崔林开　刘精精　王树和　顾广杰　李法新　林晓民

摘要：为明确新奥霉素对蔬菜病原菌的抑制活性，采用菌丝生长速率法测定了新奥霉素对7种蔬菜病原菌的毒力。结果表明，新奥霉素对7种蔬菜病原菌均具有一定的抑制作用，其中对疫霉菌表现出较强的抑制作用，对大豆疫霉根腐病菌（Phytophthora sojae）、茄绵疫病菌（Phytophthora parasitica）和辣椒疫病菌（Phytophthora capsici）的EC50分别为7.18、11.17、76.90 mg/L；而对茄子褐纹病菌（Phomopsis vexans）、番茄灰霉病菌（Botrytis cinerea）、黄瓜枯萎病菌（Fusarium oxysporum）和番茄早疫病菌（Alternaria solani）的抑制作用较弱，其EC50分别为83.85、105.20、178.29、195.28 mg/L。

关键词：新奥霉素；蔬菜病原菌；疫霉菌；毒力测定

中图分类号：S482.2+8 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2015）22-5596-03

Abstract： The toxicity of Xinaomycin to 7 vegetable pathogens was determined by the methods of mycelial growth inhibition to ascertain its inhibitory activity against vegetable pathogens. The results showed that Xinaomycin had certain extent inhibition effect on 7 vegetable pathogens which had strong inhibition effect on Phytophthora. The EC50 were 7.18， 11.17， 76.90 mg/L for Phytophthora sojae， Phytophthora parasitica and Phytophthora capsici respectively. It had weak inhibition effect on Phomopsis vexans， Botrytis cinerea， Fusarium oxysporum and Alternaria solani and its EC50 were 83.85，105.20，178.29，195.28 mg/L respectively.

Key words： Xinaomycin； vegetable pathogens； phytophthora； toxicity test

中国科学院成都生物研究所从攀西地区土壤中筛选得到一株诺尔斯链霉菌（Streptomyces noursei），该菌能产生一种新型核苷类农用抗生素，命名为新奥霉素，是一种具有新化学结构的尿嘧啶核苷肽类抗生素，相对分子量为445，分子式C16H23N5O10[1]。经多轮诱变选育获得遗传改良菌株诺尔斯链霉菌XiAo-3，并通过优化提取工艺，成功获得4%新奥霉素水剂[2]。田间药效试验表明，该药剂对烟草花叶病毒病具有较好的防治效果，1 800 mL/hm2处理的防治效果高达75.69%[1]；对人参果病毒病也具有较好的防治效果，4%新奥霉素水剂500倍液处理的防治效果达79.33%[3]；同时对黄瓜细菌性角斑病和黄瓜霜霉病也具有一定的防效[4]。

新奥霉素是一种新的核苷类抗生素，具有低毒、安全、环保等优点。该药剂目前对植物病毒表现出较高的抑制活性。为了进一步开发该药剂防治其他植物病害的应用价值，明确该药剂对其他植物病原菌的抑制活性，本实验室在前期测定新奥霉素对7种作物病原真菌毒力的基础上[5]，测定了该药剂对7种蔬菜病原菌的室内毒力。

1 材料与方法

1.1 材料

供试菌株黄瓜枯萎病菌（Fusarium oxysporum）、大豆疫霉根腐病菌（Phytophthora sojae）、茄绵疫病菌（Phytophthora parasitica）、辣椒疫病菌（Phytophthora capsici）、茄子褐纹病菌（Phomopsis vexans）、番茄早疫病菌（Alternaria solani）和番茄灰霉病菌（Botrytis cinerea），均由河南科技大学林学院菌物资源及有害生物管理重点实验室提供。供试药剂为4%新奥霉素水剂由河南省济源白云实业有限公司提供。

1.2 培养基的制作

所用培养基为PDA培养基[6]和V8培养基[7]。PDA培养基：将200 g去皮的马铃薯切成薄片，加去离子水1 000 mL煮沸0.5 h，用纱布滤去马铃薯，加去离子水补足至1 000 mL，然后加15 g葡萄糖和15 g琼脂粉，加热使琼脂完全融化，然后分装在5个三角瓶中，121 ℃灭菌20 min。V8培养基：用纱布过滤V8蔬菜汁100 mL，加入0.2 g碳酸钙和15 g琼脂粉，加去离子水补足至1 000 mL，加热使琼脂完全融化，然后分装在5个三角瓶中，121 ℃滅菌20 min。

1.3 含药培养基的配制

将供试药剂用去离子水配制成所需系列浓度的100倍母液，以1∶99的比例与熔化的PDA或V8培养基混合均匀，即为配制所需浓度梯度的含药培养基。

1.4 测定方法

为准确测定新型生物杀菌剂新奥霉素对7种蔬菜病原菌的毒力，采用菌丝生长速率法测定供试菌株的EC50[8]。将供试菌株接种在PDA或V8平板上，25 ℃培养5 d后，用直径为6 mm的打孔器在菌落边缘内侧打取菌饼，菌丝面朝下移接到含不同浓度药剂的PDA或V8平板上，25 ℃黑暗培养5 d左右，十字交叉法测定菌落直径，每处理重复3次，计算抑制率。抑制率=（对照菌落直径-处理菌落直径）/（对照菌落直径-0.6 cm）×100%。将抑制率换算成概率值（y），药剂浓度换算成浓度对数（x），求得线性回归方程y=a+bx，并以回归方程计算抑制中浓度EC50。

2 结果与分析

2.1 新奥霉素对不同病原菌菌丝生长的抑制作用

从表1可知，随着新奥霉素浓度的增加，对7种蔬菜病原菌菌丝生长的抑制率也随之增大，药剂浓度与抑制率之间呈正相关。当新奥霉素浓度为50 mg/L时，对大豆疫霉根腐病菌、茄绵疫病菌、辣椒疫病菌、茄子褐纹病菌、番茄灰霉病菌、黄瓜枯萎病菌和番茄早疫病菌的抑制率分别为91.08%、67.47%、36.75%、43.40%、17.97%、28.77%和17.80%。新奥霉素对大豆疫霉根腐病菌和茄绵疫病菌表现出较强的抑制作用。

2.2 新奥霉素对不同病原菌的毒力比较

通过线性回归分析，求出毒力回归方程，相关系数均在0.94以上，说明菌丝生长抑制几率值和药剂的浓度对数之间呈现较好的线性相关性（表2）。依据毒力回归方程计算出EC50，新奥霉素对7种蔬菜病原菌的毒力由大到小依次为大豆疫霉根腐病菌、茄绵疫病菌、辣椒疫病菌、茄子褐纹病菌、番茄灰霉病菌、番茄早疫病菌、黄瓜枯萎病菌。同时，从表2中可以看出，新奥霉素对大豆疫霉根腐病菌、茄绵疫病菌和辣椒疫病菌3种疫霉菌具有较强的毒力，其EC50分别为7.18、11.17、76.90 mg/L，表现出较强的抑制作用，特别是对大豆疫霉根腐病菌的毒力最强。对茄子褐纹病菌、番茄灰霉病菌、黄瓜枯萎病菌和番茄早疫病菌的毒力较弱，其EC50分别为83.85、105.20、178.29、195.28 mg/L，表现出较弱的抑制作用。

3 小结与讨论

室内毒力测定结果表明，新奥霉素对供试的7种蔬菜病原菌的菌丝生长均具有一定抑制作用，其中对大豆疫霉根腐病菌、茄绵疫病菌和辣椒疫病菌3种疫霉菌表现出较强的抑制作用，特别是对大豆疫霉根腐病菌的毒力最强，其EC50为7.18 mg/L；而对茄子褐纹病菌、番茄灰霉病菌、番茄早疫病菌和黄瓜枯萎病菌4种病原真菌的抑制作用较弱，其EC50在83.85～195.28 mg/L之间。

新奥霉素是一种新的核苷类抗生素，是一种新开发的生物农药。目前的田间试验发现其对植物病毒具有较好的防治效果，对黄瓜细菌性角斑病和黄瓜霜霉病也具有一定的防效[1，3，4]。本实验室前期测定了新奥霉素对7种作物病原真菌的抑制效果，发现其对油菜菌核病菌和小麦纹枯病菌具有较好的防效[5]；本试验测定了新奥霉素对7种蔬菜病原菌的毒力，发现其对疫霉菌具有较强的抑制作用，特别是对大豆疫霉根腐病菌的毒力最强。这对进一步开发新奥霉素防治植物病害的应用潜力提供了理论基础。同时本实验室初步研究了新奥霉素对黄瓜细菌性角斑病菌的毒力，发现几乎没有抑制作用，而吴焜玥等[4]的田间试验结果显示新奥霉素对黄瓜细菌性角斑病具有一定的防效，分析可能是由于新奥霉素可以显著提高黄瓜初花期和结果期株高、茎粗、叶片数、叶面积和叶绿素含量，使植株生长健壮，从而提高黄瓜的抗病性，减轻植物病害的发生程度。

参考文献：

[1] 冯振群，卢 清.新型生物杀菌剂新奥霉素防治烟草花叶病毒病的田间药效[J].现代农业，2011，10（4）：50-52.

[2] 宁停波，张 婷，周金燕，等.新奥霉素发酵液的理化性质和提取方法研究[J].湖南农业科学，2011（13）：23-25，28.

[3] 俞润萍，刘海建，吕新文，等.4种药剂防治日光温室人参果病毒病效果研究[J].现代农业，2014，13（2）：47-48.

[4] 吴焜玥，张 燕，蒙 静，等.S-诱抗素和新奥霉素在日光温室黄瓜栽培中的应用研究[J].农业科学研究，2013，34（4）：39-43.

[5] 顧广杰，崔林开，王树和，等.新奥霉素对7种植物病原真菌的室内毒力测定[J].农药，2013，52（4）：293-294.

[6] 方中达.植病研究法[M].第三版.北京：中国农业出版社，1998.

[7] 郑小波.疫霉菌及其研究技术[M].北京：中国农业出版社，1997.

[8] 牛芳胜，马志强，毕秋艳，等.不同作用机制杀菌剂对番茄灰霉病菌拮抗木霉菌的毒力测定[J].农药，2012，51（8）：601-604.

（责任编辑 丁艳红）