曾 红，宋明霞，梁兆昌，邓先清，黄玉珊



井冈山产厚朴总生物碱含量分析

曾 红，宋明霞，梁兆昌，邓先清，*黄玉珊

（井冈山大学医学院，江西，吉安 343009）

目的 分析评价井冈山产厚朴不同部位总生物碱含量。方法 采用高氯酸滴定法对井冈山产同一植株厚朴的干皮、枝皮、根皮、花、叶部位的总生物碱含量进行测定，同时比较了厚朴干皮、枝皮、根皮生品和炮制品生物碱含量。结果 厚朴干皮、枝皮、根皮、花、叶总生物碱含量分别为4.6053 ± 0.0814、5.4734 ± 0.1047、6.5940 ± 0.0715、7.9546 ± 0.0686、7.2220 ± 0.0776mg/g，炮制品生物碱含量较生品低。结论 同一植物厚朴花中生物碱含量最高，而传统入药部位干皮中最低，且厚朴皮应以生品入药。

厚朴；生物碱；含量分析

厚朴（Magnolia officinalis Rehd et Wils.）是常用的中药品种之一，始载于《神农本草经》，以皮入药，具有燥湿消痰、下气除满之功效，用于湿滞伤中、脱痞吐泻、食积气滞、腹胀便秘、痰饮喘咳[1]。生物碱广泛地分布于豆科、茄科、防己科、罂粟科等双子叶植物中，具有镇痛、消炎、降压和抗癌等多种药理活性[2]。厚朴中主要含厚朴酚、和厚朴酚，而生物碱是其次要成分。以乙醇为溶剂提取厚朴总生物碱，可提高生物碱得率并能缩短提取时间[3]。晏仁义[4]、王洪燕[5]等从厚朴中分离得到了生物碱成分，杨红兵[6]等采用非水滴定法对湖北恩施产同一植株厚朴干皮、枝皮、根皮中生物碱含量进行分析，发现根皮含量最高，干皮最低。传统厚朴炮制有文帮和武帮两种炮制工艺[7]，均是主要采用姜炙的方法，而采用生姜炮制比干姜炮制有效成分含量更高[8]。研究表明生物碱是厚朴的药效成分之一，具有肌肉松弛、降压、松弛气管平滑肌[9]、抑菌[10]等药理作用。厚朴传统以皮入药，但皮生长期较长，需15~20年方可入药，且剥皮后树即死去不可再生。

生物碱是厚朴植物的次生代谢物，一种植物体内多有数种或数十种生物碱共存，厚朴其它部位是否如皮一样含有生物碱？目前对厚朴的替代研究较少，本研究拟对厚朴不同部位的生物碱含量进行分析，寻找厚朴皮的替代部位，有助于资源的可持续利用，以期为更好地开发利用厚朴提供参考。

井冈山自然保护区地处罗霄山脉中段，是赣江和湘江两大水系的分水岭。区内山体陡峭，海拔280~1600 m，地形复杂。属亚热带温暖润湿气候，是江西日照最短、雨量最多、湿度最大的地方。井冈山自然保护区管理处与药材部门合作，种植了大批厚朴，此外在井冈山长坪、下七、黄坳、大小五井、荆竹山等村庄，各农户房前屋后、庭园内外都有种植。为深入系统研究井冈山产厚朴的质量情况，我们课题组在井冈山自然保护区采集了30年生厚朴干皮、根皮、枝皮、叶、花，对其不同部位的生物碱类含量进行了初步定量研究。

1　材料

1.1仪器与试药

FA1004N型电子天平（上海菁海仪器有限公司）；高氯酸、冰醋酸、醋酐、结晶紫均为分析纯，由上海化学试剂总厂生产。

1.2药材来源

实验选取30年生厚朴6株，于2013年6月采自江西井冈山自然保护区，经鉴定为木兰科植物厚朴。其中干皮采用环剥法采割，枝皮和根皮分别剥取同一株厚朴的树枝和树根的皮，厚朴花为2013年4月采摘的厚朴未开花花蕾，厚朴叶2013年6月采摘，以上样品放于通风干燥处阴干待用。

2　方法

2.1 厚朴皮炮制方法

分别取厚朴干皮、枝皮、根皮，刮去其表面粗皮，切段，阴干。取厚朴段，加生姜汁拌匀，不断翻动，放置过夜使吸透，用文火炒干得厚朴炮制样品。生姜汁和厚朴生品比例为1:10。

2.2 高氯酸标准液的配制与标定

(1)取冰醋酸（99%）500 mL加醋酐27.43 mL振摇。

(2)0.1 mol/LHClO4-HAc标准溶液的配制

取70%~72%的HClO4约4.25 mL，缓缓加入（1）中所配制的冰醋酸375 mL，混合均匀，缓缓滴入醋酐12 mL，边加边摇，加完后振摇均匀，冷至室温，加适量无水冰醋酸稀释成500 mL，摇匀，于棕色瓶放置24 h后标定浓度。

取105 ℃干燥至恒重的邻苯二甲酸氢钾约0.12 g，精密称定，置于干燥锥形瓶中，各加入20~25 mL冰醋酸使溶解，滴加结晶紫指示剂1滴，用0.1 mol/L HClO4-HAc溶液滴定至颜色由紫色变为蓝色为终点。另取冰醋酸20mL，按上述操作进行空白试验校正。

CHClO4＝

(＝204.23 g/mol)

2.2 非水溶液滴定法

依照《中国药典》2005年版一部“附录ⅧB”，非水溶液滴定法项下“第一法”测定。取待测样品粉末(通过四号筛) 0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20 mL，称定重量，摇匀，室温放置过夜(16小时以上)，再称定重量，补足损失的溶剂量，振摇后放置，用滤纸滤过。精密量取续滤液10 mL，旋转蒸干，浸膏加无水冰醋酸15 mL使溶解，加结晶紫指示液1滴，样品颜色变为红褐色，用高氯酸滴定液 (0.02 mol/L)滴定至颜色由红褐色到绿色为准，即得。样品以木兰箭毒碱C19H24NO3（m314.3982）计算生物碱含量[6]。0.02 mol/L高氯酸滴定液对木兰箭毒碱的滴定度T为6.29 mg/mL。

3 结果

3.1 厚朴干皮、枝皮、根皮、叶、花生物碱含量分析结果

表1 厚朴不同部位总生物碱含量比较(n = 6)

实验分别对6株厚朴同一植株的干皮、枝皮、根皮、叶、花等不同部位的生物碱含量做了非水溶液滴定，各平行6次实验。由表1可知，同一厚朴株，厚朴不同部位生物碱含量中以花的最高，干皮的最低。

3.2 厚朴干皮、枝皮、根皮生品与炮制品生物碱含量分析结果

表2 厚朴生品与炮制品总生物碱含量比较(n = 6)

由表2可知，厚朴干皮生品经炮制后生物碱含量大约下降了1.4（mg/g），厚朴枝皮生品经炮制后生物碱含量大约下降了1.11（mg/g），厚朴根皮生品经炮制后生物碱含量大约下降了1.15（mg/g）。说明使用生姜炮制厚朴后会降低厚皮生物碱含量，可能是在后期文火炒干时加热破坏了厚朴部分有效成分的原因。

4 讨论

目前，生物碱含量测定方法主要有：滴定法、薄层扫描法、分光光度法、高效液相色谱法、毛细管电泳法等。虽然滴定法灵敏度不高，但操作简便成本低，且准确性和稳定性好，是测定生物碱的经典方法。本研究中测定的是厚朴中总生物碱的含量，因有些生物碱碱性太弱，在水中不能准确滴定，一般采用非水滴定法来滴定。

由上面测定数据可知，井冈山产厚朴同一植株不同部位总生物碱含量高低依次为：厚朴花＞厚朴叶＞厚朴根皮＞厚朴枝皮＞厚朴干皮。其中厚朴花的生物碱的含量达到7.9546 ± 0.0686 mg/g，其它部位的生物碱的含量也要高于干皮。厚朴干皮、枝皮、根皮皮生品经生姜炙后生物碱含量均有所下降，故从生物碱角度考虑，应以生品入药。文献研究发现厚朴中生物碱成分主要为木兰箭毒碱、木兰花碱等异喹啉类生物碱，该类生物碱也是厚朴中的主要药效成分。具有兴奋胃肠平滑肌、降压、横纹肌松弛等药理活性，对厚朴中生物碱成分的研究具有很大的实用价值。

厚朴是国家二级重点保护野生植物，为多年生落叶乔木，生长周期长，一般要生长十多年才能供剥皮药用。现今厚朴药材的来源是伐树剥皮，为掠夺式取材，不利于环境和资源的可持续利用。而厚朴花、厚朴叶、厚朴枝皮含有比传统入药部位厚朴皮更多的生物碱，且一年四季可采，资源十分丰富。从药用成分为生物碱的角度出发，厚朴枝皮、根皮、花、叶是可以替代厚朴干皮入药的。研究结果对厚朴药用资源的保护和综合利用，提高厚朴的药用价值，缓解厚朴药林矛盾等具有重要的意义。

参考文献：

[1] 中国药典委员会.中华人民共和国药典:一部[M].北京:化学工业出版社,2005: 176.

[2] 姚新生,吴立军,吴继洲,等. 天然药物化学[M]. 北京: 人民卫生出版社, 2006:352,441-443.

[3] 范家佑,张松竹. 黄柏中总生物碱的提取工艺优化[J]. 井冈山大学学报:自然科学版,2010,31(5):112-117.

[4] 晏仁义,郭建,刘红亮,等. 厚朴生物碱成分研究[C].中国化学会第9届天然有机化学学术会议, 2012.

[5] 王洪燕,周先礼,黄帅,等. 凹叶厚朴中生物碱成分的研究[J]. 华西药学杂志,2007,22(1):30-33.

[6] 杨红兵,石磊,詹亚华,等. 湖北恩施产厚朴的生物碱定量分析[J]. 湖北中医学院学报,2007,9(2):28-29.

[7] 甘友清,张南方. 厚朴的传统炮制方法[J]. 河南中医, 2013,33(10):1798.

[8] 邓治国. 生姜与干姜炮制厚朴的比较研究[J]. 中国药业,2013,22(18):29-30.

[9] 朱元元,封志平,徐长超,等. 厚朴总生物碱对豚鼠离体气管平滑肌的影响[J]. 中草药,2009,40(S1):190-193.

[10] 殷帅文,钱文,朱峰,等. 凹叶厚朴不同溶剂提取物对几种植物病原菌的抑制活性[J]. 江苏农业科学,2009(1): 106-108.

ANALYSIS OF TOTAL ALKALOID CONTENT OFFROM JINGGANGSHAN

ZENG Hong,SONG Ming-xia, LIANG Zhao-chang, DENG Xian-qing,*HUANG Yu-shan

(School of Medicine, Jinggangshan University, Ji’an, Jiangxi 343000, China)

Objective: To analyze and evaluate the total alkaloid content of different parts offrom Jinggangshan. Methods: The total alkaloids of trunk, branch skin, root bark, flowers, leaves from the same plant were determined by using perchloric acid titration, and the contents of different parts of the plant and processed product were compared. Results: The total alkaloid contents of each part were 4.6053 ± 0.0814, 5.4734 ± 0.1047, 6.5940 ± 0.0715, 7.9546 ± 0.0686, 7.2220 ± 0.0776 mg/g respectively. The alkaloid content of processed products was lower than that of the fresh. Conclusion: The alkaloid content of the flowers was the highest in the same plant of, but the lowest for the traditional part trunk. It was suggest that the freshshould be used as medicine.

; alkaloids; content analysis

1674-8085(2015)01-0100-03

R284.1

A

10.3969/j.issn.1674-8085.2015.01.021

2014-11-10；修改日期：2014-12-26

国家科技支撑计划项目子课题项目(2012BAC11B02-6)；吉安市科技局科技计划项目(吉市科技字[2013]18号3)

曾 红(1982-），女，湖南益阳人，讲师，硕士，主要从事天然产物活性成分研究( E-mail: 66562768@qq.com);

宋明霞(1983-），女，山西介休人，讲师，博士，主要从事药物合成研究(E-mail:280799335@qq.com);

梁兆昌(1962-），男，江西吉安人，教授，主要从事中药炮制研究(E-mail:2433863291@qq.com);

邓先清(1984-），男，湖南衡阳人，讲师，博士，主要从事药物合成研究(E-mail:270260257@qq.com);

*黄玉珊(1976-），女，江西吉安人，副教授，博士，主要从事循证药学研究(E-mail:3218680@qq.com).