姚利阳，张 宇，张立宇，李 岩，刘俊希

(佳木斯大学药学院，黑龙江省生物药制剂重点实验室，黑龙江佳木斯 154007)



黑果花楸与2种小浆果中黄酮类物质及多糖含量比较

姚利阳，张 宇*，张立宇，李 岩，刘俊希

(佳木斯大学药学院，黑龙江省生物药制剂重点实验室，黑龙江佳木斯 154007)

小浆果泛指体积较小、多汁的一类果树的果实，主要包括蓝莓、蓝靛果、黑果花楸、树莓、黑加仑、蔓越橘等[1-5]，它们具有较高的营养价值和独特的口感，深受人们的喜爱。小浆果富含维生素和多种生物活性物质[6-7]，在预防慢性疾病和维持人体健康方面有较好的作用。

蓝莓(Blueberry)，又称越橘、蓝浆果，杜鹃花科(Ericaceae)越橘属(Vaccinium)。蓝莓果实中天然色素含量最高[8]，如原花青素、花色苷；除此之外，还含有糖类、有机酸、维生素C、多种微量元素和食用纤维等。由于其含有多种生物活性物质，因此具有抗肿瘤、清除体内自由基、提高免疫力等多种生理活性功能[9-10]。蓝靛果(Loniceraedulis)，又称黑瞎子果、山茄子，忍冬科(Caprifoliaceae)忍冬属(Lonicera)。蓝靛果果实营养丰富，富含糖类、有机酸、维生素和黄酮类等化合物[11-12]，其制成的果汁含有大量的花色苷物质，具有极高的营养价值。现代医学研究表明，蓝靛果具有清热解毒、降血脂、降血压、改善肝脏的解毒功能，还能缓解放疗和化疗后的不良症状[13-14]。黑果花楸(Aroniamelanocarpa)，蔷薇科(Rosaceae)腺肋花楸属(Aronia)。黑果花楸含有丰富的维生素和黄酮类物质[15-16]，对高血压、心脑血管疾病具有特殊的预防和治疗效果。

以上3种小浆果中，蓝莓和蓝靛果在市场上的研发产品较多，而关于黑果花楸的研发产品较少。笔者对这3种小浆果中花色苷、总黄酮、多糖的含量进行测定，并进行比较分析，以期为黑果花楸深加工产品的开发提供理论依据。

1材料与方法

1.1材料

1.1.1原材料。蓝莓、蓝靛果购于黑龙江省伊春市，黑果花楸购于黑龙江省黑河市，均由佳木斯大学药学院张宇教授鉴定。

1.1.2主要试剂。葡萄糖对照品、浓硫酸、乙醇、苯酚、盐酸、三氯化铝、乙酸、乙酸钠、氯化钾，均为分析纯。

1.1.3主要仪器。RE-52 A 旋转蒸发仪，上海亚荣生化仪器厂；DL-5-B低速大容量离心机，上海安亭科学仪器厂；FA2004电子天平，上海恒平科学仪器有限公司；RHS-25 pH计，上海仪电科学仪器股份有限公司；765紫外可见分光光度计，上海仪电分析仪器有限公司；HH-S26S恒温水浴锅，山东鄄城华鲁电热仪器有限公司。

1.2方法

1.2.1花色苷含量测定。

1.2.1.1缓冲液的配置。pH 1.0 缓冲液：精密称取1.49 g 氯化钾，用蒸馏水定容至100 mL，精密量取1.7 mL盐酸，用蒸馏水定容至100 mL；将0.2 mol/L氯化钾与0.2 mol/L盐酸以25∶67的比例混合，用氯化钾溶液调节pH(1.0±0.1)。pH 4.5 缓冲液：精密称取1.64 g乙酸钠，用蒸馏水定容至100 mL，用盐酸调节pH(4.5±0.1)。

1.2.1.2花色苷的提取。分别称取10 g 3种小浆果的冻果样品，解冻数分钟后，用研钵研碎，置于200 mL锥形瓶中。按料液比为1∶10(m/V)加入100 mL 1%酸化乙醇溶液。在40 ℃的条件下，超声辅助提取45 min后过滤并收集滤液。将滤渣再次置于锥形瓶中，按上述条件再提取2次。合并3次收集的滤液，置于圆底烧瓶中，45 ℃旋转蒸发浓缩得到紫黑色黏稠粗提液。

1.2.1.3花色苷含量测定方法。该试验根据花色苷在pH 1.0时，在510 nm波长处有最大光吸收，而在pH 4.5时，花色苷转变为无色查尔酮形式，在510 nm波长处无吸收，所以可以利用pH示差法计算溶液中花色苷的含量。计算公式如下：

式中，A=pH1.0-pH4.5；V为提取液总体积；n为稀释倍数；M为矢车菊-3-葡萄糖苷(Cy-3-Glu)的相对分子质量(449)；ε为Cy-3-Glu的消光系数(29 600)；m为样品质量(g)。

1.2.2总黄酮含量测定。

1.2.2.1显色试剂的配置。精密称取三氯化铝1.34g，50%乙醇溶液定容至100ml，配成0.1mol/L的溶液。精密称取无水乙酸钠1.76g，蒸馏水溶解至100ml，配成0.2mol/L的溶液。精密量取1.15ml冰醋酸，蒸馏水定容至100ml，配成0.2mol/L的醋酸溶液。将配制好的醋酸钠溶液和冰醋酸溶液按比例混合，制得pH为5.2的缓冲溶液。

1.2.2.2芦丁标准曲线的绘制。精密称取芦丁0.02g，用50%乙醇溶液定容至100ml，制成0.2mg/ml的芦丁标准品溶液。精密吸取芦丁标准品溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2ml，置于10ml容量瓶，加入2.0ml0.1mol/L的三氯化铝溶液，pH为5.2的醋酸钠-醋酸缓冲溶液1.0ml，用50%乙醇定容至4ml，40 ℃水浴显色15min，在510nm波长处测定吸光度。

1.2.2.3总黄酮的提取。分别称取10g3种小浆果冻果样品，解冻数分钟后，用研钵研碎，置于200ml锥形瓶中。按料液比为1∶10(M/V)加入100ml50%乙醇溶液。在40 ℃下，超声波辅助提取40min后过滤并收集滤液。将滤渣再次置于锥形瓶中，按上述条件再提取2次。合并3次收集的滤液，置于圆底烧瓶中，减压浓缩得到黄酮粗提液。

1.2.2.4总黄酮含量测定方法。精密量取1.0ml的黄酮粗提液，用50%乙醇溶液定容至10ml。从中吸取1.0ml加入到10ml容量瓶中，按“1.2.2.1”项下方法进行显色，再在510nm波长处测定吸光度(平行3次)。利用芦丁标准曲线计算总黄酮的含量。

1.2.3多糖含量测定。

1.2.3.1葡萄糖标准曲线的绘制。精密称取105 ℃干燥至恒重的葡萄糖10.00mg，置于100ml容量瓶中，加蒸馏水溶解并稀释至刻度，摇匀，配得葡萄糖标准溶液。精密吸取葡萄糖标准溶液 0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2ml，分别置于10ml容量瓶中，加入蒸馏水补至2.0ml，然后再加入5%苯酚溶液1.0ml，摇匀，迅速加入浓硫酸 5.0ml。摇匀，沸水浴15min后，在冷水中冷却至室温。在490nm波长处测吸光度。

1.2.3.2多糖的提取。分别称取10g3种小浆果的冻果样品，解冻数分钟后，用研钵研碎，置于200ml锥形瓶中。按料液比为1∶8(M/V)加入80ml蒸馏水。在90 ℃的恒温水浴锅中提取4h。取出，8层纱布过滤、离心。取上清液，旋转蒸发浓缩至原体积的 1/8，加入乙醇，使乙醇体积分数达到 80%，静置24h。离心取沉淀，依次用丙酮、乙醚和乙醇洗涤脱脂，真空干燥，制得粗多糖。

1.2.3.3多糖含量测定方法。精密称取5.00mg粗多糖，置于50ml的容量瓶中，加蒸馏水溶解并稀释至刻度，摇匀。从中精密吸取1.0ml溶液加入到10ml容量瓶中，按“1.2.3.1”项下方法进行显色后，在波长490nm波长处测吸光度(平行3次)。利用葡萄糖标准曲线计算多糖的含量。

2结果与分析

2.1花色苷含量测定结果根据“1.2.1”的方法测得3种小浆果样品的花色苷含量见表1。由表1可见，蓝莓、蓝靛果、黑果花楸的花色苷含量依次为0.151 9、0.286 6、0.352 0mg/g，其中黑果花楸中花色苷含量最高，蓝莓中花色苷含量相对最少。

表1　花色苷含量测定结果

2.2总黄酮含量测定结果

2.2.1芦丁标准曲线。以芦丁的浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线，并进行线性回归，得回归方程：A= 25.235C+0.070 2，R2=0.993 2，线性范围为0.012～0.076 mg/ml。

2.2.2总黄酮含量分析比较。由表2可见，供试的蓝莓、蓝靛果、黑果花楸中的总黄酮含量依次为1.917、1.695、2.636 mg/g，其中黑果花楸黄酮含量最高，蓝靛果中黄酮含量相对较低。

表2　总黄酮含量测定结果

2.3多糖含量测定结果

2.3.1葡萄糖标准曲线。以葡萄糖的浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线，并进行线性回归，得回归方程：A=7.702 9C-0.019 9，R2=0.995 3，线性范围为0.02～0.12 mg/ml。

2.3.2多糖含量分析比较。由表3可见，供试样品蓝莓、蓝靛果、黑果花楸中多糖含量依次为1.315、1.455、1.764 mg/g，其中黑果花楸中多糖含量相对最高，而蓝莓中多糖含量相对最低。

表3　多糖含量测定结果

3结论与讨论

从试验测得的花色苷、总黄酮和多糖的含量分析来看，蓝莓、蓝靛果和黑果花楸均含有这3种物质，且其含量顺序为：花色苷，黑果花楸>蓝靛果>蓝莓；总黄酮，黑果花楸>蓝莓>蓝靛果；多糖，黑果花楸>蓝靛果 >蓝莓。蓝莓被誉为“浆果之王”，营养成分丰富。有研究指出，蓝莓的花青素含量是所有的水果与蔬菜中含量最高的。而通过该试验发现，黑果花楸中的花色苷、总黄酮及多糖的含量均高于蓝莓和蓝靛果，具有较高的营养价值，同时还有比蓝莓更好的开发和应用价值。

目前市场上研发的蓝莓和蓝靛果的产品较多，而关于黑果花楸产品较少，因此该类产品具有较大的潜在经济价值。该试验可以为黑果花楸加工商品提供理论依据和含量依据，为黑果花楸的深加工产品的开发应用奠定基础。

参考文献

[1] 聂绍荃.黑龙江植物资源志[M].哈尔滨：东北林业大学出版社，2003.

[2] 刘坤，蒋明杉，于志清.树莓、越桔、欧李等小浆果的发展前景[J].北方果树，2008，29(2)：250-253.

[3] 王辉，王鹏云，王蜀，等.我国蓝莓的发展现状及前景[J].农业现代化研究，2004(2)：30-33.

[4] 霍俊伟，杨国慧，雎薇，等.蓝靛果忍冬种质资源研究进展[J].园艺学报，2005，32(1)：159-164.

[5] 韩文忠，马兴华.黑果腺肋花楸的生物学特性和应用价值[J].辽宁林业科技，2005(4)：40-42.

[6] 张静茹，陆致成，李江，等.我国东北高寒地区野生浆果资源研究与利用[J].中国野生植物资源，2009(6)：33-36.

[7] 王华，徐榕，李娜，等.几种小浆果生物活性物质研究进展[J].北方园艺，2011(8)：198-203.

[8] 李知敏.蓝莓花色苷的分离纯化及其初步药效学实验研究[D].重庆：重庆大学，2006.

[9] TAVERNITI V，DANIELA F，DEL BO’ C，et al.Immunomodulatory effect of a wild blueberry anthocyanin-rich extract in human Caco-2 intestinal cells[J].Journal of agricultural and food chemistry，2014，62(33)：8346-8351.

[10] SUN X，LIU N，WU Z，et al.Anti-tumor activity of a polysaccharide from blueberry[J].Molecules，2015，20(3)：3841-3853.

[11] 李淑芹，李延冰，都昌杰.蓝靛果中黄酮类成分初探及总含量测定[J].东北农业大学学报，1996，27(1)：99-101.

[12] SOCHOR J，JURIKOVA T，POHANKA M，et al.Evaluation of antioxidant activity，polyphenolic compounds，amino acids and mineral elements of representative genotypes ofLoniceraedulis[J].Molecules，2014，19(5)：6504-6523.

[13] ZHAO H T，WANG Z Y，MA F M.Protective effect of anthocyanin fromLoniceracaeruleavar.edulis on radiation-induced damage in mice[J].International journal of molecular sciences，2012，13(9)：11773-11782.

[14] 郑永霞.花色素苷药理功效的研究进展[J].山西医药杂志，2008，37(3)：255-257.

[15] KULLING S E，RAWEL H M.Chokeberry(Aroniamelanocarpa)- A review on the characteristic componentsand potential health effects [J].Planta Med，2008，74(10)：1625-1634.

摘要[目的] 为黑果花楸相关加工产品提供理论和含量依据。[方法]以黑果花楸、蓝莓和蓝靛果为材料，采用紫外-分光光度法测定3种小浆果多糖及总黄酮含量，pH示差法测定花色苷含量，并进行比较分析。[结果]黑果花楸全果的花色苷、总黄酮、多糖含量均高于蓝莓和蓝靛果，在所测3种小浆果中最高，分别为0.352 0、2.636、1.764 mg/g。[结论]黑果花楸中花色苷、总黄酮、多糖含量较高，具有很高的营养价值和药用价值，有待进一步开发利用。

关键词蓝莓；蓝靛果；黑果花楸；花色苷；多糖

Comparison of Flavonoids and Polysaccharides Contents betweenAroniamelanocarpaand Two Kinds of Small Berries

YAO Li-yang, ZHANG Yu*, ZHANG Li-yu et al(Key Laboratory of Biological Medicine Preparations, Institute of Pharmacy, Jiamusi University, Jiamusi Heilongjiang 154007)

Abstract[Objective] To provide theoretical and content basis for the related processing products ofAroniamelanocarpa.[Method] WithA.melanocarpa, blueberry andLoniceraedulisas the materials, flavonoids and polysaccharides contents in the three small berries were detected by UV-VIS spectrophotometry. Anthocyanin content was detected by pH differential method. And comparative analysis was carried out. [Result] Anthocyanin, flavonoids and polysaccharides contents inA.melanocarpawere all higher than those in blueberry andL.edulis, which were 0.352 0, 2.636 and 1.764 mg/g, respectively. [Conclusion]A.melanocarpahas relatively high contents of anthocyanin, flavonoids and polysaccharides, which is of high medicinal and nutritional values, and is worthy of further research.

Key wordsBlueberry;Loniceraedulis;Aroniamelanocarpa; Anthocyanin; Polysaccharide

收稿日期2015-12-07

作者简介姚利阳(1994- )，男，安徽滁州人，硕士研究生，研究方向：天然药物有效成分的分离及结构研究。*通讯作者，教授，硕士，硕士生导师，从事天然药物有效成分的分离及结构研究。

中图分类号S 38

文献标识码A

文章编号0517-6611(2016)01-122-03