均为2012年1月至2014年12月我院妇科住院的患者，EMs组64例，年龄21～45岁，平均(31.5±8.0)岁。按美国生育学会修正分期法[2]分期，Ⅰ～Ⅳ期患者分别为4例、29例、26例和5例。由于Ⅰ、Ⅳ组病例较少，故将Ⅰ～Ⅱ组和Ⅲ～Ⅳ期组合并分组。30例同期住院的子宫肌瘤患者(非EMs组)，年龄22～43岁，平均(30.0±7.5)岁，两组年龄比较差异无统计学意义(P＞0.05)。

1.2 方法

1.2.1 标本采集 抽取患者空腹外周静脉血3 ml，离心10 min，取血清-20℃冰箱保存。EMs和非EMs患者在手术时腹腔镜抽吸没被血液污染的腹腔液，离心10 min，取上清液-20℃冰箱保存。

1.2.2 检测方法 采用ELISA方法检测VEGF、MMP-2和MMP-9浓度，检测试剂盒由深圳晶美生物工程有限公司提供，严格按说明书进行操作。定值标准品均做复孔，取均值计算直线相关方程系数，建立标准方程。每份样品均做复孔，取均值代入上述回归方程计算各样品浓度。

1.3 统计学方法 应用SPSS16.0统计学软件进行数据分析，计量资料以均数±标准差(±s)表示，组间比较采用t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 两组患者血清中VEGF、MMP-2和MMP-9浓度比较 EMs组患者血清中VEGF、MMP-2和MMP-9浓度显著高于非EMs组，两组结果比较差异均具有显著统计学意义(P＜0.01)，见表1。

2.2 EMs组和非EMs组患者腹腔液中VEGF、MMP-2和MMP-9浓度比较 EMs组腹腔液中VEGF、 MMP-2和MMP-9浓度显著高于非EMs组，两组结果比较差异均具有显著统计学意义(P＜0.01)，见表2。

表1 两组患者血清中VEGF、MMP-2及MMP-9浓度比较(±s)

表1 两组患者血清中VEGF、MMP-2及MMP-9浓度比较(±s)

例数组别VEGF(ng/L)MMP-2(μg/L)MMP-9(μg/L) 64 30 EMs组非EMs组t值P值235.7±61.2 118.4±35.1 10.26＜0.01 196.3±51.8 125.0±29.5 6.13＜0.01 231.6±44.0 142.9±28.6 7.04＜0.01

表2 两组患者腹腔液中VEGF、MMP-2及MMP-9浓度比较(±s)

表2 两组患者腹腔液中VEGF、MMP-2及MMP-9浓度比较(±s)

组别 例数VEGF(ng/L)MMP-2(μg/L)MMP-9(μg/L) EMs组非EMs组t值P值64 30 856.2±260.5 273.6±55.2 13.37＜0.01 45.1±13.6 19.2±8.8 9.61＜0.01 53.4±19.0 23.9±7.6 7.52＜0.01

2.3 不同分期EMs患者血清中VEGF、MMP-2和MMP-9浓度比较 血清中VEGF浓度Ⅲ～Ⅳ期组＞Ⅰ～Ⅱ期组＞非EMs组，组间比较差异具有显著统计学意义(P＜0.01)，而MMP-2和MMP-9只有Ⅲ～Ⅳ期组显著高于Ⅰ～Ⅱ期组(P＜0.01)，见表3。

表3 不同分期EMs患者血清中VEGF、MMP-2及MMP-9浓度比较(±s)

表3 不同分期EMs患者血清中VEGF、MMP-2及MMP-9浓度比较(±s)

注：与非EMs组比较，aP＜0.01；与Ⅰ～Ⅱ期组比较，bP＜0.01。

临床分期 例数VEGF(ng/L)MMP-2(µg/L)MMP-9(µg/L)Ⅲ～Ⅳ期组Ⅰ～Ⅱ期组非EMs组31 33 30 298.6±84.3b171.2±45.8a118.4±35.1 250.4±73.3b132.3±34.6 125.0±29.5 302.5±53.6b151.8±35.2 142.9±28.6

2.4 不同分期EMs患者腹腔液VEGF、MMP-2和MMP-9浓度比较 腹腔液中VEGF浓度Ⅲ～Ⅳ期组＞Ⅰ～Ⅱ期组＞非EMs组，组间比较差异具有显著统计学意义(P＜0.01)，而MMP-2和MMP-9只有Ⅲ～Ⅳ期组显著高于Ⅰ～Ⅱ期组(P＜0.01)，见表4。

表4 不同分期EMs患者腹腔液中VEGF、MMP-2和MMP-9浓度比较(±s)

表4 不同分期EMs患者腹腔液中VEGF、MMP-2和MMP-9浓度比较(±s)

注：与非EMs组比较，aP＜0.01；与Ⅰ～Ⅱ期组比较，bP＜0.01。

临床分期 例数VEGF(ng/L)MMP-2(µg/L)MMP-9(µg/L)Ⅲ～Ⅳ期组Ⅰ～Ⅱ期组非EMs组31 33 30 1170.4±323.9b641.3±195.0a273.6±55.2 63.6±18.7b20.5±9.1 19.2±8.8 78.1±26.4b25.7±8.2 23.9±7.6

2.5 VEGF、MMP-2及MMP-9的浓度在EMs组Ⅲ～Ⅳ期、Ⅰ～Ⅱ期与非EMs组比值 VEGF在血清及腹腔液中Ⅲ～Ⅳ期组/非EMs组和Ⅰ～Ⅱ期组/非EMs组均较大，MMP-2和MMP-9在Ⅲ～Ⅳ期组/非EMs组较大，见表5。

表5 不同期别VEGF、MMP-2及MMP-9与非EMs组中相应指标的比较(±s)

表5 不同期别VEGF、MMP-2及MMP-9与非EMs组中相应指标的比较(±s)

比值血清腹腔液Ⅲ～Ⅳ期组/非EMs组Ⅰ～Ⅱ期组/非EMs组VEGF 2.52±0.32 1.45±0.29 MMP-2 2.00±0.26 1.06±0.09 MMP-9 2.12±0.36 1.06±0.14 VEGF 4.28±0.53 2.34±0.41 MMP-2 3.3±0.21 1.07±0.73 MMP-9 3.26±0.14 1.08±0.11

3 讨 论

VEGF主要来源于腹腔内活化的巨噬细胞，由两个相同的亚基以二硫键交联结合形成的二聚体糖蛋白，具有高度保守性。VEGF是现在大家公认的最重要的促血管形成因子及血管形成的先决条件，其功能主要有促进血管内皮细胞增殖和迁移生长，它还能增加微血管通透性，加速血管生长。高浓度的VEGF可促使子宫内膜异位症患者的子宫内膜中病灶处生成新生血管，使其易于在腹膜表面种植和生长[3]。Fujii等[4]发现EMs患者中高表达的VEGF能维持异位内膜的血管保持较高的活性，加速异位内膜在该部位进一步增生和浸润至盆腔和腹膜内组织，扩大病灶的深度及范围，形成腹腔的异位灶。高浓度的VEGF还能作用于内皮细胞，促进内皮增生和增加血管通透性，促进包括纤维蛋白原在内的血浆蛋白的渗出，加速异位内膜的种植和生长[5]。刘淑艳[6]报道EMs组各期术前血清及腹腔液中VEGF浓度均高于对照组，随着分期的增加，其浓度显著升高(P＜0.05)，手术后VEGF浓度显著下降，但仍高于对照组(P＜0.05)。

MMP-2和MMP-9是含Zn2+的参与降解细胞外基质(Extracellular matrix，ECM)及基底膜的最重要的蛋白酶，主要由巨噬细胞、单核细胞、破骨细胞、成纤维细胞、血管内皮细胞以及各种肿瘤细胞产生，是降解ECM的主要酶类之一。MMP-2和MMP-9在异位内膜中高表达，能降解ECM，有利于细胞迁移，促进新生血管生成和重建，同时与整合素相互作用来加强细胞之间的粘附作用[7]。袁国平等[8]研究表明，EMs组MMP-2和MMP-9表达水平显著高于健康对照组，且Ⅲ～Ⅳ期EMs患者表达显著高于Ⅰ～Ⅱ期(P＜0.001)。黄丽霞等[9]报道EMs组MMP-9和VEGF的表达较治愈组和对照组明显升高(P＜0.05)，治愈后其表达与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05)，并进一步证实MMP-9和VEGF的表达呈正相关关系(r=0.805)。

本研究结果表明，血清和腹腔液VEGF浓度为Ⅲ～Ⅳ期＞Ⅰ～Ⅱ期＞非EMs组，各组间均有非常显著性差异。而血清和腹腔液中MMP-2和MMP-9均为Ⅲ～Ⅳ期显著高于Ⅰ～Ⅱ期和非EMs组，但Ⅰ～Ⅱ期和非EMs组比较差异无统计学意义(P＞0.05)，与文献报道的结果基本一致[7]。提示血清和腹腔液中的VEGF、MMP-2和 MMP-9浓度可作为EMs分期依据，即血清和腹腔液中单纯的VEGF升高可能为Ⅰ期或Ⅱ期EMs患者，VEGF、MMP-2和MMP-9三者均升高可能为Ⅲ或Ⅳ期EMs患者。本研究还发现EMs组和非EMs组腹腔液中VEGF浓度显著高于血清浓度，而MMP-2和MMP-9血清中的浓度显著高于腹腔液(P＜0.01)，表明VEGF、MMP-2和MMP-9在循环和局部的分布不同，其生理和病理意义也不同。VEGF、MMP-2和MMP-9浓度变化与EMs患者的病理分期也具有一定的意义，Ⅰ～Ⅱ期和Ⅲ～Ⅳ期EMs患者VEGF分别升高2倍及4倍以上，因此，血清和腹腔液中VEGF、MMP-2及MMP-9浓度升高有助于EMs的辅助诊断及临床分期，腹腔液中的VEGF、MMP-2和MMP-9升高的幅度越大越有参考价值。但是腹腔液标本难于获取，从患者的安全角度考虑，采用血清检测风险更小，更易于临床推广应用。

[1]Szenajch J,Wcislo G,Jeong JY,et al.The role of erythropoietin and its receptor in growth,survival and therapeutic response of human tumor cells from clinic to bench:a critical review[J].Biochim Biophys Acta,2010,1806(1):82-95.

[2]乐杰.妇产科学[M].6版.北京:人民卫生出版社,2004,354-362.

[3]Taylor RN,Yu J,Torres PB,et al.Mechanistic and therapeutic implications of angiogenesis in endometriosis[J].Reprod Sci,2009,16 (2):140-146.

[4]Fujii EY,Nakayama M,Nakagawa A.Concentrations of receptor for advanced glycation end products,VEGF and CML in plasma,follicular fluid and peritoneal fluid in women with and without endometriosis[J].Reprod Sci,2008,15(10):1066-1074.

[5]姚红梅,郭静,石秀玲.VEGF、CD44v6、MMP-9在子宫内膜异位症组织中的表达及临床意义[J].济宁医学院学报,2013,36(2): 124-126.

[6]刘淑艳.子宫内膜异位症患者外周血和腹腔液中血管生成素-2和血管内皮细胞生长因子水平的检测及临床意义[J].海南医学, 2010,21(10):86-87.

[7]李璐,钟惠珍.MMP-9、bFGF在子宫内膜异位症患者血清与腹腔液中表达的相关性研究[J].中国现代医生,2012,50(34):63-64.

[8]袁国平,陈俊杰,谢芳.MMP-2、MMP-9及其组织抑制因子在子宫内膜异位症中的表达[J].中国卫生检验杂志,2014,24(9): 1267-1268.

[9]黄丽霞,马利国,蔡如玉,等.子宫内膜异位症患者在位内膜的MMP-9和VEGF的表达[J].海南医学,2015,26(23):3478-3480.

Application value of testing VEGF,MMP-2 and MMP-9 in the diagnosis of endometriosis.

ZHU Feng,PENG Qi-song,JU Rong.Department of Clinical Laboratory,the Jiangning Hospital of Nanjing,Nanjing 211100,Jiangsu,CHINA

ObjectiveTo detect the levels of vascular endothelial growth factor(VEGF),matrix metalloproteinase-2(MMP-2)and matrix metalloproteinase-9(MMP-9)in sera and peritoneal fluid,and to study their relationship with the diagnosis and staging of endometriosis(EMs).MethodsThe concentrations of VEGF,MMP-2 and MMP-9 were determined by enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA)in sera and peritoneal fluid from 64 patients with EMs(EMs group)from Jan.2012 to Dec.2014 in the Department of Gynaecology in our hospital.The results were compared with those of 30 patients with hysteromyoma(non-EMs group).ResultsThe concentrations of VEGF,MMP-2,MMP-9 were (235.7±61.2)ng/L,(196.3±51.8)μg/L,(231.6±44.0)μg/L in sera in EMs group and(856.2±260.5)ng/L,(45.1±13.6)μg/L and(53.4±19.0)μg/L in peritoneal fluid in EMs group.The concentrations of VEGF,MMP-2 and MMP-9 in sera and peritoneal fluid in EMs group were significantly higher than those of the non-EMs group,and the concentrations were significantly higher in EMs patients ofⅢ～Ⅳstage than those in EMs patients ofⅠ～Ⅱstage and non-EMs group(P＜0.01),and also in EMs patients ofⅠ～Ⅱstage than those in non-EMs group(P＜0.01).ConclusionThe higher expression of VEGF, MMP-2 and MMP-9 in serum and peritoneal fluid in EMs patients suggested that they were associated with the occurrence and development of EMs.Detecting the concentrations can be helpful for the diagnosis and stage evaluation.

Endometriosis(EMs);Vascular endothelial growth factor(VEGF);Matrix metalloproteinase-2 (MMP-2);Matrix metalloproteinase-9(MMP-9)

R711.71

A

1003—6350（2016）06—0880—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2016.06.007

2015-08-20)

朱锋。E-mail：924243146@qq.com