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兽医实验室血清学诊断注意事项

2015-12-07李娟黄仁树四川省什邡市动物疫病预防控制中心

中国畜牧业 2015年5期
关键词:移液器试剂兽医

文│李娟 黄仁树(四川省什邡市动物疫病预防控制中心)

兽医实验室血清学诊断注意事项

文│李娟 黄仁树(四川省什邡市动物疫病预防控制中心)

随着畜牧业的发展,兽医实验室在动物疫病防控体系的作用日趋凸显,而实验室检测结果的准确性,直接影响后续畜牧生产指导和动物疫病防控的方向。目前兽医实验室诊断主要分三大类:血清学诊断、病毒学诊断、细菌学诊断。细菌学与病毒学检测工作在基层实验室开展得不多,使用最普遍的是血清学诊断。由于基层兽医实验工作起步晚、人员素质参差不齐等原因,在血清学诊断实验实施和操作中常出现一些问题,笔者就该实验应该注意的问题进行了总结和分析,旨在提高动物疫病的实验室检测能力和水平,增强动物疫病防控的针对性和有效性。

一、血液样品的采集、保存和运送

1.血液采集和血清制取中应注意问题。在血清学诊断中,诊断样品主要是血清。对于不同的畜禽采血方法较多,通过实践,笔者发现家禽采用翅下静脉采血、小猪采用卧式采血、中猪和大猪采用立式采血以及奶牛采用尾静脉采血的方式,是畜禽应激最小、最为方便的方式。在血清学诊断中应注意采血的时间,需在抗体的高峰期进行血样采集。

在血样采集过程中,应严格遵守无菌操作,针头、血样容器、采血部位须全部消毒。采样人员务必熟练掌握采血技术,选用合适的注射器及针头,做好保定工作,选准采血进针的部位。例如猪的前腔静脉越往头部越浅,但也越细;越靠胸部越粗,但也越深。在采血过程中要掌握好一定的方向、角度和深度,针尖进入血管后应顺着血管的方向向前推进,推偏刺穿血管会引起血肿。

2.血清的制取。血清的制取通常有两种方法:第一种自然析出法,采血后,应使注射器活塞向后拉一两厘米,留血清析出的空隙,并放在30度左右夹角上静置,让血清自然析出,通常温度高血清析出快,夏日一般一个小时血清即可析出;另一种方法是离心法,该方法是立即将注射器内的血液沿容器壁(血清管壁)徐徐注入,不能用力挤,也不能震荡,否则易使红细胞破裂而发生溶血,待容器内的血液凝固后,用离心机4000转5分钟左右离心,上层即是血清,须凝血后再离心,否则离心出来是血浆。

3.血液样品的保存和运送。血清制备后,应4℃冷藏,在24小时内送到实验室。如24小时内不能送达,则将血清置于冰箱-20℃冻存,切记不可反复冻融。样品运输过程中,为避免因剧烈震动使容器破损,样品装入冷藏箱前应铺设衬垫并用柔软的东西互相隔开防止碰撞,而且要保持温度在必要的范围内(通常加入冰袋)。需要注意的是所有盛装送检样品的容器,应贴上可防止因各种原因(冷冻、挤碰等)脱落的标签,同时填完整采样单,标明采样时间、地点、编号和样品名称、畜禽品种、免疫情况等。

二、实验室血清学诊断

1.试剂、器具的选择。在血清学诊断中的试剂要选择有批文批号的,并注意试剂的有效期。特别要注意的是诊断试剂的有效期通常比较短,甚至有的有效期只有3个月。化学试剂应主要选择分析纯,并注意试剂的保存方法。

另外,移液器量程的选用也要注意,因为其准确性直接影响实验结果。选用最大量程与所量体积最为接近的移液器,误差会较小。

在血清学检测中经常会用到96孔血凝板,通常猪瘟的间接血凝试验选用110度V型板,而禽流感和新城疫的血凝试验选用90V型度板,因为在同等时间内不同型号的板血沉降效果是不同的。

2.实验室仪器的校正。在血清学诊断中,常用的仪器有电子天平、水浴锅、酶标仪、纯水器、灭菌锅、移液器和恒温箱。电子天平应注意在第一次使用、长时间未使用、天平移动位置和天气温差变化等情况下都要做校准,才能保证结果的准确性。应经常检查水浴箱温度计所示的温度和水中(或温箱内)实测温度是否一致,允许有±1℃的误差。对酶标仪应经常维护其光学部分,防止滤光片霉变,定期检测校正,使其保持良好的工作性能,因为不同试剂盒要求采用不同的波长。纯水器应注意器滤芯、反渗透膜和纯化柱子是否超出使用寿命,如果失效,立即更换,否则影响纯水的质量。灭菌锅的安全阀、温度表、压力表要定期校验,以确保设备的安全和正常使用。移液器可用分析天平称量所取纯水的重量并计算的方法,来校正取液量。恒温箱的电动机轴承应每半年加油一次,经常检查恒温箱所示的温度和温箱内实测温度是否一致。

3.实验室操作的规范。实验室操作的规范性,直接影响着实验结果的准确性。在血清学诊断中,一是应注意所用的器皿都要洗净,配好的溶液需要进行灭菌,并注明日期和名称,放置低温或冷冻保存。二是所用的电子仪器设备在使用之前都应提前10分钟打开,让仪器预热,达到最佳的工作状态。三是在移液器的使用时,为获得的较高的精度,吸头最好预先吸取一次样品溶液,然后正式移液;吸液时应保证枪头内没有气泡;每次实验后务必将刻度调整至最大,让弹簧恢复原型以延长移液枪的使用寿命。四是对于所用溶液和试剂,尽量做到取多少用多少,对于取出又未用完的溶液或试剂,绝不能倒回瓶中。五是实验中应注意控制好实验环境温度,通常温度控制在20~25℃,对于特定的实验要控制好相应的实验环境温度。

4.实验室检测中的生物安全。作为基层兽医实验室,一般不从事高致病性病原微生物实验活动,但是在做人畜共患病检测(比如布鲁氏菌病血清学检测)时对实验室工作人员仍有潜在危险,实验室的其他血清学监测的生物安全也有隐患。所以实验室工作人员应提高防护意识,懂得生物安全对自身和环境的重要性,而且在实验时应该做好防护措施。

对于实验室环境应定期或不定期的通过紫外灯或消毒剂进行消毒;每次实验结束后都应对实验室、实验台面进行消毒,废弃物不能随便丢弃,对其消毒后,做统一处理;对于个人,应佩戴好手套、口罩、鞋套和实验服,每次实验结束都要洗净双手。

三、实验室记录

采样记录应一式两份,一份随样品送实验室,一份采样单位备案。通常血清学实验的采样记录,包括以下几方面的内容:畜主的姓名、电话、畜禽场的地址、动物种类、数量、日龄和免疫情况。采样记录单一定要填写详实,因为它对实验结果的分析起着很关键的作用。在实验室血清学诊断中的实验也应做好原始记录,记录应包括:检测时间、样品名称、检测项目、实验方法、实验设备、环境温度和湿度、检查结果以及检查人员等。

四、结语

血清学诊断是基层兽医实验室主要进行的实验,随着畜牧业的发展和疫病谱的变化,基层兽医实验室应该在此基础上,引进各种新设备、新方法、专业人员,开展更多实验,为养殖业服务好,对提高动物疫病监测水平、提升预警预报能力、合理安排疫病防控措施、保证畜产品质量安全有重要意义。

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