丁　曼，华　洁，周福军，侯文彬*

(1．天津中医药大学，天津　300193；2．天津药物研究院，天津　300193)



和胃颗粒质量标准研究

丁曼1，华洁2，周福军2，侯文彬2*

(1．天津中医药大学，天津300193；2．天津药物研究院，天津300193)

摘要：目的建立和胃颗粒的质量标准。方法采用薄层色谱法(TLC)对和胃颗粒中厚朴、枳实、陈皮、木香、白术药材进行定性鉴别；采用高效液相色谱法 (HPLC)对厚朴酚、和厚朴酚进行定量测定。结果采用薄层色谱法均能检出厚朴、枳实、陈皮、木香、白术，空白样品无干扰，专属性强；厚朴酚进样量在0.050 88～1.017 6 μg(r=0.999 7)、和厚朴酚进样量在0.024 8～0.496 μg(r=0.999 9)范围内与峰面积的线性关系良好；平均回收率厚朴酚为101.1%，RSD=1.5%(n=9)，和厚朴酚为97.9%，RSD=2.8%(n=9)。结论该法简便、准确、重复性好，可用于和胃颗粒的质量控制。

关键词：和胃颗粒；质量标准；薄层色谱；高效液相色谱

和胃颗粒源于临床经验方，是由厚朴、枳实、陈皮、木香、白术、乌药、黄芪、肉蔻和砂仁九味药材经提取，与适宜的辅料混合，制备而成的颗粒剂，具有消痞除满、理气和胃的作用，用于治疗功能性消化不良(FD)等疾病。FD占消化性疾病的20%～40%[1]，发病率较高。因此，研究药品的质量标准，对开发出疗效确切、质量稳定可控的新药尤为重要。为了有效地控制药品质量，本实验对所研制的和胃颗粒中厚朴、枳实、陈皮、木香、白术进行薄层定性鉴别，采用高效液相色谱法测定制剂中厚朴的厚朴酚、和厚朴酚的含量。

1仪器与试药

1.1仪器HP1100液相色谱仪；Agilent chemstation色谱工作站；G1310A泵；G1313A自动进样器；G1316A柱温箱；G1314A紫外检测器；AE50型电子天平(瑞士Mettler Toledo公司)；SB-3200DTN超声波清洗机(宁波新芝生物科技股份有限公司)；FW100高速万能粉碎机(天津市泰斯特仪器有限公司)；25 μL微量进样器。

1.2试药高效液相用甲醇为色谱纯(天津市康科德科技有限公司)；其他试剂均为分析纯；水为娃哈哈纯净水；硅胶G高效薄层板(规格：100×100 mm，青岛海洋化工厂)；厚朴对照药材(批号121285-200902)、木香对照药材(批号921-9001)、枳实对照药材(批号936-9001)，均购买于中国药品生物制品检定所；陈皮对照药材(批号120969-201109)、白术对照药材(批号120925-201109)、和厚朴酚对照品(批号110730-201112)、厚朴酚对照品(批号110729-200412)、橙皮苷对照品(批号110721-201115)、去氢木香内酯对照品(批号111525-201008),均购自中国食品药品检定研究院；和胃颗粒(批号20140505，20140507，20140509)由天津药物研究院自制；不含厚朴、枳实、陈皮、木香、白术的空白样品均为天津药物研究院自制。

2方法与结果

2.1TLC鉴别

2.1.1厚朴TLC鉴别取和胃颗粒(批号20140505)研细，称取3.6 g，加石油醚(60～90 ℃)25 mL,置于三角瓶中，密塞，温水(50 ℃)中水浴1 h，滤过，将滤液浓缩后，加入乙酸乙酯1 mL，水浴加热使残渣溶解，作为供试品；取厚朴对照药材0.35 g，同供试品的制备方法制成厚朴对照药材样品。另取空白样品(不含厚朴)，同法制成厚朴空白样品。再精密称取和厚朴酚对照品、厚朴酚对照品各1 mg，溶解于1 mL甲醇中，制成每毫升含厚朴酚、和厚朴酚各1 mg的混合溶液，作为对照品。依照薄层色谱法[2]试验，用点样器吸取空白样品、对照品、对照药材样品、供试品4种溶液各2 μL，点于同一硅胶G高效薄层板上，置于丙酮∶环己烷(3∶10)[3]溶液中进行展开，展距约8 cm，取出，吹干，均匀喷以香草醛硫酸(10 g·L-1)溶液，加热至斑点显色清晰。薄层板上，厚朴对照药材、对照品与供试品色谱有相同颜色的斑点显示在同一位置上。厚朴空白样品与厚朴对照药材和对照品色谱无相对应颜色的斑点，无干扰。

2.1.2枳实TLC鉴别取和胃颗粒(批号20140505)研细，称取1.8 g，加甲醇25 mL，置于三角瓶中，在40 ℃、40 kHz条件下，超声波提取30 min，滤过，将滤液浓缩后，向三角瓶中加甲醇2 mL，超声使残渣溶解，作为供试品；取枳实对照药材0.3 g，同供试品的制备方法制成枳实对照药材样品；另取空白样品(不含枳实、陈皮)，同法制成枳实空白样品。依照薄层色谱法试验，用点样器吸取枳实空白样品、对照药材样品、供试品3种溶液各2 μL，点于同一硅胶G高效薄层板上，置于乙酸乙酯∶三氯甲烷∶丙酮(8∶2∶0.5)[4]溶液中进行展开，展距约8 cm，取出，吹干，在紫外光灯(365 nm)下进行观察。薄层板上，对照药材色谱与供试品色谱有相同颜色的蓝色荧光斑点显示在同一位置上。枳实空白样品与枳实对照药材色谱无相对应颜色的斑点，无干扰。

2.1.3陈皮TLC鉴别取和胃颗粒(批号：20140505)研细，称取1.8 g，加甲醇25 mL置于三角瓶中，在40 ℃、40 kHz条件下，超声波提取30 min，滤过，将滤液浓缩后，向三角瓶中加甲醇2 mL，超声使残渣溶解，作为供试品；取陈皮对照药材0.3 g，同供试品的制备方法制成陈皮对照药材样品；另取空白样品(不含陈皮、枳实)，同法制成陈皮空白样品。再取适量的橙皮苷对照品加甲醇制成饱和溶液，作为对照品。依照薄层色谱法试验，用点样器分别吸取对照品5 μL，陈皮空白样品、对照药材样品、供试品3种溶液各2 μL，点于同一用氢氧化钠(5 g·L-1)溶液制备的硅胶G薄层板上，置于乙酸乙酯∶甲醇∶水(100∶30∶13)[5]溶液中进行展开，展距约8 cm，取出，吹干，喷以三氯化铝乙醇(10 g·L-1)溶液，在紫外光灯(365 nm)下进行观察。薄层板上，陈皮对照药材色谱和对照品色谱与供试品色谱有相同颜色的黄色荧光斑点显示在同一位置上。陈皮空白样品与陈皮对照药材和对照品色谱无相对应颜色的斑点，无干扰。

2.1.4木香TLC鉴别取和胃颗粒(批号20140505)研细，称取5 g，加石油醚(60～90 ℃)25 mL，置于三角瓶中，密塞，温水(50 ℃)中水浴1 h，滤过，将滤液浓缩后，向其加入乙酸乙酯0.5 mL，水浴加热使残渣溶解，作为供试品；取木香对照药材0.1 g，同供试品的制备方法制成木香对照药材样品；另取空白样品(不含木香)，同法制成木香空白样品。再精密称取去氢木香内酯对照品1 mg，溶解于2 mL甲醇中，制成每毫升含去氢木香内酯0.5 mg的溶液作为对照品。依照薄层色谱法试验，用点样器分别吸取木香空白样品和供试品各10 μL、对照品5 μL，对照药材样品2 μL，点于同一硅胶G高效薄层板上，置于正己烷∶乙酸乙酯(4∶1)[6]溶液中进行展开，展距约8 cm，取出，吹干，向其均匀喷以硫酸乙醇(100 mL·L-1)溶液，加热至斑点显色清晰。薄层板上，木香对照药材和对照品色谱与供试品色谱有相同颜色的紫红色斑点显示在同一位置上。木香空白样品与木香对照药材和对照品色谱无相对应颜色的斑点，无干扰。

2.1.5白术TLC鉴别取和胃颗粒(批号：20140505)研细，称取5 g，加石油醚(60～90 ℃)25 mL,置于三角瓶中，密塞，温水(50 ℃)中水浴1 h，滤过，将滤液浓缩后，向其加入石油醚(60～90 ℃)0.5 mL，水浴加热使残渣溶解，作为供试品；取白术对照药材0.75 g，同供试品的制备方法制成白术对照药材样品；另取空白样品(不含白术)，同法制成白术空白样品。照薄层色谱法试验，用点样器吸取白术空白样品、对照药材样品、供试品3种溶液各10 μL，点于同一硅胶G高效薄层板上；置于乙酸乙酯∶石油醚(60～90 ℃)(1∶2)[7]溶液中进行展开，展距约8 cm，取出，吹干，向其均匀喷以5%对二甲氨基苯甲醛的10%硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。薄层板上，白术对照药材色谱与供试品色谱有相同颜色的斑点显示在同一位置上。白术空白样品与对照药材色谱无相对应颜色的斑点，无干扰。

2.2HPLC法测定厚朴中和厚朴酚、厚朴酚的含量[2]

2.2.1色谱条件色谱柱为艾杰尔Promosil C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：甲醇-1 mL·L-1磷酸溶液(70∶30)；体积流量：1.0 mL·min-1；检测波长：294 nm；柱温：30 ℃。

2.2.2对照品溶液的制备精密称取厚朴酚对照品0.5 mg、和厚朴酚对照品0.25 mg，溶解于1 mL甲醇中，制成每毫升含和厚朴酚0.25 mg、厚朴酚0.5 mg的溶液，作为对照品储备液。精密吸取对照品储备液1 mL,置于10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。

2.2.3供试品溶液的制备取和胃颗粒(批号20140505)研细，精密称取约0.6 g，置于具塞锥形瓶中，精密加甲醇25 mL，称定质量，在40 ℃、40 kHz条件下，超声波提取20 min，放冷，用甲醇补足损失的质量，摇匀，过滤后的滤液作为供试品溶液。

2.2.4空白样品溶液的制备取不含厚朴的空白样品，按2.2.3项制成厚朴空白样品溶液。

2.2.5专属性实验精密吸取供试品、对照品和空白样品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，按照2.2.1项下色谱条件进行测定。空白样品色谱图中，在与供试品及对照品色谱图中相应的保留时间处无色谱峰出现，表明空白样品无干扰。结果见图1。

图1和胃颗粒的HPLC色谱图

A.供试品；B．空白样品；C．对照品；1．和厚朴酚；2．厚朴酚

Fig.1 HPLC chromatograms of Hewei Granules

A．sample；B．blank sample；C．reference substances；1．honokiol；2．magnolol

2.2.6线性关系考察精密吸取2.2.2项下对照品储备液0.1，0.5，1.0，1.5和2.0 mL，置于10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，分别吸取上述溶液各10 μL，注入液相色谱仪，测其峰面积。以峰面积积分分值为纵坐标，以对照品溶液的进样量为横坐标，进行线性回归，得回归方程：和厚朴酚Y=1 691.9X+1.964 8，r=0.999 9，n=5，结果表明，和厚朴酚进样量在0.024 8～0.496 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系；厚朴酚Y=3 189.2X-8.262 2，r=0.999 7，n=5，结果表明，厚朴酚进样量在0.050 88～1.017 6 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.2.7精密度试验取2.2.2项下对照品溶液(和厚朴酚0.024 8 g·L-1，厚朴酚0.050 88 g·L-1)注入液相色谱仪，连续进样6次，记录峰面积。计算和厚朴酚、厚朴酚峰面积积分分值RSD分别为1.36%和1.12%。

2.2.8稳定性试验取2.2.3项下供试品溶液，分别于0，7，20 h精密吸取供试品溶液10 μL，注入液相色谱仪，测定峰面积积分分值，计算RSD，和厚朴酚、厚朴酚峰面积积分分值RSD分别为0.62%和0.79%，表明供试品溶液在20 h内稳定性良好。

2.2.9重复性试验取和胃颗粒(批号20140505)研细，精密称取0.6 g，6份，分别置于具塞锥形瓶中，分别加入甲醇25 mL，称定质量，超声波提取20 min，放冷，用甲醇补足损失的质量，摇匀，滤过，即得。按照2.2.1项下色谱条件，精密吸取10 μL分别注入液相色谱仪，记录色谱图。计算和厚朴酚含量平均值为0.99 mg·g-1，RSD为1.22%；厚朴酚含量平均值为1.99 mg·g-1，RSD为1.90%，结果表明重复性试验结果良好。

2.2.10加样回收试验取和胃颗粒(批号20140505)研细，精密称取样品9份，每份0.3 g，每3份分别加入相当于样品量80%，100%和120%的对照品溶液，按“供试品溶液的制备”项下处理，制备9份供试品溶液，按2.2.1项色谱条件，精密吸取供试品溶液和对照品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，依法测定，计算回收率，结果见表1和表2。

表1和厚朴酚加样回收试验结果

Tab.1 Results of recovery tests of honokiol

(n=9)

表2厚朴酚加样回收试验结果

Tab.2 Results of recovery tests of magnolol

(n=9)

2.2.11样品测定取3批和胃颗粒(批号20140505，20140507，20140509)，按“供试品溶液的制备”项下处理，分别对3批样品中和厚朴酚、厚朴酚的含量进行测定。结果3 批样品中和厚朴酚的含量分别为2.94，2.97和2.88 mg·袋-1；厚朴酚的含量分别为6.12，6.09和6.03 mg·袋-1。

3讨论

原文献中木香鉴别采用木香烃内酯和去氢木香内酯对照品作对照，但在实验过程中，采用多种方法进行摸索后，还是发现供试品色谱中与木香烃内酯对照品对应位置上的斑点时有时无，说明此方法对木香烃内酯的重复性不佳，故不用木香烃内酯对照品作对照。

本文考察了加热回流提取法和超声提取法的提取效果，结果表明，2种方法对含量测定结果影响不大，但超声提取方法简单易行。因此，选择超声提取的方法为和胃颗粒中和厚朴酚、厚朴酚含量测定的样品提取方法；考察不同的提取溶剂体积分数70%的乙醇和甲醇，2种提取溶剂对含量测定结果影响不大，但用甲醇为溶剂，样品易过滤，故选择甲醇为和胃颗粒中和厚朴酚、厚朴酚含量测定的样品提取溶剂；对不同提取时间(10，20和30 min)进行考察，但对含量测定结果影响不大，为了既节省检测时间，又保证提取完全，将胃动颗粒和厚朴酚、厚朴酚含量测定样品的超声时间定为20 min。

本文采用HP1100液相色谱仪，对和厚朴酚、厚朴酚对照品在200～400 nm之间进行紫外吸收光谱扫描。结果和厚朴酚与厚朴酚均在波长292 nm处有最大吸收峰，并参考《中国药典》2010版一部厚朴药材含量测定的方法，因此，选择与药典方法一致的294 nm作为和胃颗粒中厚朴的测定波长。

和胃颗粒中的厚朴能增强胃底平滑肌的运动，使胃肠蠕动加快，利于胃排空[8]，具有下气除满等功效，为方中君药。枳实[9]、陈皮[10]能增强功能性消化不良大鼠的胃排空速率和小肠推进率，为方中臣药。本文对和胃颗粒制剂中的君药厚朴的有效成分和厚朴酚与厚朴酚采用高效液相色谱法进行了含量测定，该方法专属性强，结果准确可靠，精密度和稳定性良好；同时，采用薄层色谱法对枳实、厚朴、白术、陈皮、木香五味药材进行鉴别，对照药材色谱与供试品色谱对应良好，斑点清晰且空白样品无干扰。因此，两者能够控制和胃颗粒的质量，可作为该药的质量控制标准。

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Study on the quality standard for Hewei Granules

DING Man1，HUA Jie2，ZHOU Fujun2，HOU Wenbin2*(1．Tianjin University of Traditional Chinese Medicine，Tianjin，300193，China；2．Tianjin Institute of Pharmaceutical Research，Tianjin，300193，China)

Abstract:Objective To establish a quality standard for Hewei Granules. MethodsCortex magnolia officinalis,Fructus aurantii immaturus,Pericarpium citri reticulatae,Radix aucklandiae,and Rhizoma atractylodis macrocephalae were identified by thin layer chromatography (TLC)，and the contents of magnolol and honokiol were determined by high performance liquid chromatography(HPLC). ResultsCortex magnolia officinalis,Fructus aurantii immaturus,Pericarpium citri reticulatae, Radix aucklandiae,and Rhizoma atractylodis macrocephalae could be identified by TLC. The method was specific,and the blank sample showed no interference;the calibration curve of magnolol was linear in the range of 0.050 88-1.017 6 μg(r=0.999 7).The average recovery of magnolol was 101.1%, with RSD 1.5%(n=9); the calibration curve of honokiol was linear in the range of 0.024 8-0.496 μg(r=0.999 9). The average recovery of honokiol was 97.9%,with RSD 2.8%(n=9). Conclusion The method is simple, accurate and reproducible, so it can be used for the quality control of Hewei Granules．

Key words:Hewei Granules；quality standard；TLC；HPLC

收稿日期：(2015-04-10)

通信作者：*侯文彬，男，研究员，硕士生导师

作者简介：丁曼，女，硕士研究生

基金项目：国家“十二五”“重大新药创制”科技重大专项(2014ZX09101-021)

中图分类号：R282

文献标志码：A

文章编号：1004-2407(2016)01-0018-05

doi:10.3969/j.issn.1004-2407.2016.01.006