陈晓萌* 樊鹏利 秦玉花 赵红卫

（河南省人民医院，河南 郑州 450000）

分子靶向药物索拉菲尼对胃癌细胞株SNU-1增殖的影响

陈晓萌* 樊鹏利 秦玉花 赵红卫

（河南省人民医院，河南 郑州 450000）

目的 研究分子靶向药物索拉菲尼对胃癌SNU-1细胞株的抑制作用。方法 分别以不同浓度索拉菲尼作用于胃癌SNU-1细胞株，采用MTT法分别检测不用浓度药物组对胃癌细胞SNU-1的抑制作用。结果 在相同的药物浓度下，随着作用时间（24 h、48 h、72 h）的延长，索拉菲尼对人胃癌SNU-1细胞的生长抑制作用逐渐增强（P＜0.05），在相同的干预时间，随着药物浓度的增加，索拉菲尼对人胃癌SNU-1细胞的生长抑制作用也逐渐增强（P＜0.05）。结论 索拉菲尼可抑制体外胃癌SNU-1细胞株的增殖，为在临床治疗胃癌提供基础依据。

靶向药物；索拉菲尼；胃癌；抑制作用

胃癌是我国最常见恶性肿瘤之一，其病死率仅次于肺癌排第二位，我国的胃癌病例人数约占世界的1/3［1-2］。目前，胃癌的治疗手段主要有3种，外科手术、放化疗及生物学治疗。但对于大多数临床Ⅱ、Ⅲ期胃癌患者的5年生存率低于40%，而Ⅳ期胃癌患者的平均生存时间仅为10个月［3］。随着医学技术的不断提高，与细胞信号转导相关的细胞生长、细胞凋亡、细胞坏死、血管形成和侵袭转移等特征不断被人们所揭示，专家学者们通过细胞信号传导发现了新的细胞靶向治疗药物。目前，临床上经常应用靶向治疗药物主要有EGFR酪氨酸激酶抑制剂（EGFR-TKIs）、抗血管生成药、细胞周期抑制剂和促凋亡剂等。本实验观察索拉菲尼对体外人胃癌细胞株SNU-1的抑制作用，以期为临床分子靶向药物治疗胃癌提供实验依据。

1　材料与方法

1.1 试验材料：人胃癌SNU-1细胞株购于上海拜力生物科技有限公司。RPMI1640培养基（北京索来宝生物科技有限公司），HyClone胎牛血清（北京赛默飞世尔生物化学制品有限公司），MTT美国（Sigma公司），磷酸盐缓冲液PBS（参照《细胞培养》配制），碘化丙啶PI染色液（美国Sigma公司）。

1.2 试验方法

1.2.1 细胞培养：将胃癌细胞系SNU-1复苏后，加入含10%新生小牛血清的RPMI 1640培养液（含青霉素100 U/mL，链霉素100 U/mL），于5% CO2培养箱中37 ℃静置培养，传代时采用0.25%胰酶消化，每5 d传代1次，长至对数生长期。

1.2.2 试验分组：实验分为3组，索拉菲尼药物组，药物浓度分别为1.5、3.0、6.0、12.0 µmol/L；空白对照组，不加细胞，只加等量的培养基；阴性对照组，加细胞，再加相应等量的培养基，不加干预药物。各组设5个复孔。

1.2.3 MTT法测定人胃癌SNU-1细胞的增殖情况：取对数生长期的人胃癌SNU-1细胞制成单细胞悬液，调整密度为2×105个/毫升将细胞悬液接种于96孔板内，按照1.2.2的分组进行加药，每种浓度都设置5个复孔；同时阴性对照孔（只含细胞和培养液），空白对照孔（只含培养液），于37 ℃、5%CO2及饱和湿度条件下常规培养24 h、48 h、72 h后，每孔加入新鲜配制的2 mg/mL的MTS 15 μL，继续培养2 h，终止培养。在酶联免疫吸附仪上检测492 nm波长处的各孔的吸光度（A）值（每组独立重复3次），实验取平均值，按下列公式计算肿瘤细胞生长抑制率：细胞生长抑制率（%）=（1-实验组A值/对照组A值）×100%。

1.3 统计方法：所有实验数据均采用SPSS13.0软件进行统计分析，计量资料数据以±s）表示，多组比较时，方差齐者，采用单因素的方差分析，P＜0.05表示有显著性差异。

2　结　果

根据实验和统计结果显示，在相同的药物浓度下，随着作用时间（24 h、48 h、72 h）的延长，索拉菲尼对人胃癌SNU-1细胞的生长抑制作用逐渐增强（P＜0.05），在相同的干预时间，随着药物浓度（1.5 μmol/Lsorafenib，3.0 µmol/Lsorafenib，6.0 µmol/Lsorafenib，12 µmol/Lsorafenib）的增加，索拉菲尼对人胃癌SNU-1细胞的生长抑制作用也逐渐增强（P＜0.05）。见表1。

表1 不同浓度索拉菲尼在不同作用时间对胃癌SNU-1细胞的影响±s）

表1 不同浓度索拉菲尼在不同作用时间对胃癌SNU-1细胞的影响±s）

注：a.索拉菲尼不同作用时间各组间比较，P＜0.05；b.不同药物浓度各组间比较，P＜0.05

药物浓度（μmol/mL）　　抑制率（%）24 ha　48 ha　72 ha空白对照　1.24±0.36　2.04±0.84　2.57±1.58阴性对照　1.99±0.87　2.11±1.43　2.94±1.09 1.5　17.65±5.89b　23.39±6.84b　29.45±8.61b3 26.25±7.14b　30.91±6.87b　39.84±10.22b6 29.63±10.34b　39.59±8.74b　46.75±16.83b12　38.61±9.78b　49.65±15.71b　61.21±15.96b

3　讨　论

索拉菲尼是一种新型的靶向制剂药物，该药在上市前临床研究及上市后临床应用均显示出了较好的靶向抗肿瘤作用，疗效确切。具体作用机制为抑制Raf激酶和受体酪氨酸激酶的合成，抑制肿瘤细胞的活化和增殖，抑制肿瘤组织微血管形成［4-5］。通过动物实验研究显示，索拉非尼对多种癌细胞的增殖均具有良好的抑制作用，包括小鼠肾细胞癌、结肠癌、胰腺癌、甲状腺癌和卵巢癌模型等。

索拉菲尼通过对两种受体的酪氨酸激酶活性起到抑制作用，进而阻断了肿瘤新生微血管的形成，并能够阻断肿瘤细胞对营养成分的摄取，从而间接的抑制了肿瘤细胞的增殖和生长。有研究表明［6］，索拉菲尼对MAPK信号传导系统具有较好的抑制作用，尤其是对带有致癌的K-ras和（或）b-raf突变体的肿瘤细胞。Liu等［7］亦证明索拉菲尼通过下调抗凋亡蛋白Mcl-1的表达水平以及降低ELF4的磷酸化水平，进而可有效的阻断肝癌细胞株PLC/PRF/5中Raf/MEK/ERK信号传导通路，促进肿瘤细胞凋亡和坏死。国内亦有研究表明［8］，索拉菲尼可通过抑制肝癌细胞自噬而起到良好的抗肿瘤作用。

多条信号通路的过度活化导致了正常细胞的病变，进而进展为恶性肿瘤。由于这些信号通路之间彼此形成的网络较为复杂，因此，多靶点多环节调控与胃癌的病理发生与发展密切相关。目前临床中大部分靶向治疗药物多针对一个靶点进行治疗和发挥效应，而信号传导机构又是一个复杂的、多重的网络体系，因此，临床及研究中应注重多靶点分子靶向药物对于肿瘤的治疗，这也势必是肿瘤分子靶向治疗的重要发展方向。

本研究结果发现：1.5～12 µmol/L浓度的索拉菲尼对胃癌SNU-1细胞具有显著的增殖抑制作用，并呈现明显的剂量和时间双效应。同时表明索拉菲尼对SNU-1胃癌细胞具有良好的抑制增殖和促进坏死、凋亡的作用。

［1］ Mina S，Bohn BA，Simon R，et al.PTEN deletion is rare but often homogeneous in gastric cancer［J］.Clinical Pathology，2012，65（8）: 693-698.

［2］ Zhu XH，Qin X，Fei MG，et al.Loss and reduced expression of PTEN correlate with advanced stage gastric carcinoma［J］.Experimen Therapeu Med，2013，5（1）: 57-64.

［3］ Roukos DH.Targeting gastric cancer with trastuzumab: new clinical practice and innovative developments to overcome resistance［J］. Ann Surg Oncol，2010，17（1）:14-17.

［4］ Wilhelm SM，Carter C，Tang L，et al.BAY 43-9006 exhibits broad Spectrum oral antitumor activity and targets the RAS/RAF/MEK/ ERK pathway and receptor tyrosine kinases involved in tumor progression and angiogenesis［J］.Cancer Res，2004，64（19）:7099-7109.

［5］ Strumberg D.Preclinical and clinical development of the oral multikinase inhibitor sorafenib in cancer treatment［J］.Drugs Today（Barc），2005，41（12）:773-784.

［6］ Wilhelm SM，Carter C，Tang L，et al.BAY 43-9006 exhibits broad spectrum oral antitumor activity and targets the RAS/RAF/MEK/ ERK pathway and receptor tyrosine kinases involved in tumor progression and angiogenesis［J］.Cancer Res，2004，64（19）:7099-7109.

［7］ Liu L，Cao Y，Chen C，et al.Sorfenib blocks the RAF/MEK/ERK pathway，inhibits tumor angiogenesis and induce tumor cell apoptosis in hepatocellular carcinoma model PLC/PRF/5［J］.Cancer Res，2006，66（24）:l1851-11858.

［8］ 孙广伟，邱伟华，施敏敏，等.索拉菲尼对肝癌细胞HepG2自噬的抑制作用［J］.外科理论与实践，2010，15（1）:51-55.

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1671-8194（2015）15-0057-02